Feinanalyse des Cyclin-B2-Promotors:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG.
1
1.1
DER
ZELLZYKLUS
.
1
1.2
ZELLZYKLUSREGULATION
.
2
1.2.1
ZELLZYKLUSMASCHINERIE
.
3
1.22CYCLINB
.
4
1.2.3
TRANSKRIPTIONSKONTROLLE
.
5
1.2.4
ZELLZYKLUSABHAENGIGE
TRANSKRIPTION
VON
CYCLIN
B2
.
6
1.3
AUFGABENSTELLUNG
.
8
2.
MATERIAL.^.
.
9
2.1
BEZUGSQUELLEN
.
9
2.1.1
CHEMIKALIEN
.
9
2.1.2
ENZYME
.
9
2.1.3
CHEMIKALIEN-ZUSAMMENSTELLUNGEN
(KITS)
.
9
2.1
4
VERBRAUCHSMATERIAL
.
10
2.1.5
GERAETE
.
10
2.2
PRIMER
.
10
2.2.1
AUSSENPRIMER
.
10
2.2.2
INNENPRIMER
.
11
2.2.3
SEQUENZIERPRIMER
.
12
2.3
VEKTOREN
.
12
2.3.1
PGL3-BASIC
.12
2.3.2
PRL-NULL
.
12
2.3.3
PCDNA3.1/HISC
.13
2.4
BAKTERIENSTAMM
.
13
2.5
ZELLLINIE
.
13
3.
METHODEN
.
14
3.1
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
.
15
3.1.1
MUTAGENESE
DURCH
UEBERLAPPENDE
PCR
.
16
3.1.2
ANALYTISCHE
UND
PRAEPARATIVE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
18
3.1.3
DNA-EXTRAKTION
AUS
AGAROSEGELEN
.
19
3.1.4
ETHANOLFAELLUNG
.
20
3.2
KLONIERUNG
.
21
3.2.1
RESTRIKTIONSENZYMVERDAU
.
21
3.2.2
PLASMID-LIGATION
.
22
3.2.3
PRAEPARATION
KOMPETENTER
E.
COLI
MIT
DER
CALCIUMCHLORID-METHODE
.
22
3.2.4
PLASMID-TRANSFORMATION
.
23
3.2.5
PLASMID-ISOLATION:
MINIPRAEPARATION
.
24
3.2.6
IDENTIFIKATION
REKOMBINANTER
PLASMIDE
MIT
RESTRIKTIONSANANLYSE
.
25
3.2.7
DNA-SEQUENZIERUNG
.
25
3.2.8
HERSTELLUNG
VON
GLYCERINDAUERKULTUREN
.
25
3
2.9
PLASMID-ISOLATION:
MIDIPRAEPARATION
.
26
3.2.1
BESTIMMUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
.
26
3.3
ZELLKULTUR
.
28
3.3.1
KULTIVIERUNG
DER
NIH
3T3-ZELLEN
.
28
3.3.2
AUFTAUEN
UND
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
.
29
3.3.3
TRANSFEKTION
.
29
3.3.4
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
.
29
3.3.5
STABILE
TRANSFEKTION
.
30
3.3.6
SYNCHRONISATION
DER
NIH
3T3-ZELLEN
.31
3.4
LUCIFERASE-ASSAY.
.
33
3.5
FACS-ANALYSE
(FLUORESCENCE
ACTIVATED
CELL
SORTER)
.
35
3.6
STATISTIK
.
36
4.
ERGEBNISSE
.
37
4.1
KLONIERUNG
DER
CYCLIN
B2-PROMOTORMUTANTEN
.
39
4.2
ZELLZYKLUSANALYSE
DER
PROMOTORKONSTRUKTE
.
45
4.2.1
EINFLUSS
DER
PUNKTMUTATIONEN
AUF
DIE
PROMOTORAKTIVITAET
IM
ZELLZYKLUS
TRANSIENT
TRANSFIZIERTER
ZELLEN
.
45
4.2.2
EINFLUSS
DER
PUNKTMUTATIONEN
AUF
DIE
PROMOTORAKTIVITAET
IM
ZELLZYKLUS
STABIL
TRANSFIZIERTER
ZELLEN
.
49
4.2.3
AKTIVITAETSVERGLEICH
DER
PROMOTORKONSTRUKTE
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
DER
ART
DER
INTEGRATION
.
52
4.3
FACS-ANALYSE
.
54
4.4
IDENTIFIKATION
DER
BINDUNGSNUKLEOTIDE
.
57
5.
DISKUSSION
.
59
5.1
VERGLEICH
DER
CDE/CHR-REGIONEN
VERSCHIEDENER
PROMOTOREN.
.
63
5.2
EINFLUSS
DER
DNA-STRUKTUR
AUF
DIE
ZELLZYKLUSREGULATION
.
67
5.3
ZUSAMMENFASSENDE
ERGEBNISSE
ZU
DER
TRANSKRIPTIONSREGULATION
DES
CYCLIN
B2
PROMOTORS
DER
MAUS
.
68
5.4
AUSBLICK
.
69
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
70
LITERATURVERZEICHNIS
.
I
ANHANG
.
VHI
ABKUERZUNGEN
.
XII
ERKLAERUNG
UEBER
DIE
EIGENSTAENDIGE
ABFASSUNG
DER
ARBEIT
.
XM
LEBENSLAUF.
.
XIV
DANKSAGUNG
.
XV
VERZEICHNIS
DER
WISSENSCHAFTLICHEN
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
.XVI |
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