Molekulare Mechanismen der Bioverfügbarkeit von neuen Thrombininhibitoren:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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2003
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84
4554-348-3
INAUGURAL-DISSERTATION
ZUR
ERLANGUNG DER DOKTORWUERDE
DER
NATURWISSENSCHAFTLICH-MATHEMATISCHEN GESAMTFAKULTAET
DER
RUPRECHT-KARLS-UNIVERSITAET
HEIDELBERG
VORGELEGT VON
APOTHEKERIN CLAUDIA GRAEFF
AUS MAINZ
TAG DER MUENDLICHEN PRUEFUNG: 14. FEBRUAR 2003
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS IV
1. EINLEITUNG L
1.1. ORALE BIOVERFUEGBARKEIT VON ARZNEISTOFFEN 1
1.2. TRANS- UND PARAZELLULAERER TRANSPORT 2
1.3. DIE ABC-TRANSPORTER 3
1.3.1. DAS PHAENOMEN DER MULTIDRUG RESISTENZ 4
1.3.2. DIE FAMILIE DER MDR-PROTEINE 4
1.3.2.1. ENTDECKUNG DES P-GLYKOPROTEINS 4
1.3.2.2. STRUKTURELLER AUFBAU DES P-GLYKOPROTEINS 5
1.3.2.3. PHYSIOLOGISCHE UND PATHOPHYSIOLOGISCHE BEDEUTUNG 6
1.3.2.4. SUBSTRATSPEZIFITAET DES P-GLYKOPROTEINS 7
1.3.3. DIE MRP-FAMILIE 8
1.3.3.1. ENTDECKUNG VON MRP UND ANDEREN ISOFORMEN 8
1.3.3.2. STRUKTURELLER AUFBAU VON MRP 9
1.3.3.3. PHYSIOLOGISCHE UND PATHOPHYSIOLOGISCHE BEDEUTUNG 10
1.3.3.4. SUBSTRATSPEZIFITAET VON MRPL UND MRP2 11
1.4. IN VIVO- UND IN VIYRO-MODELLE 12
1.4.1. IN VZVO-MODELLE 13
1.4.2. IN VIFRA-MODELLE 13
1.4.2.1. ZELLKULTUR 14
1.4.2.2. ORGANKULTUREN 14
1.5. FRAGESTELLUNG 18
2. MATERIAL UND METHODEN 19
2.1. MATERIAL 19
2.1.1. CHEMIKALIEN UND BEZUGSQUELLEN 19
2.1.2. GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 20
*
2.1.3. FLUORESZIERENDE SUBSTANZEN : 20
2.1.4. ANTIKOERPER 21
2.1.5. OLIGONUKLEOTIDE FUER DIE PCR 21
2.1.6. LOESUNGEN UND PUFFER 21
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.7 ZELLEN . 22
2.1.8. RATTEN 22
2.2. METHODEN 22
2.2.1. ZELLKULTUR - 22
2.2.1.1. EINFRIEREN UND AUFTAUEN DER CACO-2 ZELLEN 23
2.2.1.2. KULTIVIERUNG DER ZELLEN 23
2.2.1.3. PASSAGIEREN DER ZELLEN 23
2.2.2. SEKRETIONSVERSUCHE AN ISOLIERTEN NIERENTUBULI/ GEHIRNKAPILAREN 24
DES KILLIFISCHES
2.2.2.1. ISOLIERUNG DER NIERENTUBULI/ GEHIRNKAPILLAREN 24
2.2.2.2. SEKRETIONSVERSUCHE 24
2.2.2.3. KONFOKALE LASER-SCANNING-MIKROSKOPIE 25
2.2.2.4. AUSWERTUNG 27
2.2.3. DETEKTION DER TRANSPORTPROTEINE MITTELS ANTIKOERPERFAERBUNG 28
2.2.4. AUFNAHMEVERSUCHE AM KULTIVIERTEN CACO-2 ZELLMONOLAYER 29
2.2.5. IN SITU- UND IN VZVO-VERSUCHE AN RATTEN 29
2.2.5.1. BIOVERFUEGBARKEIT 29
2.2.5.2. GALLENAUSSCHEIDUNG 30
2.2.6. RNA-/DNA-METHODEN 30
2.2.6.1. PRAEPARATION VON GESAMT-RNA AUS ZELLEN 30
2.2.6.2. SPEKTROPHOTOMETRISCHE KONZENTRATIONSBESTIMMUNG 31
2.2.6.3. RT-PCR 31
2.2.6.4. ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA 32
3. ERGEBNISSE 33
3.1. DIE THROMBININHIBITOREN 33
3.1.1. WIRKUNGSMECHANISMUS DER THROMBININHIBITOREN 34
3.2. ISOLIERTE PROXIMALE NIERENTUBULI DES KILLIFISCHES/RF/S
HETEROCLITUS ALS
IN VITRO -MODELL 36
3.2.1. DERKILLIFISCH 36
3.2.2. EXPRESSION VON MRP2 UND P-GP IN ISOLIERTEN NIERENTUBULI 37
3.2.3. PRINZIP DER SEKRETIONSVERSUCHE AN ISOLIERTEN NIERENTUBULI 39
3.2.4. BEOBACHTUNG DER SEKRETION DER FLUORESZIERENDEN SUBSTRATE IN
ABHAENGIGKEIT
ZUR ZEIT 41
3.2.5. HEMMUNG VON MRP2 ODER P-GP DURCH THROMBININHIBITOREN 43
N
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.2.5.1. SEKRETIONSVERSUCHE AN PROXIMALEN NIERENTUBULI MIT DEN
THROMBININHIBITOREN 44
3.3. SEKRETIONSVERSUCHE AN ISOLIERTEN GEHIRNKAPILLAREN DES KILLIFISCHES
52
FUNDULUS HETEROCLITUS
3.3.1. MODELL 52
3.3.2. EXPRESSION VON MRP2 UND P-GP IN ISOLIERTEN GEHIRNKAPILLAREN 53
3.3.3. PRINZIP DER SEKRETIONSVERSUCHE AN ISOLIERTETN GEHIRNKAPILLAREN 55
3.3.4. SEKRETIONSVERSUCHE MIT DEN THROMBININHIBITOREN 55
3.4. CACO-2 MODELL 57
3.4.1. MODELL 58
3.4.2. AUFNAHMEVERSUCHE AN CACO-2 ZELLMONOLAYERN 58
3.5. IN VIVO-VERSUCHE AN RATTEN 61
3.5.1. BIOVERFUEGBARKEIT 61
3.5.2. GALLENSTUDIE 62
3.6. HEMMSTOFFABHAENGIGE TRANSKRIPTIONEILE AKTIVIERUNG VON GENEN, DIE FUER
63
TRANSPORTER CODIEREN
3.6.1. BEHANDLUNG VON PROXIMALEN NIERENTUBULI MIT CDCL 2 UND TIA 63
FUEHRT ZUR UEBEREXPRESSION VON MRP2
3.6.2. RT-PCR 65
3.6.2.1. PCR LINEARITAET DER PCR AMPLIFIKATION 66
3.6.2.2. EXPRESSIONSANALYSEN VON MRP2 UND P-GP 67
4. DISKUSSION 69
5. Z U S A M M E N F A S S U NG 75
6. LITERATURVERZEICHNIS 76
7. A N H A NG 90
M
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