Untersuchungen zur vaskulären Expression und Funktion der löslichen Guanylatzyklase bei Hypercholesterinämie:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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| adam_text | Titel: Untersuchungen zur vaskulären Expression und Funktion der löslichen Guanylatzyklase bei Hyperchole
Autor: Laber, Ute
Jahr: 2003
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
I EINLEITUNG 1
1.1 Atherosklerose 1
1.1.1 Aufbau und Funktion einer normalen Arterienwand 1
1.2 Einleitung und Definition der Atherosklerose 3
1.2.1 Theorien zur Entstehung der Atherosklerose 3
1.2.1.1 Thrombogene Inkrustation 3
1.2.1.2 Verletzungsreaktion 4
1.2.1.3 Lipidhypothese 4
1.2.1.4 Monoklonale Hypothese 4
1.2.1.5 Endothelläsionstheorie 4
1.2.1.6 Theorie der Zell-Zell-Interaktionen 6
1.2.1.7 Theorie der verminderten lysosomalen Aktivität 6
1.2.1.8 Theorie der LDL-Rezeptor - Regulation 7
1.2.1.9 Infektion mit Chlamydien 8
1.3 Klinik und Verlauf der Atherosklerose 9
1.3.1 Prädilektionsstellen 9
1.3.2 Entwicklung der Atherosklerose 9
1.3.3 Risikofaktoren 12
1.3.4 Symptomatik und Diagnostik 14
1.4 Tiermodelle der Atherosklerose 15
1.4.1 Modell des weißen Neuseeländer Kaninchens 15
1.4.2 Sonstige Tiermodelle 16
2.0 Guanylatzyklase 18
2.1 Einführung 18
2.2 Struktur 18
2.3 Regulation 20
2.4 Funktion und Wirkmechanismus 21
II FRAGESTELLUNG 23
Inhaltsverzeichnis
II» MATERIAL UND METHODEN 24
3.1 In vivo Kaninchenstudie 24
3.1.1 Versuchstiere 24
3.1.2 Tierhaltung 24
3.1.3 Tierdiät 25
3.1.4 Fütterungsprotokolle und Gruppeneinteilung 25
3.1.5 Blutentnahme 26
3.1.6 Bestimmung des Serumcholesterins 26
3.1.7 Präparation der Aortensegmente 27
3.2 Organbadversuche 29
3.3 Präparation von Aortenzytosolen 34
3.3.1 Aufarbeitung der Aortensegmente und Präparation
der zytosolischen Fraktion 34
3.3.2 Aufreinigung der Proben 34
3.3.3 Bestimmung des Proteingehaltes 36
3.4 Untersuchungen der Guanylatzyklase 37
3.4.1 Expressionsanalyse der a- und ß-Untereinheit mittels Western Blot. 37
3.5 Substanzen und Lösungen 38
3.6 Berechnung und Statistik 44
IV ERGEBNISSE 45
4.1 Körpergewichte der Kaninchen 45
4.2 Serumcholesterin 47
4.3 Funktionelle Untersuchungen der Guanylatzyklase 49
4.3.1 Studie A 49
4.3.2 Studie B 51
4.3.2.1 Endothelabhängige Relaxation 51
4.3.2.2 Wirkung spontaner NO-Donatoren 54
4.3.2.3 Gefäßwirkung von Nitraten 57
4.3.2.4 Vasokonstriktion 60
4.4 Proteingehalte 64
Inhaltsverzeichnis
4.5 Expression der Guanylatzyklase 67
4.5.1 Expression der ßrUntereinheit in Studie A 67
4.5.2 Expression der ßrUntereinheit in Studie B 69
4.5.3 Expression der arUntereinheit in Studie B 71
V DISKUSSION 73
5.1 Diskussion der Methoden 73
5.1.1 Tiermodell 73
5.1.2 Organbad 74
5.1.2.1 Vasokonstriktion 74
5.1.2.2 Endothelabhängige Vasorelaxation 76
5.1.2.3 Vasodilatation durch spontane NO-Donoren 76
5.2 Diskussion der Ergebnisse 77
5.2.1 Expression der löslichen Guanylatzyklase 77
5.2.2 Funktion der löslichen Guanylatzyklase 79
5.3 Möglicher Pathomechanismus 82
VI ZUSAMMENFASSUNG 83
VII LITERATURVERZEICHNIS 85
VIII TABELLARISCHER ANHANG
Protokolle der Organbadversuche 101
Persönliches Literaturverzeichnis
Lebenslauf
Danksagung
Inhaltsverzeichnis
Tabellenverzeichnis
Tabelle 1.1 Risikofaktoren erster und zweiter Ordnung
für die Entwicklung der Atherosklerose 12
Tabelle 1.2 Stimulatoren und Inhibitoren der löslichen Guanylatzyklase 21
Tabelle 4.1 Serum-Cholesterin-Spiegel während der Fütterungsphase
in Tierstudie B 47
Tabelle 4.2 Vasodilatatorische Wirkung von Acetylcholin 51
Tabelle 4.3 Vasodilatatorische Wirkung von SNAP 54
Tabelle 4.4 Vasodilatatorische Wirkung von ISMN 57
Tabelle 4.5 Vasokonstriktorische Kräfte von KCI 60
Tabelle 4.6 Maximale vasokonstriktorische Kräfte von Phenylephrin 60
Tabelle 4.7 Halbmaximal wirksame Konzentrationen von Phenylephrin 61
Tabelle 4.8 Proteingehalte der Aortenringe der Studie A 64
Tabelle 4.9 Proteingehalte der Aortenringe der Studie B 66
Tabelle 4.10 Proteinexpression der ßrUntereinheit der Studie A 67
Tabelle 4.11 Proteinexpression der ßrUntereinheit der Studie B 69
Tabelle 4.12 Proteinexpression der arUntereinheit der Studie A 71
Inhaltsverzeichnis
Abbildungsverzeichnis
Abbildung 1.1 Aufbau einer normalen Arterienwand 2
Abbildung 1.2 Entwicklung der Atherosklerose 9
Abbildung 1.3 Struktur der Guanylatzyklase 19
Abbildung 1.4 Molekulare Mechanismen von endogenem
und exogenem NO 22
Abbildung 3.1 Fütterungsschema der Kaninchenstudie A 25
Abbildung 3.2 Fütterungsschema der Kaninchenstudie B 26
Abbildung 3.3 Prinzip der Organbadapparatur 29
Abbildung 3.4 Typischer Kurvenverlauf eines Organbadversuches 33
Abbildung 3.5 Proteinaufreinigung 35
Abbildung 4.1 Gewichtszunahme der Kaninchen der Studie B 46
Abbildung 4.2 Serumcholesteringehalt der Kaninchen der Studie B 48
Abbildung 4.3 Wirkung von SNAP auf Aortenringe der Studie A 49
Abbildung 4.4 SNAP-Konzentration, die eine halbmaximale
Vasorelaxation induziert 50
Abbildung 4.5 Endothelabhängige Relaxation SD16B vs. CD16B
mit intaktem Endothel 52
Abbildung 4.6 Endothelabhängige Relaxation SD16B vs. CD16B
mit entferntem Endothel 53
Abbildung 4.7 Wirkung von SNAP in SD16B und CD16B
mit intaktem Endothel 55
Abbildung 4.8 Wirkung von SNAP in SD16B und CD16B
mit entferntem Endothel 56
Abbildung 4.9 Wirkung von ISMN in SD16B und CD16B
mit intaktem Endothel 58
Abbildung 4.10 Wirkung von ISMN in SD16B und CD16B
mit entferntem Endothel 59
Abbildung 4.11 Wirkung von Phenylephrin in SD16B und CD16B
mit intaktem Endothel 62
Inhaltsverzeichnis
Abbildung 4.12 Wirkung von Phenylephrin in SD16B und CD16B
mit entferntem Endothei 63
Abbildung 4.13 Verteilung der Proteingehalte in Studie A 65
Abbildung 4.14 Verteilung der Proteingehalte in Studie B
vor und nach Aufreinigung 66
Abbildung 4.15 Westernblot der ßi-Untereinheit in Studie A 68
Abbildung 4.16 Relative Dichte der ßrSignale in Studie A 68
Abbildung 4.17 Westernblot der ßi-Untereinheit in Studie B 70
Abbildung 4.18 Relative Dichte der ßrSignale in Studie B 70
Abbildung 4.19 Westernblot der cci-Untereinheit in Studie B 72
Abbildung 4.20 Relative Dichte der ai-Signale in Studie B 72
Abbildung 5.1 Möglicher Mechanismus für die erhöhte Expression
einer dysfunktionalen sGC 82
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