Phagozyten und deren Interaktion mit Helicobacter pylori:
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2.
EINLEITUNG
.
2
2.1.
M
IKROBIOLOGISCHE
A
SPEKTE
VON
H.
PYLORI
.
2
2.2.
D
IE
P
ATHOGENESE
VON
//,
PYLORI
I
NFEKTIONEN
.
2
2.3.
D
IE
V
IRULENZFAKTOREN
VON
//.
PYLORI
.
4
2.4.
D
IE
//.
PYLORI
INDUZIERTE
I
MMUNANTWORT
.
7
2.4.1.
DIE
ANGEBORENE
IMMUNANTWORT
.
8
2.4.2.
DIE
ADAPTIERTE
IMMUNANTWORT
.
10
2.4.3.
VAKZINIERUNG
.
10
2.5.
D
IE
DURCH
H.
PYLORI
INDUZIERTEN
S
IGNALWEGE
.
11
2.5.1.
TYP
IV
SEKRETIONSSYSTEM-ABHAENGIGE
SIGNALWEGE
.
'.
.
11
2.5.2.
TYP
IV
SEKRETIONSSYSTEM-UNABHAENGIGE
SIGNALWEGE
.
13
3.
MATERIAL
.
YY
.
15
3.1.
B
AKTERIENSTAEMME
.
15
3.2.
P
RIMAERE
Z
ELLEN
UND
Z
ELLINIEN
.
15
3.3.
P
RIMAERANTIKOERPER
.
15
3.4.
S
EKUNDAERANTIKOERPER
.
17
3.5.
S
TIMULANZIEN
UND
I
NHIBITOREN
.
17
3.6.
F
EINCHEMIKALIEN
UND
K
ITS
.
17
3.7.
M
EDIEN
,
P
UFFER
,
L
OESUNGEN
.
:
.
18
3.7.1.
MEDIEN
UND
PLATTEN
FUER
BAKTERIEN
.
18
3.7.2.
MEDIEN
FUER
ZELLKULTUR
.
19
3.8.
P
UFFERUND
L
OESUNGEN
.
20
3.8.1.
MIKROSKOPISCHE
METHODEN
.
20
3.8.2.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.
T.
.
20
3.8.3.
ZYTOKINDETEKTION
DURCH
ELISA
.
20
3.8.4.
SDS
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
20
3.8.5.
COOMASSIEFAERBUNG
.
21
3.8.6.
WESTERN
BLOT
.
21
3.8.7.
IMMUNPRAEZIPITATION
.
21
3.8.8.
AUFREINIGUNG
VON
MEMBRAN
UNDZYTOSOL
.
21
3.8.9.
GTPASE-AKTIVITAETSASSAY
.
22
3.9.
G
ERAETE
UND
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
.
)
.
22
3.10.
C
OMPUTER
UND
S
OFTWARE
.
22
4.
METHODEN
.
23
4.1.
K
ULTUR
VON
H
ELICOBACTER
PYLORI
.
23
4.2.
I
SOLIERUNG
UND
K
ULTUR
VON
Z
ELLEN
.
23
4.2.1.
ZELLINIEN
.
23
4.2.2.
ISOLIERUNG
VON
PBMC
.
24
4.2.3.
ISOLIERUNG
VON
MONOZYTEN
DURCH
ADHAERENZ
.
24
4.2.4.
ISOLIERUNG
VON
MONOZYTEN
DURCH
MAGNETISCHE
ZELLSORTIERUNG
.
25
4.2.5.
KULTUR
VON
DENDRITISCHEN
ZELLEN
.
25
4.3.
I
NFEKTION
DER
Z
ELLEN
MIT
H.
PYLORI
.
26
4.4.
P
HAGOZYTOSEASSAY
(G
ENTAMYCINASSAY
)
.
26
4.5.
M
IKROSKOPISCHE
M
ETHODEN
.
27
4.5.1.
DIFFERENTIELLE
FAERBUNG
VON
INTRA
UND
EXTRAZELLULAEREN
BAKTERIEN
.
27
4.5.2.
DREIFACHIMMUNFLUORESZENZFAERBUNG
.
28
4.5.3.
KONFOKALE
LASER-SCANNMG-MIKROSKOPIE
.
28
4.5.4.
PROBENVORBEREITUNG
FUER
DAS
RASTER
UND
TRANSMISSIONS-EM.
.
28
4.5.5.
HOECHSTFAERBUNG
.
29
4.6.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS-ANALYSE)
.
29
4.7.
D
ETEKTION
VON
Z
YTOKINEN
(ELISA)
.
29
4.8.
A
RBEITEN
MIT
P
ROTEINEN
.
30
4.8.1.
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
.
30
4.8.2.
SDS-POLYACRYLAMIDGE
{ELEKTROPHORESE
.
31
4.8.3.
COOMASSIEFAERBUNG
VON
PROTEINGELEN
.
31
4.8.4.
WESTERN
BLOT
ANALYSE
.
32
4.8.5.
IMMUNPRAEZIPITATION
.
32
4.8.6.
PRAEPARATION
VON
GESAMTZELLYSATEN
.
33
4.8.7.
PRAEPARATION
VON
MEMBRAN
UND
ZYTOSOLFRAKTION
.
33
4.8.8.
EXPRESSION
UND
PRAEPARATION
VON
GST-GEKOPPELTEN
PROTEINEN
.
33
4.8.9.
BESTIMMUNG
DES
AKTIVITAETSSTATUS
DER
GTPASEN
RAEL
UND
CDC42
.
34
5.
MONOZYTEN
UND
DEREN
INTERAKTION
MIT
H.
PYLORI
_
35
5.1.
E
INLEITUNG
.
35
5.2.
E
RGEBNISSE
.
39
5.2.1.
H.
PYLORI
HEMMT
SEINE
EIGENE
PHAGOZYTOSE
M
MONOZYTEN
.
39
5.2.2.
FUER
DIE
AUFNAHME
VON
H.
PYLORI
SIND
VERAENDERUNGEN
DES
AKTINZYTOSKELETTS
DER
MONOZYTEN
ERFORDERLICH
.
41
5.2.3.
H.
PYLORI
HEMMT
AUCH
IN
MAKROPHAGEN
DER
MAUS
DIE
EIGENE
PHAGOZYTOSE
.
43
5.2.4.
DIE
EXPRESSION
DES
TYP
IV
SEKRETIONSSYSTEMS
VON
H.
PYLORI
HAT
EINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
AKTIVIERUNG
DER
GTPASE
CDC42
.
44
5.2.5.
DIE
ANALYSE
VON
VAV
GIBT
KEINEN
HINWEIS
AUF
DIE
UNTERSCHIEDLICHE
AKTIVIERUNG
VON
CDC42
.
49
5.2.6.
DIE
P13K
IST
AN
DER
ANTIPHAGOZYTOSE
DES
H.
PYLORI
WILDTYPS
BETEILIGT
.
51
5.2.
7.
DIE
PI3K
IST
EBENFALLS
AN
DER
PHAGOZYTOSE
VON
H.
PYLORI
DURCH
DIE
MAUS-MAKROPHAGEN-ZELLINIE
J774A.1
BETEILIGT.
.
54
5.2.8.
TYROSINKINASEN
UND
PHOSPHATASEN
SIND
AN
DER
PHAGOZYTOSE
BZW.
ANTIPHAGOZYTOSE
VON
H.
PYLORI
BETEILIGT
.
56
5.2.9.
DIE
PHOSPHATASE
SHP-2
WIRD
NACH
INFEKTION
DER
MONOZYTEN
MIT
DEM
H.
PYLORI
WILDTYP
AKTIVIERT
57
5.2.10.
DIE
PHAGOZYTOSE
VON
H.
PYLORI
VERLAEUFT
MOEGLICHERWEISE
UEBER
DEN
CR3-REZEPTOR
.
59
5.2.11.
DIE
INFEKTION
DER
MONOZYTEN
MIT
H.
PYLORI
FUEHRT
ZUR
SCHWACHEN
AKTIVIERUNG
VON
DER
TYROSINKINASE
SYK
.
64
5.2.12.
AUCH
DIE
PKC
IST
AN
DER
PHAGOZYTOSE
VON
H.
PYLORI
BETEILIGT
.
65
5.3.
D
ISKUSSION
.
67
6.
DENDRITISCHE
ZELLEN
UND
DEREN
INTERAKTION
MIT
II.
PYLORI
_
76
6.1.
E
INLEITUNG
.
76
6.2.
E
RGEBNISSE
.
79
6.2.1.
UEBERPRUEFUNG
DER
GENERIERUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
ANHAND
DER
OBERFLAECHENMARKER
.
79
6.2.2.
H.
PYLORI
INHIBIERT
AUCH
IN
DENDRITISCHEN
ZELLEN
SEINE
EIGENE
PHAGOZYTOSE
.
82
6.2.3.
H.
PYLORI
IST
AUCH
INTRAZELLULAR
DETEKTIERBAR
.
84
6.2.4.
H.
PYLORI
INDUZIERT
DIE
REIFUNG
DENDRITISCHER
ZELLEN
.
86
6.2.5.
H.
PYLORI
INDUZIERT
DIE
FREISETZUNG
VON
ZYTOKINEN
UND
CHEMOKINEN
.
90
6.2.6.
DIE
INFEKTION
DENDRITISCHER
ZELLEN
MIT
H.
PYLORI
FUEHRT
NICHT
ZUR
APOPTOSE
.
92
6.3.
D
ISKUSSION
.
95
7.
SCHLUSSBETRACHTUNG
.
101
8.
LITERATURVERZEICHNIS
.
103
9.
ABKUERZUNGEN
.
124 |
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title_full_unstemmed | Phagozyten und deren Interaktion mit Helicobacter pylori von Kristin Rohde-Teichmann |
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