Interaktion von Thrombozyten mit dem Endothel der Blutgefäße von Tumoren im Verlauf der Tumorangiogenese:
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Seite
I. EINLEITUNG 1
n. METHODIK 6
1. Versuchstiere 6
2. Modell der transparenten Rückenhautkammer 6
2.1. Einfuhrung in das Modell der transparenten Rückenhautkammer 6
2.2. Präparation der transparenten Rückenhautkammer an der Maus 8
2.2.1. Vorbereitungen 8
2.2.2. Protokoll der Präparation 9
2.3. Kriterien einer intakten Kammerpräparation 11
2.4. Venöser Zugang 11
3. Tumoren 12
3.1. Kultur der Tumorzellen 12
3.2. Vorbereitung der Tumorzellen zur Implantation 13
3.3. Implantation der Tumorzellen 13
4. Fluoreszenzmarkierung von Thrombozyten 14
4.1. Blutentnahme an Spendertieren 14
4.2. Isolierung und Fluoreszenzmarkierung der Thrombozyten 15
4.3. Validierung der Methode 16
4.3.1. Durchflußzytometrie 16
4.3.2. Aggregometrie 18
5. Darstellung des Plasmaflusses in der intravitalen Fluoreszenzmikroskopie 19
5.1. Fluoreszenzmarkierung von Dextran 19
6. Intravitale Fluoreszenzmikroskopie 20
6.1. Aufbau des Mikrozirkulationsarbeitsplatzes 20
6.2. Durchfuhrung der Intravitalmikroskopie 22
7. Videobildanalyse 23
7.1. Gerätekonfiguration der Auswerteeinheit 23
7.2. Kalibrierung des Bildanalysesystems 23
I
7.3. Quantifizierte Parameter 24
7.3.1. Gefäßdurchmesser 24
7.3.2. Fließgeschwindigkeit der Erythrozyten 24
7.3.3. Thrombozyten-Endothelinteraktionen 25
7.3.3.1. Rollende Thrombozyten 25
7.3.3.2. Adhärente Thrombozyten 25
7.4. Berechnung der Scherrate 26
8. Thrombozyten-Endothelinteraktionen im Verlauf der Tumorangiogenese 26
8.1. Versuchsprotokoll 26
8.2. Versuchsgruppen 27
9. Stimulation der Thrombozyten-Endothelinteraktion 28
9.1. KalziumionophorA23187 28
9.2. Vorbereitung des Kalziunionophors A23187 28
9.3. VersuchsprotokoJl 29
9.4. Versuchsgruppen 30
10. Darstellung der Ergebnisse und statistische Bewertung 31
III. ERGEBNISSE 32
1. Tumoren 32
2. Fluoreszenzmarkierung von Thrombozyten 35
2.1. Durchflußzytometrie 35
2.2. Aggregometrie 36
2.3. Intravitale Fluoreszenzmikroskopie 37
3. Verlauf des Tumorwachstums 39
3.1. Mikrohämodynamik 39
3.2. Thrombozyten-Endothelinteraktionen 43
4. Stimulation des mikrovaskulären Endothels mit Kalziumionophor A23187 45
4.1. Mikrohämodynamik
4.2. Thrombozyten-Endothelinteraktion 4°
II
IV. DISKUSSION 51
1. Diskussion der Methodik 51
1.1. Modell der transparenten Rückenhautkammer 51
1.2. Tumoren 53
1.3. Fluoreszenzmarkierung von Thrombozyten 54
1.3.1. Prinzip 54
1.3.2. Validierung der Methodik 57
1.3.2.1. Mechanismen der Thrombozytenaktivierung und Thrombozytendegranulation 57
1.3.2.2. Durchflußzytometrie 59
1.3.2.3. Aggregometrie 61
1.4. Intravitale Fluoreszenzmikroskopie und off-line Videoanalyse 63
1.5. Anwendung des Kalziumionophors A23187 65
2. Diskussion der Ergebnisse 67
2.1. Beobachtungen im Verlauf der Tumorangiogenese und des Tumorwachstums 67
2.1.1. Übersicht über grundlegende Studien zur Tumormikrozirkulation 67
2.1.2. Hämodynamik im Verlauf des Wachstums von LLC-1 und BFS-1 Tumoren 70
2.1.3. Physikalische Einflußgrößen in der Mikrozirkulation 72
2.2. Thrombozyten-Endothelinteraktion in der Tumormikrozirkulation 74
2.2.1. Grundlagen der Thrombozyten-Endothelinteraktionen 74
2.2.2. Thrombozyten-Endothleinteraktion im Verlauf der Tumorangiogenese 79
2.3. Versuche zur Stimulation der Thrombozyten-Endothelinteraktion in Tumoren 85
2.3.1. Einfluß des Kalziumionophors A23187 auf die Hämodynamik 85
2.3.2. Kalziumionophor A23187 undThrombozyten-Endothelinteraktionen 86
V. ZUSAMMENFASSUNG UND SCHLUSSFOLGERUNG 91
VI. LITERATURVERZEICHNIS 94
VII. ABSCHLIESSENDE BEMERKUNGEN 115
VIII. CURRICULUM VITAE 116
III
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