Untersuchungen zur molekularen Grundlage der Isoprenemission bei der Stieleiche (Quercus robur L.):
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Aachen
Shaker
2000
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| Schriftenreihe: | Schriftenreihe / Fraunhofer-Institut Atmosphärische Umweltforschung
66 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
.
1.1
VORKOMMEN
UND
BEDEUTUNG
VON
ISOPREN
.
1
1.2
BEDEUTUNG
DES
ISOPRENS
FUER
DIE
CHEMIE
DERTROPOSHAERE
.
1
1.3
BIOGENE
QUELLEN
DES
SPURENGASES
ISOPREN
.
4
1.4
ABSCHAETZUNG
DER
ISOPRENEMISSION
.
6
1.5
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
ISOPRENEMISSION
UND
PHOTOSYNTHESE
.7
1.5.1
LICHTABHAENGIGKEIT
.
.
1.5.2
COG-KONZENTRATION.
.
1.5.3
STOMATAERE
AKTIVITAET.
.
Q
1.5.4
TEMPERATURABHAENGIGKEIT
.
11
1.5.5
EINFLUSS
VON
WACHSTUMSBEDINGUNGEN
AUF
DIE
ISOPRENEMISSION
.
12
1.6
BIOSYNTHESE
VON
ISOPRENOIDEN
.
15
1.6.1
DIE
ISOPRENSYNTHASE
ALS
SCHLUESSELENZYM
FUER
DIE
ISOPRENEMISSION
.
20
1.62
ZIELE
DER
ARBEIT
.
20
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
22
2.1
PFLANZENMATERIAL
UND
ANZUCHTBEDINGUNGEN
.22
2.1.1
FREILANDMATERIAL
DER
STIELEICHE
(Q.
ROBUR
L.)
.24
2.1.2
PILZKULTUR
(LACCARIA
LACCATA)
.
27
22
MESSUNG
DER
ISOPREN-EMISSION
AN
DER
STIELEICHE
.
28
2.2.1
AUFBAU
DER
MESSAPPARATUR.
.28
2.22
KUEVETTENAUFBAU
.28
2.2.3
BELEUCHTUNGSAUFSATZ
.
31
2.2.4
SEMI-KONTINUIERLICHE
GASCHROMATOGRAPHIE
.
32
2.2.5
KALIBRIERUNG
DES
GC.
.
33
2.2.6
BERECHNUNG
DER
EMISSIONSRATEN
.
36
2.2.7
BERECHNUNG
DER
EMISSIONSFAKTOREN
NACH
GUENTHER
ET
AL.
(1993)
.
36
2.3
FREILANDVERSUCHE
UND
VERSUCHSBEGLEITENDE
MESSUNGEN
.
38
2.3.1
FREILANDVERSUCHE.
.
38
2.3.2
ERMITTLUNG
DER
RELATIVEN
LUFTFEUCHTE
UND
LUFTTEMPERATUR
.
38
2.3.3
DETEKTION
DER
UV-B
UND
PPFD
STRAHLUNGSBEDINGUNGEN
.39
2.4
CHEMISCHE
SYNTHESE
VON
DIMETHYLALLYLDIPHOSPHAT
(DMADP)
.40
2.4.1
SYNTHESE
VON
DIMETHYLALLYLDIPHOSPHAT,
NACH
KELLERUND
THOMPSON
(1993)
.
40
2.42
FLASH-CHROMATOGRAPHIE
ZUR
ISOLIERUNG
DER
DIPHOSPHATE
.
41
2.4.3
NACHWEIS
DER
PHOSPHATE
.
41
2.5
AUTOMATISIERTE
CN-ANALYSE
.
42
2.6
BESTIMMUNG
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
43
2.6.1
HERSTELLUNG
VON
BLATTEXTRAKTEN
.
43
INHALTSVERZEICHNIS
_
2.6.2
ISOLIERUNG
VON
MIKROSOMEN_
44
2.6.3
STANDARDENZYMTEST
DER
ISOPRENSYNTHASE
.46
2.7
GASCHROMATOGRAPHISCHE
ANALYTIK
DES
ISOPRENSYNTHASE-TESTS
.47
2.7.1
BERECHNUNG
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET.
.
51
2.8
SPEKTRALPHOTOMETRISCHE
ANALYSEN
.52
2.8.1
PROTEINBESTIMMUNG.52
2.8.2
NEUTRALZUCKER.53
2.8.3
NITRAT
.
54
2.8.4
CHLOROPHYLL
UND
CAROTENOLDGEHALTE
.
55
2.9
ENTSALZUNG
UND
KONZENTRIERUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
.
56
2.9.1
GELFILTRATION
MIT
PD-10
UND
NAP-S
SAEULEN
.
56
2.9.2
ULTRAFILTRATION
.57
2.10
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
ZUR
PROTEINREINIGUNG
.
57
2.10.1
ANIONENAUSTAUSCH-CHROMATOGRAPHIE
MIT
DEAE-SEPHAROSE
FAST
FLOW
.
57
2.
10.2
CHROMATOFOKUSSIERUNG
MIT
MONO
P
.
58
2.
10.3
CHROMATOGRAPHIE
MIT
HYDROXYLAPATLT
(HA)
.
59
2.
10.4
GELFILTRATION
.
59
2.10.5
LIGANDEN-AFFINLTAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
ANTL-RUBISCO-ANTIKOERPERN
.
60
2.11
ANTIKOERPER
.
61
2.11.1
HERSTELLUNG
EINES
POLYKLONALEN
ANTISERUMS
GEGEN
DIE
ISOPRENSYNTHASE
AUS
DER
STIELEICHE
(Q.
ROBUR
L.)
_
61
2.
11.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTIKOERPER.
.
62
2.12
SDS-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
63
2.12.1
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DIE GELELEKTROPHORESE
.
63
2.12.2
GIESSEN
DES
GELS
.
64
2.12.3
ELEKTROPHORETISCHE
TRENNUNG
.
65
2.12.4
DETEKTION
VON
PROTEINEN
IM
GEL
.
65
2.
12.5
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
.
66
2.13
WESTERN
BLOTTING
UND
DETEKTIONSMETHODEN
.
66
2.13.1
PROTEINTRANSFER.
66
2.
13.2
DETEKTIONSMETHODEN
FUER
GEBLOTTETE
PROTEINE
.
67
2.14
MIKROSEQUENZIERUNG
VON
PROTEINEN
.
68
2.14.1
TRYPTLSCHE
SPALTUNG
VON
PROTEINEN
IM
GEL.
_
68
2.14.2
EXTRAKTION
DER
PEPTIDE
AUS
DEM
GEL.
.
69
2.14.3
HPLC-ANALYTIK
ZUR
TRENNUNG
VON
PEPTIDEN
.
69
2.14.4
EDMAN-ABBAU
.
70
2.15
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMATERIAL
.
70
2.15.1
CHEMIKALIEN
.
70
2.
15.2
VERBRAUCHSMATERIAL.
71
II
_
INHALTSVERZEICHNIS
3
ERGEBNISSE
.
72
3.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
72
3.1.1
SUBSTRATABHAENGIGKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
72
3.1.2
TEMPERATURABHAENGIGKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET.
.
74
3.1.3
PH-ABHAENGIGKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET.
.
76
3.1.4
ZEITABHAENGIGKEIT.
.
78
3.1.
S
PROTEINABHAENGIGKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
79
3.1.6
TESTGENAUIGKEIT
DES
ISOPRENSYNTHASE-TESTS
.
80
3.1.7
LAGERFAEHIGKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
81
3.2
ISOLIERUNG
DER
ISOPRENSYNTHASE
.
82
3.2.1
IONENAUSTAUSCHER-CHROMATOGRAPHIE
MIT
DEAE-SEPHAROSE
FAST
FLOW
.
82
3.2.2
CHROMATOGRAPHIE
MIT
HYDROXYLAPATIT
.
84
3.2.3
CHROMATOFOKUSSIERUNG
MIT
MONO-P
.
85
3.2.4
GELFILTRATION
MIT
SUPEROSE-12
.86
3.2.5
LIGANDEN-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
ANTI-RUBLSCO-ANTIKOERPERN
.
89
3.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
SPROSSKULTUR
DER
STIELEICHE
(QUERCUS
ROBUR
L.)
.
95
3.3.1
FRISCHGEWICHTSZUNAHME
DER
EICHENSPROSSE
.
95
3.3.2
PARAMETER
DES
NAEHRBODENS:
PH-WERT,
EI.
LEITFAEHIGKEIT,
GLUCOSE
UND
NITRATGEHALT.
96
3.3.3
CHLOROPHYLL
UND
CAROTINOIDGEHALT
DER
BLAETTER.
.
97
3.3.4
PROTEINGEHALT
UND
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET.
.
99
3.3.5
PROZENTUALE
GEHALTE
AN
KOHLENSTOFF
UND
STICKSTOFF
.
99
3.3.6
LOESLICHKEIT
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
100
3.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
REGULATION
DER
ISOPRENBILDUNG
AN
STIELEICHEN
(QUERCUS
ROBUR
L.)
IM
FREILAND
.
101
3.4.1
TAGESGANG
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET.
.
101
3.4.2
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
IM
JAHRESVERLAUF.
.
104
3.4.2.1
UNTERSUCHUNGSJAHR
1995.
.
104
3.4.2.2
UNTERSUCHUNGSJAHR
1996.
.
108
3.4.2.3
UNTERSUCHUNGSJAHR
1997.
.
115
3.4.3
ZUSAMMENFASSENDE
BETRACHTUNGEN
AUS
DEN
ERGEBNISSEN
VON
1995-97
.
125
3.4.3.1
VARIABILITAET
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
DER
EINZELBAEUME.
.
126
3.4.3.2
KLIMADATEN
UND
ISOPRENSYNTHASE
AKTIVITAET
.
129
3.5
DIREKTER
VERGLEICH
VON
ISOPRENEMISSIONSRATE
UND
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVIAET
.
134
3.6
EINFLUSS
DER
STICKSTOFFVERSORGUNG
AUF
DIE
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
UND
ISOPREN
EMISSION
.
141
III
INHALTSVERZEICHNIS
_
4
DISKUSSION
.
150
4.1
CHARAKTERISTIKA
DER
ISOPRENSYNTHASE
.
150
4.2
DER
BIOCHEMISCHE
URSPRUNG
VON
ISOPREN
.
156
4.3
KURZFRISTIGE
AENDERUNGEN
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
157
4.4
UNTERSCHIEDE
VON
SONNENBLAETTERN
UND
BESCHATTETEN
BLAETTERN
.
161
4.5
SAISONALE
AENDERUNGEN
DER
ISOPRENSYNTHASE-AKTIVITAET
.
163
4.6
VARIABILITAET
.
166
4.7
EINFLUSS
DER
STICKSTOFFZUFUHR
AUF
DIE
ISOPRENBILDUNG
.
167
4.8
WARUM
EMITTIEREN
DIE
PFLANZEN
ISOPREN?
.
168
AUSBLICK
.
170
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
171
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
173
IV |
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| series2 | Schriftenreihe / Fraunhofer-Institut Atmosphärische Umweltforschung |
| spelling | Lehning, Andrea 1969- Verfasser (DE-588)122543335 aut Untersuchungen zur molekularen Grundlage der Isoprenemission bei der Stieleiche (Quercus robur L.) Andrea Lehning Aachen Shaker 2000 VI, 188 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Schriftenreihe / Fraunhofer-Institut Atmosphärische Umweltforschung 66 Zugl.: Freiburg (Breisgau), Univ., Diss., 2000 Hochschulschrift gtt Stieleiche (DE-588)4128387-9 gnd rswk-swf Isoprenemission (DE-588)4407990-4 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Stieleiche (DE-588)4128387-9 s Isoprenemission (DE-588)4407990-4 s DE-604 Fraunhofer-Institut Atmosphärische Umweltforschung Schriftenreihe 66 (DE-604)BV004831260 66 DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=012885695&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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