Zytoskelettveränderungen bei NRK- und MDCK-Zellen unter dem Einfluß der Migrationsfaktoren HGF-SF und MACMF:
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2004
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Seite
Inhaltsverzeichnis 01
Abkürzungsverzeichnis 03
1. Einleitung 05
2. Material und Methoden 13
2.1 Zellinien 13
2.1.1 Produzentenzellinien 13
2.1.2 Indikatorzellinien 13
2.2 Zellkultur 14
2.2.1 Monolayer-Zellkultur 14
2.2.2 Konditionierung von Zellkulturmedium 15
2.2.3 Zellkonservierung 15
2.2.4 Zellkulturmedium 16
2.2.5 Phosphatpuffer 16
2.2.6 Trypsinlösung 16
2.3 Scatterassay 16
2.4 Immunfluoreszenzuntersuchung 17
2.4.1 Zellvorbereitung 17
2.4.2 Präparateherstellung 17
2.4.3 Herstellung des Mounting-Mediums 18
2.5 Westernblot 19
2.5.1 Zellvorbereitung und Extraktion zellulärer Proteine 19
2.5.2 Quantitative Proteinbestimmung 21
2.5.3 SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese von Proteinen 21
2.5.4 Proteintransfer 24
2.5.5 Anfärben der immobilisierten Proteine auf der Membran
mit Ponceau S-Lösung 25
2.5.6 Immunoblotting 25
1
i
3. Ergebnisse 28
3.1.1 Nachweis einer Scatteraktivität im MACMF-haltigen
Zellkulturüberstand der Zellinie HH-16 cl.4 28
3.1.2 Nachweis einer Scatteraktivität im HGF/SF-haltigen
Zellkulturüberstand der Zellinie MRC 5 28
3.2 Darstellung verschiedener Zytoskelettstrukturen bei
NRK-Zellen in der Immunfluoreszenz 31
a ß -Tubulin 31
b Vimentin 32
c Aktin 33
d x -Catenin 34
3.3 Westernblotanalyse von Zytoskelettproteinen unter dem
Einfluß der Migrationsfaktoren HGF/SF und MACMF 35
a ß -Tubulin 35
b Tropomyosin 36
c E -Cadherin 37
d x -Catenin 38
4. Diskussion 40
5. Zusammenfassung 47
Literaturverzeichnis 48
2
S
ii
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