Charakterisierung der M7-anti-mitochondrialen Autoantikörper von Patienten mit Myokarditis und dilatativer Kardiomyopathie:
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
1.
EINLEITUNG
3
1.1
ENTZUENDLICHE
HERZMUSKELERKRANKUNGEN
UND
KARDIOMYOPATHIEN
3
1.1.1
MYOKARDITIS
-
DEFINITION,
DIAGNOSE
UND
URSACHEN
3
1.1.1
DIE
DILATATIVE
KARDIOMYOPATHIE
ALS
FOLGE
EINER
VIRUSMYOKARDITIS
5
1.2
MITOCHONDRIALE
PROTEINE
ALS
AUTOANTIGENE
BEI
IMMUNERKRANKUNGEN
7
1.2.1
DIE
SONDERSTELLUNG
DER
MITOCHONDRIEN
UNTER
DEN
ZELLORGANELLEN
UND
DEREN
KONSEQUENZEN
FUER
DAS
IMMUNSYSTEM
7
1.2.2
ANTI-MITOCHONDRIALE
ANTIKOERPER
BEI
VERSCHIEDENEN
INFEKTIONS
UND
AUTOIMMUNKRANKHEITEN
9
1.3
ANTI-MITOCHONDRIALE
ANTIKOERPER
VOM
M7-TYP
11
1.4
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
12
2. MATERIAL
14
2.1
CHEMIKALIEN
14
2.2
ENZYME
16
2.3
MARKER
16
2.4
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
16
2.5
MEDIEN,
LOESUNGEN
UND
PUFFER
17
2.6
GERAETE
20
3.
METHODEN
21
3.1
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
21
3.1.1
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
21
3.1.2
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
MITTELS
ACETON
21
3.1.3
FAELLUNG
VON
PROTEINEN
MIT
TRICHLORESSIGSAEURE
21
3.1.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
22
3.1.5
FIXIERUNG
UND
FAERBUNG
VON
PROTEINGELEN
MIT
COOMASSIE
BRILLIANTBLAU
23
3.1.6
EXPRESSION
DER
6HDNO
IN
E.
COLI
UND
REINIGUNG
AUS
DEM
ROHEXTRAKT
23
3.1.7
ENZYMATISCHER
VERDAU
DER
6HDNO
23
3.1.8
ISOLIERUNG
UND
FRAKTIONIERUNG
VON
MITOCHONDRIEN
AUS
RATTENLEBER
24
3.2
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
25
3.2.1
ELISA
25
3.2.2
WESTERN
BLOT
26
3.2.3
IMMUNDEKORATION
IMMOBILISIERTER
PROTEINE
26
3.2.4
HERSTELLUNG
SPEZIFISCHER
ANTISEREN
27
3.2.5
ISOLIERUNG
SPEZIFISCHER
IMMUNGLOBULINE
27
3.2.6
KONZENTRIERUNG
GEREINIGTER
ANTIKOERPER
27
3.2.7
TYPISIERUNG
VON
ANTIKOERPER-SUBKLASSEN
28
3.2.8
IN
VITRO
NEUTRALISATION
DER
ANTI-MITOCHONDRIALEN
ANTIKOEPEM
28
3.2.9
IN
VIVO
NEUTRALISATION
DER
ANTI-MITOCHONDRIALEN
ANTIKOERPERN
29
3.2.10
RADIALE
IMMUNDIFIUSION
29
3.2.11
IMMUNPRAEZIPITATION
DURCH
DOPPELTE
GELDIFFUSION
29
3.2.12
IMMUNELEKTROPHORESE
30
3.2.13
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ-HISTOLOGIE
30
3.3
ZELLKULTUR
31
3.3.1
ERSTELLEN
EINER
KARDIOMYOZYTEN-PRIMAERKULTUR
31
3.3.2
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ-ZYTOLOGIE
3
2
4.
ERGEBNISSE
33
4.1
PRAEVALENZ
DER
ANTI-M7
AUTOANTIKOERPER
IN
SEREN
VON
PATIENTEN
MIT
VERSCHIEDENEN
HERZKRANKHEITEN
33
4.1.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
UNTERSUCHTEN
PATIENTEN
34
4.1.2
ANTIGENERKENNUNG
DER
ANTI-M7
SEREN
IM
WESTERN
BLOT
36
4.1.3
VERTEILUNG
DER
IM
WESTERN
BLOT
ANTI-M7-POSITIVEN
SEREN
39
4.1.4
ANTI-M7
ANTIKOERPERBESTIMMUNG
IM
ELISA
41
4.1.4.1
ANTIGENPRAEPARATION
FUER
DEN
ANTI-M7-ELISA
42
4.1.4.2
BINDUNG
DER
6HDNO
AN
DIE
MIKROTITERPLATTE
43
4.1.4.3
ERMITTLUNG
DES
REFERENZBEREICHES
FUER
DIE
ERGEBNISINTERPRETATION
DES
ANTI-M7-ELISA
44
4.1.4.4
SENSITIVITAET
UND
SPEZIFITAET
DES
ANTI-M7-ELISA
45
4.1.5
VERTEILUNG
DER
IM
ELISA
ANTI-M7-POSITIVEN
SEREN
48
4.1.6
QUANTIFIZIERUNG
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
IN
PATIENTENSEREN
MIT
HILFE
DES
ELISA
49
4.1.7
IGG
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
IN
HUMANEN
SEREN
51
4.2
IDENTIFIZIERUNG
SPEZIFISCHER
EIGENSCHAFTEN
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
53
4.2.1
IN
VITRO
NEUTRALISATION
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
53
4.2.2
BESTIMMUNG
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTE
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
55
4.2.3
IN
VIVO
NEUTRALISATION
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
57
4.2.4
CHARAKTERISIERUNG
DES
VON
DEN
ANTI-M7
ANTIKOERPERN
ERKANNTEN
EPITOPS
INNERHALB
KOVALENT
FLAVINYLIERTER
ENZYME
61
4.2.5
ISOTYPENBESTIMMUNG
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
64
4.3
PATHOGENETISCHE
AUSWIRKUNGEN
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
AUF
DEN
ORGANISMUS
66
4.3.1
ZYTOPATHISCHE
EFFEKTE
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
AM
HERZMUSKELGEWEBE
66
4.3.1.1
IMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNG
HUMANER
HERZMUSKELSCHNITTE
66
4.3.1.2
WIRKUNG
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
AUF
ZELLEN
EINER
KARDIOMYOZYTENKULTUR
68
4.3.2
IMMUNKOMPLEXBILDUNGEN
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
MIT
KORRESPONDIERENDEN
ANTIGENEN
71
5.
DISKUSSION
75
5.1
PRAEVALENZ
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
75
5.2
DIE
MYOKARDITIS
ALS
AUSLOESER
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPERBILDUNG
76
5.2.1
DIE
INDUKTION
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
77
5.2.2
VON
DER
MYOKARDITIS
ZUR
DILATATIVEN
KARDIOMYOPATHIE
78
5.2.3
DIE
IMMUNPATHOGENETISCHE
RELEVANZ
DER
ANTI-M7
AUTOANTIKOERPER
82
5.3
DIE
EPITOPSTRUKTUR
DER
ANTI-M7
ANTIKOERPER
83
5.4
THERAPEUTISCHE ASPEKTE
DER
AUTOIMMUNEN
DILATATIVEN
KARDIOMYOPATHIE
84
6.
ZUSAMMENFASSUNG
87
7.
LITERATUR
88 |
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