Die E3-Ligase HectH7 - subzelluläre Lokalisation und Interaktion mit dem potentiellen Tumorsuppressor CDX2:
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2004
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INHALTSVERZEICHNIS
INH
ALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
KOLOREKTALE
KARZINOM
1
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE
1
1.1.2
DER
GENETISCHE
HINTERGRUND
DES
KOLOREKTALEN
KARZINOMS
1
1.1.2.1
FAMILIAERE
KOLOREKTALE
TUMORSYNDROME
2
1.1.2.2
DAS
GENETISCHE
MODELL
DER
ENTSTEHUNG
DES
KOLOREKTALEN
KARZINOMS
3
1.1.2.3
DER
TUMORSUPPRESSOR
APC
4
1.2
CDX2
-
POTENTIELLES
TUMORSUPPRESSORGEN
5
1.2.1
HERKUNFT
UND
EXPRESSIONSMUSTER
VON
CDX2
5
1.2.2
CDX2
IM
ADULTEN
DARM
6
1.2.3
DER
POTENTIELLE
TUMORSUPPRESSOR
CDX2
7
1.2.4
CDX2
INTERAGIERT
MIT
HECTH7
7
1.3
DER
UBIQUITIN-PROTEASOM-SIGNALWEG
8
1.3.1
UBIQUITINIERUNG
UND
PROTEINDEGRADATION
8
1.3.2
BESTANDTEILE
DER
UBIQUITINIERUNGSKASKADE
10
1.3.3
ALTERNATIVE
FUNKTIONEN
DER
UBIQUITINIERUNG
VON
PROTEINEN
10
1.4
DIE
HECT-FAMILIE
DER
E3
LIGASEN
11
1.4.1
NEDD4-AEHNLICHE
HECT
E3-LIGASEN
11
1.4.2
HECTH7
12
1.4.3
HECTH7-HOMOLOGE
UND
DEREN
FUNKTIONEN
13
1.5
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
MATERIALIEN
UND
METHODEN
15
2.1.1
PRAEPARATION
KOMPETENTER
BAKTERIENZELLEN
15
2.1.2
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
15
2.1.3
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
AUS
BAKTERIEN
16
2.1.4
KONZENTRATIONBESTIMMUNG
UND
REINHEITSPRUEFUNG
DER
PLASMID-DNA
17
2.1.5
RESTRIKTIONSANALYSE
17
2.1.6
KONSERVIERUNG
DER
BAKTERIENSTAEMME
18
INHALTSVERZEICHNIS
2.2
PROTEINBIOCHEMISCHE
MATERIALIEN
UND
METHODEN
19
2.2.1
ZELLKULTUR
19
2.2.1.1
ZELLLINIEN
19
2.2.1.2
ZELLKULTURARBEITEN
20
2.2.1.3
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
EUKARYOTISCHER
ZELLEN
20
2.2.2
WESTERN
BLOT
21
2.2.2.1
IN-VITRO-TRANSKRIPTION/TRANSLATION
IM
RETIKULOZYTEN-LYSAT
21
22.2.2
ISOLATION
VON
PROTEINEN
AUS
EUKARYOTISCHEN
ZELLEN
22
22.2.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
DER
PROTEINE
22
2.2.2A
SDS-PAGE
(POLYACRYLAMID
GEL
ELEKTROPHORESE)
23
22.2.5
BLOTTEN
23
22.2.6
IMMUNFAERBUNG
24
2.2.22
ANTIKOERPER
25
2.2.3
IMMUNPRAEZIPITATION
UND
KOIMMUNPRAEZIPITATION
26
2.2.4
IMMUNZYTOCHEMIE
27
3.
ERGEBNISSE
29
3.1
FUNKTIONSPRUEFUNG
DER
HECTH7-ANTIKOERPER
29
3.1.1
FUNKTIONSPRUEFUNG
DER
HECTH7-ANTIKOERPER
IM
WESTERN
BLOT
29
3.1.2
FUNKTIONSPRUEFUNG
DER
HECTH7-ANTIKOERPER
IN
DER
IMMUNPRAEZIPITATION
30
3.1.3
FUNKTIONSPRUEFUNG
DER
HECTH7-ANTIKOERPER
IN
DER
IMMUNZYTOCHEMIE
31
3.2
DETEKTION
VON
HECTH7
33
3.2.1
VERSCHIEDENE
ANTIKOERPER
IM
WESTERN
BLOT
33
3.2.2
HECTH7
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
ZELLLINIEN
34
3.2.3
HECTH7
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
LYSEPUFFEM
34
3.2.4
EXPRESSION
VON
HECTH7
ZU
UNTERSCHIEDLICHEN
ZEITPUNKTEN
IN
293-ZELLEN
35
3.2.5
HECTH7
IN
DER
IMMUNPRAEZIPITATION
36
3.2.6
IN-VITRO-TRANSKRIPTION/TRANSLATION
VON
HECTH7
37
3.2.7
VERSCHIEDENE
ANTIKOERPER
IN
DER
IMMUNZYTOCHEMIE
38
3.3
INTERAKTION
VON
HECTH7-MYC
UND
CDX2
IN
VIVO
41
3.3.1
KOIMMUNPRAEZIPITATION
VON
HECTH7-MYC
DURCH
CDX2
41
3.3.2
KOIMMUNPRAEZIPITATION
VON
CDX2
DURCH
HECTH7-MYC
41
3.4
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
VON
CDX2
UND
HECTH7
42
3.4.1
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
VON
CDX2
UND
HECTH7-MYC
IN
HELA-ZELLEN
43
INHALTSVERZEICHNIS
3.4.2
SUBZELLULAERE
LOKALISATION
VON
CDX2
UND
HECTH7-MYC
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
ZELLINIEN
45
3.4.3
APOPTOSEFAERBUNG
47
4.
DISKUSSION
49
4.1
METHODISCHE
BETRACHTUNGEN
49
4.1.1
HECTH7-MYC
UND
HECTH7
IN
DER
IMMUNZYTOCHEMIE
49
4.1.2
HECTH7
IM
WESTERN
BLOT
49
4.2
INTERAKTION
UND
KOLOKALISATION
VON
CDX2
UND
HECTH7
51
4.2.1
INTERAKTION
VON
HECTH7
UND
CDX2
51
4.2.2
SUBZELLULAERE
LOKALISTATION
52
4.2.2.1
HECTH7
IM
ZYTOPLASMA
53
4.2.2.2
HECTH7
IM
NUKLEUS
55
4.3
SCHLUSSFOLGERUNGEN
UND
AUSBLICK
57
5.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ARBEIT
58
6.
LITERATURVERZEICHNIS
60
7.
ERKLAERUNG
UEBER
DIE
EIGENSTAENDIGE
ABFASSUNG
DER
ARBEIT
I
8.
DANKSAGUNG
II
9.
LEBENSLAUF
III
10.
PUBLIKATIONSVERZEICHNIS
V |
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