Adenoviraler Gentransfer bei hepatozellulärem Karzinom im Rattenmodell:
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adam_text | Adenoviraler Gentransfer bei HCC im Rattenmodell
Inhaltsverzeichnis Seite 1
Inhaltsverzeichnis
A. Einleitung 4
1. Einführung in die Thematik 4
2. Epidemiologie des HCC 5
3. Ätiologie 5
4. Risikofaktoren des HCC 7
4.1. Hepatitis-B-Virus (HBV)-Infektion 7
4.2. Hepatitis-C-Virus (HCV)-Infektion 7
4.3. Aflatoxine 8
4.4. Alkohol 9
4.5. Hämochromatose 9
4.6. Weitere Risikofaktoren 9
5. Klinik des HCC 9
6. Diagnostik 11
6.1. Laborchemische Untersuchungen 11
6.2. Sonographie 11
6.3. Computertomographie (CT) 11
6.4. Magnetresonanztomographie (MRT) 12
6.5. Leberbiopsie 12
7. Therapeutische Optionen 12
7.1. Leberresektion, Lebertransplantation 12
7.2. Perkutane Alkoholinjektion (PEI) 13
7.3. Transarterielle Chemoembolisation (TACE) 13
7.4. Kryochirurgie 14
7.5. Thermoablation und Radiofrequenz (RF)-Ablation 14
7.6. Systemische Chemotherapie 15
7.7. Systemische Hormontherapie 15
7.8. Systemische Immuntherapie 16
7.9. Gentherapie 16
7.9.1. Retrovirale und adenovirale Vektoren 18
7.9.2. Suizidgentherapie 19
7.9.2.1. Suizidgentherapie bei HCC 20
B. Material und Methoden 22
1. Material 22
1.1. Chemikalien 22
1.2. Lösungen, Puffer und Chemikalien für Zellkultur 22
Adenoviraler Gentransfer bei HCC im Rattenmodell
Inhaltsverzeichnis Seite 2
1.2.1. Medium für verschiedene Zelllinien 23
1.2.2. Tris-Puffer 23
1.3. Antikörper für die immunohistochemische Färbung 23
1.4. Adenovirus 23
1.5. Wasser 23
1.6. Weitere Materialien 24
1.7. Geräte 24
1.8. Zelllinien 25
1.9. Tiermodell 25
2. Arbeitsmethoden 25
2.1. Sterilisation 25
2.2. Kultivierung der Tumorzellen MH-7777A 25
2.3. Adenovirus-Präparation und CsCl-Reinigung 26
2.3.1. Prinzip 26
2.3.2. Durchführung 26
2.4. Plaqueassay des Ad.CMV/acZ 27
2.4.1. Prinzip 27
2.4.2. Durchführung 28
2.5. In Wtro-Infektion verschiedener Zelllinien mit Ad.CMV/acZ 29
2.5.1. Prinzip 29
2.5.2. Durchführung 29
2.6. In iwo-Infektion der Ratten mit Ad.CMV/acZ 30
2.6.1. Implantation der MH-7777A Zellen in die Leber der Ratten 30
2.6.1.1. Prinzip 30
2.6.1.2. Durchführung 30
2.6.2. Darstellung des Tumors mit Hilfe der Magnetresonanztomographie (MRT). 31
2.7. Applikation des Ad.CMV/acZ 31
2.7.1. Prinzip 31
2.7.2. Durchführung 31
2.8. Nachweis des Ad.CMV/acZ in der Leber 32
2.8.1. Leberentnahme und Gefrierschnitte 32
2.8.1.1. Prinzip 32
2.8.1.2. Durchführung 32
2.8.2. Histochemische Färbung 32
2.8.2.1. Prinzip 32
2.8.2.2. Durchführung 32
2.8.3. Immunohistochemische Färbung 34
2.8.3.1. Prinzip 34
Adenoviraler Gentransfer bei HCC im Rattenmodell
Inhaltsverzeichnis Seite 3
2.8.3.2. Durchführung 34
C. Ergebnisse 36
1. Adenovirus-Präparation und Plaqueassay 36
2. In urtro-Infektion verschiedener Zelllinien mit Ad.CMVZacZ 36
3. MRT der Tumoren 36
4. In t suo-Infektion der Ratten mit Ad.CMVlacZ 38
4.1. Implantation der MH-7777A-Zellen 38
4.2. Applikation des Ad.CMVfcicZ 38
4.3. Färbung der Gefrierschnitte 39
4.3.1. Histochemische Färbung 39
4.3.2. Immunohistochemische Färbung 39
D. Diskussion 45
1. Tumorzellinjektion 45
2. Kernspintomographische Darstellung des Tumors 45
3. Anreicherung des Virus im Tumor 45
3.1. Virus-Konzentration 46
3.2. Applikationsform 46
3.3. Anreicherung in anderen Organen 47
3.4. Färbemethoden 47
4. Probleme und Aussichten einer adenoviralen Gentherapie 48
4.1. Tumorspezifität und Toxizität 48
4.2. Perspektiven 49
E. Zusammenfassung 50
F. Verzeichnis der Abkürzungen 51
G. Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen 53
H. Literaturverzeichnis 54
I. Danksagung 63
J.Lebenslauf. 64
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