Die Rolle der Rel-NF-kappaB-Transkriptionsfaktoren in der Reifung und Funktion dendritischer Zellen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Karlsruhe
Forschungszentrum Karlsruhe
2004
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| Ausgabe: | Als Ms. gedr. |
| Schriftenreihe: | Wissenschaftliche Berichte / Forschungszentrum Karlsruhe Technik und Umwelt
7006 |
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Karlsruhe, Univ., Diss., 2004. - -Mit dt. und engl. Zsfassung |
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1.1 Dendritische Zellen 7
1.1.1 Entwicklung und Differenzierung von dendritischen Zellen 9
1.1.2 Immunregulation durch funktioneile Subgruppen 11
1.2 Die Transkriptionsfaktor Familie Rel/NF KB 13
1.2.1 Der NF KB Signalübertragungsweg 14
1.2.2 Pathologische Veränderungen in Mäusen mit einem zerstörten Rel/NF KB Gen 17
2 MATERIAL UND METHODEN 20
2.1 Chemikalien und Bezugsquellen 20
2.2 Mäuse 20
2.3 Generierung von dendritischen Zellen aus dem Knochenmark 20
2.4 Isolierung von dendritischen Zellen aus lymphoiden Geweben der Maus 21
2.5 Isolierung von Langerhans Zellen aus der Epidermis 22
2.6 Generierung von Knochenmarkchimären 23
2.7 Durchflusszytometrische Messung 23
2.8 Apoptose und Zellviabilität 24
2.9 DNA Bindung der NF KB Proteine 24
2.10 Funktionelle Tests mit dendritischen Zellen 26
2.10.1 FITC Dextran Aufnahme Test 26
2.10.2 Gemischte Leukozyten Reaktion (MLR) 27
2.10.3 Antigenspezifische Immunantwort 27
2.10.4 Bestimmung der Zytokinproduktion durch ELISA 27
2.10.5 Migrationsexperimente mit re/ß7 dendritische Zellen 28
2.10.6 Kontakthypersensitivität 28
3 ERGEBNISSE 29
3.1 In vitro Generierung von dendritischen Zellen aus dem Knochenmark 29
3.2 DNA Bindungsaktivität der Rel/NF KB Proteine in dendritischen Zellen 30
3.3 Durchflusszytometrische Bestimmung der dendritischen Zell Subgruppen in
re/ßv , nfkbiv und nfkb^ Mäusen 33
3.4 In vitro Reifung der Rel/NF tcB defizienten dendritischen Zellen 36
3.4.1 NF KB1 defiziente dendritische Zellen lassen sich nur teilweise zur vollständigen
Reifung induzieren 36
1
3.4.2 Zellzahlbestimmung und Viabilität der dendritischen Zellen 40
3.5 Funktionelle Tests mit Rel/NF KB defizienten dendritischen Zellen 42
3.5.1 Verminderte Antigenaufnahme bei nfkbZ dendritischen Zellen 42
3.5.2 Nfkbi^ dendritische Zellen zeigen eine verminderte Fähigkeit zur T Zell Stimulation 43
3.5.3 Reduzierte Anzahl von dendritischen Zellen in nßcbfv nffcb2v Doppel Knockout
Mäusen 45
3.5.4 Nfkb1^~ dendritische Zellen exprimieren CD45RB 47
3.5.5 Erhöhte IL 10 Produktion in nfkbi^ dendritischen Zellkulturen und reduzierte 1L 12
Produktion in re/ß7 und nfkb1v~ dendritischen Zellkulturen 48
3.5.6 RelB defiziente dendritische Zellen besitzen die Fähigkeit zur Migration 49
3.5.7 RelB defiziente dendritische Zellen sind in der Lage eine Immunantwort in vivo
auszulösen. 51
4 DISKUSSION 55
4.1 DNA Bindungsaktivität der Rel/NF KB Proteine während der Reifung
dendritischer Zellen 55
4.1.1 Durch Stimulation mit LPS und CD40L wird die DNA Bindung der
Rel/NF KB Familienmitglieder p50, p52, RelA, RelB und c Rel aktiviert 57
4.2 Funktionelle Experimente mit nfkb1^~ dendritischen Zellen 59
4.2.1 Nfkbi^ dendritische Zellen gehen verstärkt in Apoptose 59
4.2.2 Erhöhte IL 10 Produktion in der in vitro Kultur von nfkb1^~ dendritischen Zellen 60
4.2.3 Reduzierte IL 12 Produktion in der in vitro Kultur von nfkb1v~ dendritischen Zellen 62
4.3 Funktionelle Experimente mit n1kb2/ und nfkb1v~nfkb2/ dendritischen Zellen 62
4.4 Funktionelle Experimente mit relB? dendritischen Zellen 63
4.4.1 RelB? dendritische Zellen zeigen eine verminderte IL 12 Produktion 67
4.4.2 Die Rolle von RelB bei der in vivo Reifung von dendritischen Zellen 67
5 LITERATUR 69
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