Untersuchung zur Relevanz der Onkogene Ski und SnoN in der humanen Hepatokarzinogenese:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
HEPATOZELLULAERES
KARZINOM
1
1.1.1
EPIDEMIOLOGIE
UND
MORPHOGENESE
1
1.1.2
AETIOLOGIE
2
1.1.3
MOLEKULARE
HEPATOKARZINOGENESE
4
1.2
TGFSS
SIGNALWEG
5
1.2.1
ALLGEMEINES
5
1.2.2
TGFSS-REZEPTORKOMPLEX
6
1.2.3
SMAD-PROTEINE
6
1.2.4
TGFSS-SIGNALTRANSDUKTION
IN
HUMANEN
ZELLEN
7
1.2.5
ALTERATIONEN
DES
TGFSS
SIGNALWEGES
IN
DER
KARZINOGENESE
10
1.3
SKI-FAMILIE
11
1.3.1
ALLGEMEINES
11
1.3.2
BIOLOGISCHE
AKTIVITAETEN
12
1.3.2.1
MYOGENE
DIFFERENZIERUNG
12
1.3.2.2
MALIGNE
TRANSFORMATION
13
1.3.3
MODULARER
AUFBAU
15
2
AUFGABENSTELLUNG
18
3
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1
ALLGEMEINES
19
INHALTSVERZEICHNIS
3.1.1
CHEMIKALIEN,
PLASTIKWAREN
UND
SONSTIGE
MATERIALIEN
19
3.1.2
HERSTELLUNG
VON
LOESUNGEN
19
3.1.3
VORBEREITUNG
STERILER
ARBEITSMATERIALIEN
19
3.2
GEWEBE,
KULTURZELLEN
UND
ZELLKULTURTECHNIKEN
20
3.2.1
GEWEBE
20
3.2.2
ZELLLINIEN
20
3.2.3
ZELLKULTUR
20
3.2.4
ZELLZAEHLUNG
21
3.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITEN
22
3.3.1
ARBEITEN
MIT
NUKLEINSAEUREN
22
3.3.1.1
RNA-ISOLIERUNG
22
3.3.1.2
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
RNA
22
3.3.1.3
PHOTOSPEKTROMETRISCHE
BESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREKONZENTRATIONEN
23
3.3.1.4
RT-PCR
FUER
SNON
23
3.3.1.4.1
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
23
3.3.1.4.2
CDNA-SYNTHESE
AUS
RNA
MITTELS
REVERSERTRANSKRIPTASE
REAKTION
24
3.3.1.4.3
AMPLIFIKATION
VON
CDNA
DURCH
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
24
3.3.1.5
EINSCHRITT-RT-PCR
FUER
SKI
25
3.3.1.5.1
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
25
3.3.1.5.2
EINSCHRITT-RT-PCR
MIT
HITZESTABILER
REVERSERTRANSKRIPTASE
25
3.3.1.6
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
DNA
26
3.3.1.7
SEQUENZIERUNG
26
3.3.1.7.1
SEQUENZIERPRIMER
26
3.3.1.7.2
SEQUENZIERREAKTIONEN
UND
-ANALYSE
27
3.3.1.8
QUANTIFIZIERUNG
VON
M-RNA
MITTELS
TAQMAN-RT-PCR
28
INHALTSVERZEICHNIS
3.3.1.8.1
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
UND
TAQMAN-SONDEN
28
3.3.1.8.2
TAQMAN-RT-PCR
29
3.3.2
PROTEINANALYSEN
31
3.3.2.1
PROTEINISOLIERUNG
AUS
KULTURZELLEN
UND
GEWEBE
31
3.3.2.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
NACH
BRADFORD
32
3.3.2.3
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
MITTELS
SDS-PAGE
32
3.3.2.4
IMMUNOBLOT
AUF
PVDF-MEMBRAN
33
3.3.2.5
SPEZIFISCHER
PROTEINNACHWEIS
33
3.4
IMMUNZYTOLOGIE
UND
IMMUNHISTOLOGIE
34
3.4.1
HERSTELLUNG
VON
CYTOSPINS
FUER
DIE
IMMUNZYTOLOGIE
34
3.4.2
HERSTELLUNG
HISTOLOGISCHER
SCHNITTE
AUS
KRYOGEWEBE
34
3.4.3
IMMUNHISTOLOGISCHE
FAERBUNG
35
4
ERGEBNISSE
36
4.1
MUTATIONSANALYSE
36
4.2
EXPRESSIONSANALYSEN
40
4.2.1
SKI
UND
SNON-MRNA-EXPRESSION
IN
HCCS,
PERITUMOROESEM
UND
ADULTEN
HUMANEN
LEBERGEWEBE
40
4.2.2
DARSTELLUNG
DER
SKI
UND
SNON-EXPRESSION
AUF
PROTEINEBENE
MITTELS
WESTEMBLOTANALYSE
46
4.3
IMMUNHISTOLOGISCHE
DARSTELLUNG
DER
SKI-EXPRESSION
51
5
DISKUSSION
5.1
ALLGEMEINES
53
53
INHALTSVERZEICHNIS
5.2
SKI
54
5.3
SNON
58
5.4
ZUSAMMENFASSUNG
6
ZUSAMMENFASSUNG
82
7
LITERATURVERZEICHNIS
184 |
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