Häufigkeiten und Ursachen der Inaktivierung des Tumorsuppressors p16Ink4A in Zelllinien und Primärtumoren von extrahepatischen Gallengangskarzinomen:
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2004
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INHALTSVERZEICHNIS
:
1.
EINLEITUNG
6
1.1.
GALLENGANGSKARZINOME
6
1.2.
DER
ZELLZYKLUS
UND
SEINE
REGULATION
8
1.3.
DER
TUMORSUPPRESSOR
PL6
INK4A
11
1.3.1.
GESCHICHTE,
KLONIERUNG,
STRUKTUR
11
1.3.2.
SIGNALWEG,
FUNKTION
UND
REGULATION
14
1.3.2.1.
SIGNALWEG
UND
FUNKTION
ALS
TUMORSUPPRESSOR
14
1.3.2.2.
FUNKTION
IN
SENESZENZ
UND
ZELLIMMORTALISIERUNG
15
1.3.2.3.
REGULATION
DER
PLOE-EXPRESSION
16
1.3.3.
PL6-INAKTIVIERUNG
17
1.3.3.1.
MECHANISMEN
DER
GEN-INAKTIVIERUNG
17
1.3.3.2.
PL6-KNOCK-OUT
MAUS
19
1.3.3.3.
PL6-INAKTIVIERUNG
IN
PRIMAERTUMOREN
20
1.4.
GENETIK
DES
GALLENGANGSKARZINOMS
23
1.5.
ZIEL
DIESER
ARBEIT
24
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
25
2.1.
VERWENDETE
MATERIALIEN
UND
GERAETE
25
2.1.1.
VERBRAUCHSMATERIALIEN
UND
CHEMIKALIEN
25
2.1.2.
VERWENDETE
GERAETE
26
2.1.3.
ZUSAMMENSETZUNG
VERWENDETER
PUFFER
UND
LOESUNGEN
26
\
2.2.
ZELLLINIEN
UND
PATIENTENMATERIAL
28
2.2.1.
VERWENDETE
ZELLLINIEN
28
2.2.2.
PATIENTENMATERIAL
28
2.3.
BESCHREIBUNG
DER
METHODEN
30
2.3.1.
PROTEINE
ISOLIEREN
-
RIPA-LYSAT
DER
ZELLEN
ANFERTIGEN
30
2.3.2.
MESSEN
DER
PROTEIN-KONZENTRATION
DES
ZELL-LYSATES
30
2.3.3.
WESTERN
BLOT
30
2.3.4.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
32
2.3.5.
5-AZA-BEHANDLUNG
DER
ZELLLINIEN
32
2.3.6.
ISOLIERUNG
VON
GENOTNISCHER
DNA
AUS
ZELLLINIEN
33
2.3.7.
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
PARAFFINSCHNITTEN
33
2.3.8.
BESTIMMUNG
DER
DNA-KONZENTRATION
33
2.3.9.
PCR
33
2.3.10.
METHYLIERUNGS-SENSITIVE
PCR
35
2.3.11.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
36
2.3.12.
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
37
2.3.13.
LOH-ANALYSE
38
2.3.14.
IMMUNHISTOCHEMIE
39
3.
ERGEBNISSE
40
3.1.
ZELLLINIEN
40
3.1.1.
WESTERN-BLOT
40
3.1.2.
NACHWEIS
VON
HOMOZYGOTEN
DELETIONEN
40
3.1.3.
MUTATIONSANALYSE,
SEQUENZIERUNG
41
3.1.4.
METHYLIERUNGS-SENSITIVE
PCR
42
3.1.5.
PL6-REEXPRESSION
DURCH
5-AZA-BEHANDLUNG
43
3.2.
PRIMAERTUMOREN
44
3.2.1.
IMMUNHISTOCHEMIE
44
3.2.2.
MUTATIONSANALYSE,
SEQUENZIERUNG
45
3.2.3.
LOH-ANALYSE
45
3.2.4.
METHYLIERUNGS-SENSITIVE
PCR
46
3.2.5.
ZUSAMMENFASSUNG
47
4.
DISKUSSION
48
4.1.
DISKUSSION
DER
UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE
48
4.2.
PL6-VERLUST
IN
DER
ENTWICKLUNG
DES
TUMORS
50
4.3.
MOEGLICHE
BEDEUTUNG
DER
UNTERSUCHUNGEN
FUER
ZUKUENFTIGE
THERAPIEFORMEN
51
4.3.1.
7/?C4M-GENTHERAPIE
51
4.3.2.
TUMORTHERAPIE
MIT
5-AZA-2'-DEOXYCYTIDIN
53
4.4.
KLINISCHER
AUSBLICK
54
5.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ARBEIT
56
6.
LITERATURVERZEICHNIS
57
ANHANG
ERKLAERUNG
UEBER
DIE
EIGENSTAENDIGE
ABFASSUNG
DER
ARBEIT
69
LEBENSLAUF
70
VERZEICHNIS
WISSENSCHAFTLICHER
VEROEFFENTLICHUNGEN
UND
VORTRAEGE
71
DANKSAGUNG
72
5 |
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