Untersuchungen zur Funktion und pathophysiologischen Relevanz Zyklonukleotid-aktivierter Kationenkanäle im ZNS und der Retina anhand CNGA3-defizienter Mäuse:
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
2
L
INHALTSVERZEICHNIS
1
Z
YKLONUKLEOITD
-
AKTIVIERTE
K
ATIONENKANAELE
.
8
1.1
ZYKLONUKLEOTID-REZEPTOREN
.
8
1.2
DIE
FAMILIE
DER
CNG-KANAELE
.
8
1.3
DIE
FUNKTION
DER
CNG-KANAELE
IM
SEH
UND
RIECHPROZESS
.
9
2
D
ER
H
IPPOCAMPUS
UND
DIE
A
MYGDALA
AUS
FUNKTIONELLER
S
ICHT
.
10
2.1
DER
HIPPOCAMPUS
.
10
2.1.1
ANATOMIE
.
11
2.1.2
FUNKTIONEN
.
11
2.2
DIE
AMYGDALA
.
12
2.2.1
ANATOMIE
.
12
2.2.2
FUNKTIONEN
.
12
2.3
MOLEKULARE
UND
PHYSIOLOGISCHE
KORRELATE
DES
LERNENS
.
14
3
D
IE
N
ETZHAUT
.
15
3.1.1
AUFBAU
.
15
3.1.2
SKOTOPISCHES
UND
PHOTOPISCHES
SYSTEM
.
16
3.1.3
DIE
PHOTOTRANSDUKTION
.
16
3.1.4
NETZHAUTDEGENERATION
.
17
3.1.5
TOTALE
FARBENBLINDHEIT
.
18
4
A
POPTOSE
.
18
5
Z
IELSTELLUNG
.
19
IV.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
_
.
20
1
V
ERSUCHSTIERE
.
20
1.1
VERWENDETE
MAUSLINIEN
.
20
1.2
HALTUNG
UND
ZUCHT
.
20
1.3
GENOTYPISIERUNG
MITTELS
PCR
.
20
2
G
EWEBSISOLIERUNG
.
20
2.1
ALLGEMEIN
.
20
2.2
ISOLIERUNG
VON
ZNS-GEWEBE
DER
MAUS
.
21
2.2.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMTGEHIM
FUER
DIE
HISTOLOGIE
.
21
2.2.2
PRAEPARATION
VON
RIECHKOLBEN,
CEREBELLUM
UND
HIPPOCAMPUS
.
21
2.2.3
MIKROPRAEPARATION
DER
BASOLATERALEN
AMYGDALA
.
21
2.3
ISOLIERUNG
VON
AUGENGEWEBE
DER
MAUS
.
22
2.3.1
ISOLIERUNG
DER
NETZHAUT
FUER
DIE
HISTOLOGIE
.
22
2.3.2
ISOLIERUNG
DER
NETZHAUT
FUER
PROTEIN
ODER
RNS-EXTRAKTION
.
22
2.3.3
WHOLE
MOUNT
PRAEPARATE
DER
MAUSNETZHAUT
.
22
2.3.4
ISOLIERUNG
DER
NETZHAUT
FUER
DIE
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
22
3
RNS-I
SOLIERUNG
.
23
3.1
ISOLIERUNG
VON
POLY(A)-RNS.
.
23
3.2
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNS
.
,
.
23
4
S
YNTHESE
VON
EINZELSTRAENGIGER
C
DNS
.
24
5
P
OLYMERASE
-K
ETTENREAKTION
.
24
INHALTSVERZEICHNIS
3
5.1
SEMIQUANTITATIVE
RT-PCR
.
25
6
A
UFTRENNUNG
UND
I
SOLIERUNG
VON
DNS-F
RAGMENTEN
.
25
6.1
POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
.
25
6.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
26
6.3
ELEKTROELUTION
.
26
6.4
DNS-ISOLIERUNG
MITTELS
GFX-SAEULEN
.
26
7
A
UFREINIGUNG
UND
K
ONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
N
UKLEINSAEUREN
.
26
7.
1
PRAEZIPITATION
VON
NUCLEINSAEUREN
.
26
7.2
PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION
.
27
7.3
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
27
8
R
ESTRIKTIONSVERDAU
.
27
9
D
EPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNS
.
28
10
L
IGATION
VON
DNS
F
RAGMENTEN
.
28
11
S
EQUENZIERUNG
.
28
12
V
ERMEHRUNG
UND
I
SOLIERUNG
VON
P
LASMID
-DNS
.
29
12.1
KULTUR
VON
BAKTERIEN
.
29
12.2
ERZEUGUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
30
12.3
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
.
30
12.4
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNS.
.
30
12.4.1
PLASMIDPRAEPARATION
IM
GROSSMASSSTAB
.
30
12.4.2
PLASMIDPRAEPARATION
IM
KLEINMASSSTAB
.
31
12.5
VERWENDETE
PLASMIDE
.
31
13
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
.
31
13.1
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
.
31
13.2
HERSTELLUNG
VON
DIGOXIGENIN-MARKIERTEN
OLIGO-SONDEN
.
32
13.3
HYBRIDISIERUNG
.
33
13.4
DETEKTION
.
34
13.4.1
RADIOAKTIVDETEKTION
.
34
13.4.2
TYRAMIDAMPLIFIKATION
.
34
13.5
VERWENDETE
LOESUNGEN
.
35
14
I
SOLIERUNG
UND
C
HARAKTERISIERUNG
VON
P
ROTEINEN
.
37
14.1
AUFREINIGUNG
SPEZIFISCHER
PEPTIDANTIKOERPER
.
37
14.2
HERSTELLUNG
VON
GEWEBELYSATEN
.
37
14.3
QUANTIFIZIERUNG
VON
PROTEINEN
.
38
14.4
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
.
38
14.5
WESTERN-BLOT
.
39
15
H
ISTOLOGIE
.
40
15.1
HERSTELLUNG
VON
GEWEBESCHNITTEN
.
40
15.1.1
GEFRIERSCHNITTE
AUS
GEHIRN
.
40
15.1.2
GEFRIERSCHNITTE
AUS
DER
NETZHAUT
.
40
15.2
HISTOLOGISCHE
FAERBUNGEN
.
40
15.2.1
NISSL-FAERBUNG
.
40
15.2.2
HOECHST-FAERBUNG
.
40
15.3
LEKTIN-HISTOCHEMIE
.
41
15.4
IMMUNHISTOCHEMIE
.
41
15.4.1
PROTOKOLL
FUER
GEWEBESCHNITTE
.
41
15.4.2
PROTOKOLL
FUER
WHOLE
MOUNT
RETINAPRAEPARATE
.
42
15.5
TERMINAL
DESOXYRIBOSYL-TRANSFERASE
MEDIATED
DUTP
NICK
END
LAEBELING.
.
42
15.5.1
PROTOKOLL
.
43
16
M
IKROSKOPIE
.
44
16.1
EPIFLUORESZENZMIKROSKOPIE
.
44
INHALTSVERZEICHNIS
4
16.2
LASER-KONFOKALNUKROSKOPIE
.
44
16.3
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
45
16.4
QUANTITATIVE
AUSWERTUNG
.
45
17
ELEKTROPHYSIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AM
HIPPOCAMPUS
.
45
18
VERHALTENSVERSUCHE
.
45
18.1
DISKRIMINIERENDES
ZWEI
PLATTFORM
WATER-MAZE
.
46
18.2
FORCED
SWIMMING
TASK.
.
47
18.3
ANGSTKONDITIONIERUNG
.
47
18.3.1
KONDITIONIERUNG
.
47
18.3.2
SENSITIVIERUNG
.
49
1
E
XPRESSION
VON
CNG-K
ANAELEN
IM
ZNS
.
50
1.1.1
RT-PCR
.
50
1.1.2
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
.
'
.
52
1.1.3
IMMUNHISTOCHEMIE
.
53
2
F
UNKTION
VON
CNG-K
ANAELEN
IM
ZNS
.
54
2.1
ZELLULAERE
ORGANISATION
DES
ZNS
CNGA3-DEFLZIENTER
MAEUSE
.
55
2.2
SYNAPTISCHE
TRANSMISSION
M
CNGA3-DEFLZIENTEN
MAEUSEN
.
56
2.2.1
BASALE
SYNAPTISCHE
TRANSMISSION
IM
HIPPOCAMPUS
.
56
2.2.2
LANGZEITPOTENZIERUNG
IM
HIPPOCAMPUS
.
57
2.2.3
LANGZEITDEPRESSION
IM
HIPPOCAMPUS
.
59
2.3
RAEUMLICHES
LERNEN
IN
CNGA3-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
.
59
2.3.1
WATER
MAZE
.
59
2.3.2
KONTEXTUELLE
ANGSTKONDITIONIERUNG
.
61
2.4
ANGSTVERHALTEN
.
63
2.4.1
AKUSTISCHE
ANGSTKONDITIONIERUNG
.
63
2.4.2
SENSITIVIERUNGSTEST
.
65
2.4.3
FORCED
SWIMMING
TEST
.
66
3
N
ETZHAUT
D
EGENERATION
BEI
CNGA3
DEFIZIENTEN
M
AEUSEN
.
67
3.1
EXPRESSION
VON
CNGA3
IN
DER
RETINA
.
67
3.1.1
IMMUNHISTOCHEMIE
.
67
3.1.2
WESTEM-BLOT
.
68
3.2
VERLUST
VON
SEH-ZAPFEN
.
69
3.2.1
ERDNUSSAGGLUTININ-MARKIERUNG
.
69
3.3
VERLUST
VON
MARKERN
DER
PHOTOTRANSDUKTIONSKASKADE
.
71
3.3.1
OPSINE
.
71
3.3.1.1
MWS-OPSIN
.
71
3.3.1.2
SWS-OPSIN
.
75
3.3.2
WEITERE
PROTEINE
DER
PHOTOTRANSDUKTIONSKASKADE
.
78
3.3.2.1
CNGB3
.
78
3.3.2.2
ZAPFEN-TRANSDUCIN
.
79
3.3.2.3
ZAPFEN-PHOSPHODIESTERASE
.
81
3.3.2.4
GUANYLYLZYKLASE-AKTIVIERENDES
PROTEIN
.
83
3.3.2.5
RETINALE GUANYLYLZYKLASE
.
84
3.4
VERAENDERUNGEN
DER
INNEREN
RETINA
BEI
CNGA3-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
.
84
3.4.1
VERAENDERUNGEN
DER
HORIZONTALZELLEN
.
85
3.4.2
DIE
SYNAPSEN
DER
ZAPFEN
.
86
3.4.3
GO
IMMUNHISTOCHEMIE
ZUR
DARSTELLUNG
VON
ZAPFEN-ON-BIPOLARZELLEN
.
87
3.5
MECHANISMEN
DES
ZELLTODS
.
89
3.5.1
APOPTOSE
.
89
INHALTSVERZEICHNIS
5
3.5.1.1
TUNEL
.
89
3.5.1.2
CASPASE
3
AKTIVIERUNG
.
91
3.5.1.3
CYTOCHROM
C-FREISETZUNG
AUS
DEN
MITOCHONDRIEN
.
92
3.5.2
AKTIVIERUNG
VON
MUELLER-GLIAZELLEN
.
93
3.5.3
NEURON-SPEZIFISCHE
ENOLASE
.
94
3.6
RASTERELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
97
3.7
DIE
SEH-STAEBCHEN
BEI
CNGA3
-/-MAEUSEN
.
98
1
F
UNKTIONEN
VON
CNGA3
IN
R
EGIONEN
DES
ZNS
.100
1.1
UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSION
VON
CNG-KANAELEN
IM
ZNS
DER
MAUS
.
100
1.2
DIE
ROLLE
VON
CNGA3
BEI
DER
SYNAPTISCHEN
PLASTIZITAET
UND
DEM
RAEUMLICHEN
LERNEN
.
101
1.3
VERAENDERTES
ANGSTVERHALTEN
BEI
CNGA3-DEFLZIENTEN
MAEUSEN
.101
2
D
IE
N
EURODEGENERATION
IN
DER
R
ETINA
NACH
V
ERLUST
DER
Z
APFENFUNKTION
.
102
2.1
MOLEKULARE
VERAENDERUNGEN
IN
NICHTFIINKTIONSFAEHIGEN
SEH-ZAPFEN
.103
2.2
KONSEQUENZEN
DES
VERLUSTES
VON
CNGA3
FIER
DIE
INNERE
NETZHAUT
.
104
2.3
MECHANISMUS
DES
ZELLTODS
CNGA3-DEFLZIENTER
SEH-ZAPFEN
.
105
2.3.1
APOPTOSE
.
105
2.3.2
DIE
AKTIVIERUNG
VON
MUELLER-GLIAZELLEN
.
106
2.3.3
DIE
NEURON-SPEZIFISCHE
ENOLASE
ALS
FRUEHER
MARKER
DEGENERIERENDER
SEH-ZAPFEN
.
106
VII.
ZUSAMMENFASSUNG
107
1
P
RIMER
.
109
2
PCR-B
EDINGUNGEN
.110
3
V
ERWENDETE
A
NTIKOERPER
.
111
3.1
PRIMAERANTIKOERPER
.
111
3.2
SEKUNDAERANTIKOERPER
.
112
IX.
LITERATUR
VEREICHNIS
_
113
1
Z
ITIERTE
V
EROEFFENTLICHUNGEN
.
113
2
E
IGENE
V
EROEFFENTLICHUNGEN
.
123
X.
LEBENSLAUF
_
124 |
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| spelling | Michalakis, Stylianos 1975- Verfasser (DE-588)128594179 aut Untersuchungen zur Funktion und pathophysiologischen Relevanz Zyklonukleotid-aktivierter Kationenkanäle im ZNS und der Retina anhand CNGA3-defizienter Mäuse von Stylianos Michalakis 2003 125 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier München, Univ., Diss., 2003 (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=010660411&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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