Induktion oxidativer DNA-Schäden und Beeinflussung der Nukleotidexzisionsreparatur durch Arsen-, Cadmium- und Nickelverbindungen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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INDUKTION OXIDATIVER DNA-SCHAEDEN UND BEEINFLUSSUNG DER
NUKLEOTIDEXZISIONSREPARATUR DURCH ARSEN-, CADMIUM- UND
NICKELVERBINDUNGEN
ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES EINES DOKTORS DER
NATURWISSENSCHAFTEN
VON DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND BIOWISSENSCHAFTEN
DER UNIVERSITAET KARLSRUHE (TH)
ANGENOMMENE
DISSERTATION
VON
DIPLOM-LEBENSMITTELCHEMIKERIN
TANJA SCHWERDTLE
AUS
PFORZHEIM
DEKAN: PROF. DR. M. METZLER
1. GUTACHTER: PROF. DR. A. HARTWIG
2. GUTACHTER: PROF. DR. H. PUCHTA
TAG DER MUENDLICHEN PRUEFUNG: 13.12.02
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
1 ZUSAMMENFASSUNG 1
2 EINLEITUNG 4
2.1 THEMATISCHE EINFUEHRUNG 4
2.2 CHARAKTERISTIK DER UNTERSUCHTEN METALLE 5
2.2.1 ARSEN 5
2.2.2 CADMIUM 8
2.2.3 NICKEL 10
2.3 BENZO[A]PYREN 12
2.4 INDUKTION UND REPARATUR OXIDATIVER DNA-SCHAEDEN 15
2.5 DIE NUKLEOTIDEXZISIONSREPARATUR 17
3 FRAGESTELLUNG 18
4 MATERIAL UND METHODEN 20
4.1 ZELLKULTUR 20
4.1.1 ZELLEN 20
4.1.2 KOLONIEBILDUNGSFAEHIGKEIT 20
4.2 VORBEREITUNG DER INKUBATIONSLOESUNGEN UND -SUSPENSIONEN 21
4.2.1 BENZO[A]PYREN UND METABOLITE 21
4.2.2 WASSERLOESLICHE METALLVERBINDUNGEN 22
4.2.3 SCHLECHT WASSERLOESLICHE, PARTIKULAERE METALLVERBINDUNGEN 22
4.3 ALKALISCHE ENTWINDUNG - NACHWEIS VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN IN
KULTIVIERTEN ZELLEN 23
4.4 PM2-TEST - NACHWEIS DER INDUKTION VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN IN
ISOLIERTER
PM2 DNA UND DER HEMMUNG DER FPG 27
4.4.1 BESTIMMUNG VON DNA-STRANGBRUECHEN UND FPG-SENSITIVEN STELLEN 27
4.4.2 BESTIMMUNG DER FPG-ENZYMAKTIVITAET 29
4.5 HPLC/FLUORESZENZ-ASSAY ZUM NACHWEIS VON BPDE-DNA-ADDUKTEN 30
4.6 BESTIMMUNG DER INTRAZELLULAEREN VERTEILUNG VON NICKEL MITTELS
GRAPHITROHR- ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 33
5 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 35
5.1 BENZOFAJPYREN UND SEINE METABOLITE 35
5.1.1 ZYTOTOXIZITAET 36
5.1.2 INDUKTION VON BPDE-DNA-ADDUKTEN 38
IMAGE 3
II
5.1.3 INDUKTION VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN 42
5.1.4 REPARATUR DER INDUZIERTEN BPDE-DNA-ADDUKTE 45
5.2 ARSEN 48
5.2.1 ZYTOTOXIZITAET 49
5.2.2 INDUKTION VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN 54
5.2.3 EINFLUSS AUF DIE AKTIVITAET DER FPG 67
5.2.4 KOMBINATIONSUNTERSUCHUNGEN MIT (+)-AN/I-BPDE 69
5.3 CADMIUM 79
5.3.1 ZYTOTOXIZITAET 79
5.3.2 INDUKTION VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN IN HELA S3 UND A549 ZELLEN 82
5.3.3 KOMBINATIONSUNTERSUCHUNGEN MIT (+)-A/I-BPDE 89
5.4 NICKEL 96
5.4.1 ZYTOTOXIZITAET 96
5.4.2 INDUKTION VON OXIDATIVEN DNA-SCHAEDEN IN HELA S3 UND A549 ZELLEN 99
5.4.3 KOMBINATIONSUNTERSUCHUNGEN MIT (+)-ARI-BPDE 105
5.4.4 INTRAZELLULAERE VERTEILUNG VON NICKEL 111
6 ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION UND AUSBLICK 116
7 LITERATUR 121
8 ANHANG 134
8.1 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 134
8.2 LISTE DER VERWENDETEN CHEMIKALIEN 136
8.3 LISTE DER VERWENDETEN GERAETE UND VERBRAUCHSMATERIALIEN 139
8.4 VERWENDETE LOESUNGEN UND PUFFER 141
8.5 HPLC-ANALYSE 146
8.5.1 HPLC-ANALYSENPROGRAMM 146
8.5.2 OPTIMIERUNG DER HYDROLYSEZEIT 147
8.5.3 KALIBRIERUNG 148
8.6 GRAPHITROHR-ATOMABSORPTIONSSPEKTROSKOPIE 149
8.6.1 TEMPERATURPROGRAMM 149
8.6.2 KALIBRIERUNG 149
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