In-vitro-Effekt von Simvastatin und Atorvastatin auf die Humane Hepatomazelllinie HUH 7 in der Zellkultur:
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2003
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Inhaltsverzeichnis
1 Einleitung 1
1.1 Lipoproteinstoffwechsel 2
1.2 LDL-Rezeptor 5
1.3 Rezeptorvermittelte Endozytose 8
1.4 Cholesterinstoffwechsel 9
1.5 Atherosklerose 12
1.6 Hyperlipoproteinämie 14
1.7 Therapie der Hyperlipoproteinämie 17
1.8 HMG-CoA-Reduktasehemmer 19
1.8.1 Simvastatin und Atorvastatin 25
1.9 Hepatische Lipase 28
1.10 Ziel der Arbeit 29
2 Material und Methoden 30
2.1 Zelllinien 30
2.2 Zellkultur 30
2.3 Vitalitätstest 32
2.4 Isolierung und Analyse der Liganden 32
2.4.1 Isolierung von LDL 32
2.4.2 lodierung von LDL 33
2.4.3 Bestimmung der Markierungsverteilung 34
2.4.4 Bestimmung des Proteingehaltes der LDL-Lösung 34
2.5 Herstellung eines Kulturmediums mit Medikamentenzusatz 35
2.6 Aufnahmeexperimente 36
26.1 Vorinkubation 36
2.6.2 Durchführung 37
2.6.3 Bestimmung des Zellproteins 38
Inhaltsverzeichnis !L
2.7 Reesterifikation 40
2.8 Analyse des LDL-Rezeptors im Westernblot 42
2.8.1 Isolierung der Zellproteine 42
2.8.2 7,5% SDS-Polyacrylamidgelektrophorese(SDS-PAGE) 43
2.8.3 Westernblotting 44
2.8.4 Immundetektion 45
2.9 Aktivitätsbestimmung der Hepatischen Lipase (HL) 46
2.9.1 Zellkultur zur Synthese der Hepatischen Lipase 46
2.9.2 Bestimmung der Aktivität der Hepatischen Lipase 47
3 Ergebnisse 48
3.1 Analyse des LDL-Rezeptors im Westernblot 48
3.2 Aufnahmeexperimente 49
3.2.1 LPDS-Stimulation der Hepatomazelllinie 51
3.2.2 Veränderung der Zellmorphologie durch Statininkubation 53
3.2.3 Inkubation mit den HMG-CoA-Reduktasehemmern 58
3.3 Reesterifikationsexperimente 66
3.3.1 Überprüfung der Methode 67
3.3.2 Beeinflussung der Veresterungsrate durch Statininkubation 68
3.4 Aktivitätsbestimmung der Hepatischen Lipase (HL) 71
4 Diskussion 77
5 Zusammenfassung 90
6 Literaturverzeichnis 91
7 Anhang 106
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