Charakterisierung der Selenoproteine Thioredoxinreduktase 1 und 2 anhand von Knock-out-Mausmodellen:
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| Format: | Buch |
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2003
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
.
3
1
EINLEITUNG
.
6
1.1
SELEN
.
6
1.2
SELENOPROTEINE
.
7
1.2.1
BEGRIFFSDEFINITION
.
7
1.2.2
SELENOCYSTEIN
INSERTIONSMECHANISMUS
.9
1.3
THLOREDOXLNREDUKTASEN
.
12
1.3.1
STRUKTUR
DER
THLOREDOXLNREDUKTASEN
.
12
1.3.2
EXPRESSION
DER
THLOREDOXLNREDUKTASEN
.
14
1.3.3
DAS
REDOXENZYM
THLOREDOXLNREDUKTASE
.
16
1.3.4
THIOREDOXIN
.
19
1.3.5
TRI
UND
TUMOR
.
21
1.4
DIE
LABORATORIUMSMAUS
ALS
TIERMODELL
.
23
1.4.1
GEZIELT
GENETISCH
VERAENDERTE
MAUSLINIEN
.
23
1.4.2
REPRODUKTIONSPHYSIOLOGIE
UND
PRAENATALE
LETALITAET
DER
MAUS
.
25
1.5
FRAGESTELLUNG
.
27
2
MATERIAL
.
28
2.1
CHEMIKALIEN
.
28
2.2
RADIOAKTIVE
ISOTOPE
.
29
2.3
ENZYME
.
29
2.4
VERBRAUCHSMATERIALLEN
UND
KITS
.
29
2.5
MATERIALIEN
FUER
DIE
KLONIERUNG
DES
TRL-GENE
TARGETING
-
VEKTORS
.
30
2.5.1
COSMLDE
.
30
2.5.2
PLASMIDE
.
31
2.5.3
DESOXY-OLIGONUKLEOTLDE
.
33
2.6
DNA
SONDEN
.
36
2.7
EMBRYONALE
STAMMZELLEN
(ES-ZELLEN)
DER
MAUS
.
36
2.8
MATERIALIEN
FUER
DIE
ES-ZELLKULTUR
.
37
2.9
BLASTOZYSTEN
.
37
2.10
MATERIALIEN
FUER
DIE
HISTOLOGIE/
IMMUNHISTOCHEMIE
.
38
2.11
MATERIALEN
FUER
DEN
CFU
ASSAY
.
38
3
METHODEN
.
39
3.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
39
3.1.1
STANDARD
PCR
(YYPOLYMERASE
CHAIN
REACTION
"
)
BEDINGUNGEN
.
39
3.1.2
HERSTELLUNG
UND
TRANSFORMATION
CHEMOKOMPETENTER
BAKTERIEN
.
40
3.1.3
PRAEPARATION
PLASMIDALER
UND
COSMLDALER
DNA
.
41
3.1.4
PRAEPARATION
GENOMISCHER
DNA
.
41
3.1.5
SOUTHERN
BLOT
.
43
3.1.6
GENERIERUNG
UND
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
.
44
3.1.7
HYBRIDISIERUNG
VON
DNA-FILTERN
UND
AUSWERTUNG
.
45
3.2
GENE
TARGETING
.
45
3.2.1.
STRATEGIE
DER
GENINAKTIVIERUNG
.
45
3.2.2
DESIGN
DES
GENE
TARGETING
-
KONSTRUKTES
FUER
KONDITIONALE
GENINAKTIVIERUNG
DURCH
VERWENDUNG
DES
LOXP
/
CRE-REKOMBINASE
SYSTEM
.
46
3.3
METHODEN
DER
EMBRYONALEN
STAMMZELLKULTUR
.
47
3.3.1
ELEKTROPORATLON
VON
EMBRYONALEN
STAMMZELLEN
.
48
3.3.2
SELEKTION
HOMOLOG
REKOMBINIERTER
ES-ZELLKLONE
.
48
3
3.3.3
AUFTAUEN
UND
EXPANSION
DER
ES-ZELLKLONE
.
49
3.3.4
BLASTOZYSTENLNJEKTION
UND
EMBRYOTRANSFER
.
49
3.4
ZUCHT
DER
MAUSLINIEN
.
50
3.4.1
TIERHALTUNG
UND
HYGIENESTATUS
.
50
3.4.2
ETABLIERUNG
VON
KONDITIONALEN
TR-KNOCK-OUT-MAUSSTAEMMEN
.
51
3.4.3
DELETION
DES
VON
LOXP
ERKENNUNGSSTELLEN
FLANKIERTEN
(FLOXED)
GENABSCHNITTS
DURCH
ZUCHT
MIT
CRE-REKOMBINASE-TRANSGENEN
MAEUSEN
.
52
3.4.4
GENETISCHE
KONFORMITAET
.
53
3.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
TR-KNOCK-OUT-TLERE
.
54
3.5.1
AEUSSERE
BETRACHTUNG
DER
EMBRYONEN
.
54
3.5.2
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
EMBRYONEN
.
55
3.5.3
IMMUNHISTOCHEMIE
.
55
3.5.4
YYCOLONY
FORMING
UNITS
"
(YYCFU
"
)
EXPERIMENT
.
56
4
ERGEBNISSE
.
58
4.1
TRI
.
58
4.1.1
GENSTRUKTUR
DER
TRI
.
58
4.1.2
GENE
TARGETING
-
STRATEGIE
.
60
4.1.3
KLONIERUNG
DES
GENE
TARGETING
-
VEKTORS
PCJ7
.
62
4.1.4
HOMOLOGE
REKOMBINATION
IN
EMBRYONALEN
STAMMZELLEN
.
63
4.1.5
CHIMAERENHERSTELLUNG
UND
RUECKKREUZUNG
DER
CHIMAEREN
.
66
4.1.6
ETABLIERUNG
VON
TRI-KNOCK-OUT-MAEUSEN
.
67
4.1.7
PHAENOTYP
DER
TRI-KNOCK-OUT-EMBRYONEN
.
67
4.1.8
HISTOLOGISCHE
ANALYSE
DER
TRI-KNOCK-OUT-EMBRYONEN
.
74
4.1.9
ZUCHT
UND
ANALYSE
NEURONENSPEZIFISCHER
TRI-KNOCK-OUT-MAEUSE
82
4.2
TR2
.
87
4.2.1
PHAENOTYP
DER
TR2-KNOCK-OUT-EMBRYONEN
.
87
4.2.2
MAKROSKOPISCHE
BETRACHTUNG
DER
TR2
DEL
/
DEL
EMBRYONEN
.
87
4.2.3
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNG
DER
TR2
DEL
/
DEL
EMBRYONEN
.
88
4.2.4
HAEMATOPOESE
BEI
DEN
TR2-KNOCK-OUT-EMBRYONEN
.
92
5
DISKUSSION
.
96
5.1
TRI
.
96
5.2
TR2
.
101
ZUSAMMENFASSUNG
.
106
SUMMARY
.
108
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
110
LITERATURVERZEICHNIS
.
112
DANKSAGUNGEN
.
119
LEBENSLAUF
.
121
4 |
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