Naturstoffe aus Pilzen mit cytotoxischen, cytostatischen sowie Apoptose-induzierenden Eigenschaften auf die humane Colonkarzinomzellinie COLO-320:
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| adam_text | NATURSTOFFE AUS PILZEN MIT CYTOTOXISCHEN, CYTOSTATISCHEN SOWIE
APOPTOSE-INDUZIERENDEN EIGENSCHAFTEN AUF DIE HUMANE
COLONKARZINOMZELLINIE COLO-320 VOM FACHBEREICH BIOLOGIE DER UNIVERSITAET
KAISERSLAUTERN ZUR VERLEIHUNG DES AKADEMISCHEN GRADES *DOKTOR DER
NATURWISSENSCHAFTEN EINGEREICHTE DISSERTATION (D386) VORGELEGT VON
PATRICK KILIP VORSITZENDER: PROF. DR. H. J. SCHMIDT 1. BERICHTERSTATTER:
PROF. DR. T. ANKE 2. BERICHTERSTATTER: PROF. DR. B. BRUENE TAG DER
WISSENSCHAFTLICHEN AUSSPRACHE 19. MAI 2003 KAISERSLAUTERN 2003
INHALTSVERZEICHNIS IY_ 1 EINLEITUNG 1 1.1 DICKDARMKREBS 1 1.2 APOPTOSE 7
1.3 ZIELSETZUNG 9 2 MATERIAL UND METHODEN 10 2.1 CHEMIKALIEN 10 2.2
MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN 12 2.2.1 NAEHRMEDIEN FUER PILZE UND BAKTERIEN
12 2.2.2 MEDIEN FUER ZELLKULTUREN 13 2.2.3 PUFFER UND SALZLOESUNGEN 14 2.3
ORGANISMEN 17 2.3.1 BEARBEITETE PILZSTAEMME 17 2.3.2 TESTORGANISMEN FUER
DIE BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 18 2.3.2.1 BAKTERIEN UND PILZE 18
2.3.2.2 NEMATODEN 18 2.3.2.3 ZELLINIEN 19 2.3.3 VERMEHRUNG UND LAGERUNG
VON ZELLINIEN UND BAKTERIENKULTUREN 19 2.3.3.1 KULTIVIERUNG
EUKARYONTISCHER ZELLKULTUREN 19 2.4 SCREENING NACH PILZEN MIT
CYTOTOXLSCHER WIRKUNG 20 2.4.1 GEWINNUNG VON ROHEXTRAKTEN FUER DAS
SCREENING 20 2.4.2 SCREENING NACH CYTOTOXISCHEN WIRKSTOFFEN 20 2.5
KULTIVIERUNG DER AKTIVEN PILZE IN SUBMERSKULTUR 21 2.5.1 FERMENTATION
DER IM SEREENING AUFGEFALLENEN PILZSTAEMME IN SCHUETTELKULTUR 21
2.5.2FERMENTATION VON STAEMMEN MIT CYTOTOXISCHER AKTIVITAET UND
HERSTELLUNG VON ROHEXTRAKTEN FUER DIE AURREINIGUNG 21 2.5.3
FERMENTATIONSANALYSEN 22 2.5.3.1 PH-WERT 22 2.5.3.2 ENZYMATISCHE
BESTIMMUNG DES GLUCOSE- UND MALTOSEGEHALTES 22 2.5.3.3
MYCELTROCKENGEWICHT 23 2.5.3.4 ABGASANALYTIK 23 2.5.3.5 BESTIMMUNG DER
BIOLOGISCHEN AKTIVITAET DER PILZEXTRAKTE 23 2.5.4 MEDIENVERSUCH 23 2.6
METHODEN ZUR REINIGUNG UND PHYSIKALISCH-CHEMISCHEN CHARAKTERISIERUNG DER
SEKUNDAERMETABOLITE 24 2.6.1 CHROMATOGRAPHISCHE METHODEN 24 2.6.2
DUENNSCHIOHTCHROMATOGRAPHIE 25 2.6.3 BIOAUTOGRAPHIE (PRAEPARATIVE DC) 26
2.6.4 HPLC-ANALYTIK 26 2.6.5 SPEKTROSKOPIE 27 INHALTSVERZEICHNIS 2.7
BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG 28 2.7.1 CYTOTOXIZITAETSTEST 28 2.7.1.1
MIKROTITERPLATTENTEST VON SUSPENSIONSKULTUREN (HL-60, JURKAT) 28 2.7.1.2
MIKROTITERPLATTENTEST VON MONOLAYERKULTUREN (COLO-320, HELA S3, HT-29,
DLD-1 ,HEPG-2, MCF-7, HCA-7) 28 2.7.1.3 GIEMSA-FAERBUNG 29 2.7.1.4
XTT-ZELLPROLIFERATION ASSAY 29 2.7.1.5 BESTIMMUNG DER
WAOHSTUMSGESOHWINDIGKEIT VON COLO-320 ZELLEN 30 2.7.2 CASPASE-3, -8, -9
AKTIVITAETS-ASSAY 30 2.7.3 EINBAU RADIOAKTIVER VORSTUFEN IN
SAEUREFAELLBARES MATERIAL IN VIVO 31 2.7.4 PLASMIDVEKTOREN 32 2.7.5
TRANSFEKTIONSMETHODEN 33 2.7.5.1 ELEKTROPORATION VON COLO-320-ZELLEN 33
2.7.5.2 ELEKTROPORATION VON JURKAT-ZELLEN 33 2.7.5.3 ELEKTROPORATION VON
HELA S3 ZELLEN 33 2.7.6 REPORTERGEN-ASSAYS 34 2.7.6.1 COX-2 PROMOTOR
KONTROLLIERTE REPORTERGENEXPRESSION 34 2.7.6.2 TNF-A PROMOTOR
KONTROLLIERTE REPORTERGENEXPRESSION 34 2.7.6.3 NFKB ABHAENGIGE
SIGNALTRANSDUKTION 35 2.7.6.4 AP-1 ABHAENGIGE SIGNALTRANSDUKTION 35 2.7.7
NBT-DIFFERENZIERUNGSTEST 35 2.7.8 DNA-FRAGMENTIERUNGSGEL 36 2.7.8.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON NUKLEINSAEUREN 36 2.7.9 COX-2 WESTERN BLOT
37 2.7.10 AGARDIFFUSIONSTEST 38 2.7.11 PFLANZENKEIMUNGSTEST 38 2.7.12
TEST AUF NEMATIZIDE AKTIVITAET 38 2.7.13 REAKTION MIT L-CYSTEIN 39 2.7.14
PILZBESTIMMUNG DURCH PHYLOGENETISCHEN VERGLEIOH VON RDNA- SEQUENZEN 39 3
ERGEBNISSE 40 3.1 VALIDIERUNG VON TESTSYSTEMEN IN COLO-320 ZELLEN ZUR
BESTIMMUNG VON CYTOTOXISCHEN UND CYTOSTATISCHEN EIGENSCHAFTEN 40 3.1.1
BESTIMMUNG DER WAOHSTUMSGESCHWINDIGKEIT VON COLO-320 ZELLEN 40 3.1.2
VERGLEICH VERSCHIEDENER AUSWERTEVERFAHREN DES CYTOTOXIZITAETSASSAYS 41
3.2 SCREENING NACH CYTOTOXISCHEN BZW. CYTOSTATISCHEN VERBINDUNGEN 43 3.3
ISOLIERUNG VON CYTOTOXISCHEN, CYTOSTATISCHEN SOWIE
APOPTOSE-INDUZIERENDEN VERBINDUNGEN 45 3.3.1
5-(2 -OXOHEPTADECYL)RESORCINOL UND 5-(2 -OXONONADECYL)RESOROINOL AUS TA
96244 45 3.3.1.1 PRODUKTIONSSTAMM TA96244 45 3.3.1.2 FERMENTATION VON TA
96244 45 3.3.1.3 ISOLIERUNG VON 5-(2 -OXOHEPTADECYL)RESORCINOL UND
5-(2 -OXONONADECYL)RESOROINOL AUS TA 96244 47 3.3.1.4
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON
5-(2 -OXOHEPTADECYL)-RESORCINOL UND 5-(2 -OXONONADECYL)RESORCINOL 48
3.3.2 PF-E99156-1, PF-E99156-2 UND PF-E99156-6 AUS DEM ENDOPHYTEN E
99156 53 3.3.2.1 PRODUKTIONSSTAMM E 99156 53 INHALTSVERZEICHNIS VI
33.2.2 FERMENTATION VON E 99156 54 3.3.2.3 ISOLIERUNG VON PF-99156-1,
PF-99156-2 UND PF-99156-6 AUS E 99156 55 33.2.4 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG VONPF-E99156-1, PF-E99156-2 UNDPF-E99156-6 56 3.3.3
PF-E99376-1 AUS DEM ENDOPHYTEN E 99376 61 3.3.3.1 PRODUKTIONSSTAMM E
99376 61 3.3.3.2 FERMENTATION VON E 99376 62 3.3.3.3 ISOLIERUNG VON
PF-99376-1 AUS EINER 20-1-FERMENTATION VON E 99376 62 3.3.3.4
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON PF-E99376-1 63 3.3.4
ISOBUTYRYLNEOSOLANIOL AUS DEM ENDOPHYTEN E 99153 67 3.3.4.1
PRODUKTIONSSTAMM E 99153 67 3.3.4.2 FERMENTATION VON E 99153 68 3.3.4.3
ISOLIERUNG VON ISOBUTYRYLNEOSOLANIOL AUS E 99153 69 3.3.4.4
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON ISOBUTYRYLNEOSOLANIOL 70
3.3.5 CYTOCHALASIN E AUS DEM ENDOPHYTEN E 99420 73 33.5.1
PRODUKTIONSSTAMM E 99420 73 3.3.5.2 FERMENTATION VON E 99420 74 3.3.5.3
ISOLIERUNG VON CYTOOHALASIN E AUS E 99420 75 3.3.5.4
PHYSIKALISCH-CHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG VON CYTOCHALASIN E 76 3.3.6
PFTOMOPSOLID A AUS DEM ENDOPHYTEN E 99244 80 3.3.6.1 PRODUKTIONSSTAMM E
99244 80 3.3.6.2 FERMENTATION VON E 99244 81 3.3.6.3 ISOLIERUNG VON
PHOMOPSOLID A AUS E 99244 82 3.3.6.4 PHYSIKALISCH-CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG VON PHOMOPSOLID A 82 3.3.7 WEITERE FERMENTATIONEN 85
3.3.7.1 BREFELDINA AUS DEM IMPERFEKTEN STAMM TA 182-95 85 3.3.7.2
6-METHYL-9-P-D-RIBOFURANOSYLPURIN AUS DEM BASIDIOMYCETEN 99037 85
3.3.7.3 STROBILURIN D AUS DEM BASIDIOMYCETEN 99038 86 3.3.7.4
PSATHYRELLON AAUS DEM BASIDIOMYCETEN 96321 86 3.3.7.5 MYCORRHIZIN A AUS
DEM ENDOPHYTEN E99002 87 3-4 OELOLUGLSCHE CHARAKTERISIERUNG DER
ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 88 3.4.1 TJYTOTOXIZITAET 88 34.1.1
WACHSTUMSHEMMUNG IN COLO-320 ZELLEN 88 34.1.2 WACHSTUMSHEMMUNG IN
VERSCHIEDENEN ZELLINIEN 94 3.4.2 INDUKTION DER APOPTOSE 97 3.4.2.1
ETABLIERUNG UND OPTIMIERUNG EINES CASPASE-3 AKTIVITAETSASSAYS IN COLO-320
97 3.4.2.2 UNTERSUCHUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN IM CASPASE-3
AKTIVITAETSASSAY IN COLO-320 ZELLEN 102 3.4.2.3 CASPASE-3 AKTIVITAETSASSAY
IN VERSCHIEDENEN COLONKARZINOM-ZELLINIEN 105 3.4.2.4 WEITERE
UNTERSUCHUNGEN ZUR APOPTOSE-INDUKTION 106 3.4.2.5 DNA-FRAGMENTIERUNGSGEL
110 3.4.3 EINBAU RADIOAKTIV MARKIERTER VORSTUFEN IN SAEUREFAELLBARES
MATERIAL IN VIVO 111 3.4.3.1 5-(2 -OXOHEPTADECYL)RESORCINOL(L) . 111
3.4.3.2 PF-E99156-1(3) 112 3.4.3.3 PF-E-99376-1 112 3.4.3.4
ISOBUTYRYLNEOSOLANIOL (7) 113 3.4.3.5 CYTOCHALASIN E (8) 113 3.4.3.6
PHOMOPSOLID A (9) 114 3.4.3.7 BREFELDINA(10) 115 3.4.4 INDUKTION DER
DIFFERENZIERUNG IN DER HUMANEN LEUKAEMIEZELLINIE HL-60 115
INHALTSVERZEICHNIS VU 3.4.5 EINFLUSS AUFDIECOX-2 EXPRESSION 118 3.4.5.1
OPTIMIERUNG EINES COX-2 REPORTERGENASSAYS IN COLO-320 ZELLEN 118 3.4.5.2
COX-2 WESTERN BLOT 119 3.4.5.3 UNTERSUCHUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN
IM COX-2 REPORTERGENASSAY IN COLO-320 ZELLEN 120 3.4.6 EINFLUSS DER
ISOLIERTEN VERBINDUNGEN AUF VERSCHIEDENE SIGNALTRANSDUKTIONSWEGE 121
3.4.7 WEITERE BIOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN
123 3.4.7.1 ANTIMIKROBIELLE EIGENSCHAFTEN 123 3.4.7.2 EINFLUSSAUF DIE
SAMENKEIMUNG VON PFLANZEN 125 3.4.7.3 TEST AUF NEMATIZIDE WIRKUNG 125
3.4.7.4 REAKTION MIT CYSTEIN 126 4 DISKUSSION 127 4.1 CYTOTOXISCHE
VERBINDUNGEN IN DER TUMORTHERAPIE 127 4.2 ASSAYSYSTEME ZUR UNTERSUCHUNG
CYTOTOXISCHER UND CYTOSTATISCHER WIRKUNGEN AUF DIE HUMANE
DICKDARMKARZINOM-ZELLINIE COLO-320 128 4.3 SCREENING NACH CYTOTOXISCHEN
BZW. CYTOSTATISCHEN VERBINDUNGEN 130 4.4 CYTOTOXISCHE BZW. CYTOSTATISCHE
NATURSTOFFE AUS PILZEN 132 4.4.1 5-(2 -OXOHEPTADEOYL)RESOROINOL (1) UND
5-(2 -OXONONADEOYL)RESORCINOL (2) AUS TA 96244 132 4.4.2 PF-E99156-1
(3), PF-E99156-2 (4) UND PF-E99156-6 (5) AUS DEM ENDOPHYTEN E99156 133
4.4.3 PF-99376-1 (6) AUS DEM ENDOPHYTEN E 99376 134 4.4.4
ISOBUTYRYLNEOSOLANIOL (7) AUS DEM ENDOPHYTEN E 99153 136 4.4.5
CYTOCHALASIN E (8) AUS DEM ENDOPHYTEN E 99420 138 4.4.6 PHOMOPSOLID A
(9) AUS DEM ENDOPHYTEN E 99244 140 4.4.7 BREFELDIN A (10) AUS DEM
IMPERFECTEN PILZ 182-95 PENICILLIUM SP. 141 4.4.8
6-METHYT-9-SS-D-RIBOFURANOSYLPURIN (11) AUS DEM BASIDIOMYCETEN COLLYBIA
MACULATA 99037 141 4.4.9 STROBILURIN D (12) AUS DEM BASIDIOMYCETEN
MYCENA SP. 99038 141 4.4.10 PSATHYRELLON A (13) AUS DEM BASIDIOMYCETEN
HEBELOMA CRUSTULINIFORME TA 96321 143 4.4.11 MYCORRHIZIN A (14) AUS DEM
ENDOPHYTEN E 99002 144 4.5 WEITERE UNTERSUCHUNGEN ZUM WIRKMECHANISMUS
DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN 145 4.5.1 INDUKTION DER APOPTOSE 145 4.5.1.1
CASPASEN ALS NACHWEIS DER APOPTOSE 146 4.5.1.2 ETABLIERUNG UND
OPTIMIERUNG EINES CASPASE-3 AKTIVITAETSASSAYS ZUR ERFASSUNG
APOPTOSE-INDUZIERENDER SUBSTANZEN IN DER ZELLINIE COLO-320 146 4.5.1.3
UNTERSUCHUNG DER ISOLIERTEN VERBINDUNGEN IM CASPASE-3 AKTIVITAETSASSAY IN
COLO-320-ZELLEN 148 4.5.1.4 SIGNALWEGE DER APOPTOSE-INDUKTION 149 4.5.2
UNTERSUCHUNG DES EINFLUSSES DER VERBINDUNGEN AUF VERSCHIEDENE SIGNALWEGE
IN DER ZELLE ANHAND VON REPORTERGENASSAYS 155 4.6 ZUSAMMENFASSUNG DER
BIOLOGISCHEN WIRKUNGEN DER ISOLIERTEN NATURSTOFFE 159 INHALTSVERZEICHNIS
VIII 4.7 SCHLUUEBETRACHTUNG 161 5 ZUSAMMENFASSUNG 162 6 ANHANG 163 7
LITERATURVERZEICHNIS 168
|
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| spelling | Filip, Patrick Verfasser aut Naturstoffe aus Pilzen mit cytotoxischen, cytostatischen sowie Apoptose-induzierenden Eigenschaften auf die humane Colonkarzinomzellinie COLO-320 vorgelegt von Patrick Filip 2003 VIII, 179 S. graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Kaiserslautern, Univ., Diss., 2003 Colonkrebs (DE-588)4148225-6 gnd rswk-swf Biopharmazie (DE-588)4006890-0 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Colonkrebs (DE-588)4148225-6 s Biopharmazie (DE-588)4006890-0 s DE-604 GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=010707072&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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