Präparation und Charakterisierung von humanen Chylomikronen aus postprandialem Plasma:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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| Beschreibung: | 97 S. Ill., graph. Darst. 21 cm |
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|---|---|
| adam_text | I Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis
Inhaltsverzeichnis 1
Abkürzungsverzeichnis 3
Abbildungsverzeichnis 4
I.Einleitung 5
1.1. Die Lipoproteine 5
1.2. Apolipoprotein-B 8
1.3. Stoffwechselwege der Lipoproteine 10
1.4. Präparation von Apo-B-haltigen Lipoproteinen 15
1.5. Ziel der Arbeit 17
2. Material und Methoden 18
2.1. Geräte 18
2.2. Chemikalien und Verbrauchsmaterialien 18
2.3. Probanden, Fettbelastung, Blutabnahme und Gewinnung des Plasmas 19
2.4. Präparation von Triglyzerid-reichen Lipoproteinen (TRL) aus dem Plasma... 20
2.5. Präparation von Chylomikronen und VLDL aus angereicherten TRL 21
2.5.1. Herstellung des lodixanolgradienten 21
2.5.2. Zentrifugation und Fraktionierung 23
2.6. Bestimmung der Lipid- und Proteinkonzentration 24
2.6.1. Proteinbestimmung 24
2.6.2. Triglyzeridbestimmung 25
2.6.3. Cholesterinbestimmung 25
2.6.4. Phospholipidbestimmung 25
2.7. Analyse der elektrophoretischen Mobilität mittels Agarosegelelektrophorese 26
2.8. Auftrennung der Apolipoproteine mittels SDS-PAGE 27
2.9. Proteinfärbung 29
2.9.1. Coomassie-Färbung 29
2.9.2. Silber-Gel-Färbung 29
2.10. Immundetektion von Apolipoproteinen 30
2.10.1. Western-Blot 31
2.10.2. Antikörperinkubation 32
2.10.3. Chloronaphtolentwicklung 32
1
Inhaltsverzeichnis
2.10.4. ECL-Entwicklung 32
2.11. Aufnahme von TRL in Hepatomazellen 33
3. Ergebnisse 35
3.1. Prae- und postprandiale Lipidkonzentration der Plasmen 38
3.2. Lipid- und Proteinkonzentration in den TRL 40
3.3. Lipid- und Proteinkonzentration von Chylomikronen und VLDL 42
3.3.1. Lipid- und Proteinkonzentration der einzelnen Fraktionen 43
3.4. Analyse der elektrophoretischen Mobilität / Agarosegelelektrophorese 50
3.5. Analyse der Apolipoprotein-Zusammensetzung von CM und VLDL 52
3.5.1. Coomassie-Gel-Färbung 54
3.5.2. Silber-Gel-Färbung 57
3.5.3. Immundetektion von Apolipoprotein-B 58
3.5.4. Immundetektion von Apolipoprotein-E und Apolipoprotein-C 66
3.5.5. Immundetektion der humanen Lipoproteinlipase (LpL) 68
3.6. Aufnahme von Chylomikronen und VLDL in humane Hepatomazellen 70
4. Diskussion 76
4.1. Präparation der humanen Chylomikronen und Trennung von VLDL 77
4.2. Charakterisierung der Chylomikronen und der VLDL 79
4.3. Funktionelle Unterschiede zwischen Chylomikronen und VLDL 82
4.4. Aufnahmeexperimente 83
5. Zusammenfassung 85
6. Anhang 86
7. Literaturverzeichnis 88
8. Danksagung 95
9. Lebenslauf 96
10. Eidesstattliche Versicherung 97
2
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