Untersuchungen zu antagonistisch wirksamen Mikroorganismen gegen Fusarium culmorum bei der Mälzung von Gerste und Weizen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
|
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2002 |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
GATTUNG
FUSARIUM
.
2
1.2
VORKOMMEN
DER
FUSARIEN
IN
GETREIDE
.
4
1.3
MYKOTOXINE
UND
IHRE
BEDEUTUNG
.
5
1.3.1
DAS
MYKOTOXIN
DEOXYNIVALENOL
.
10
1.3.1.1
WIRKUNG
BEI
SCHWEINEN
.
10
1.3.1.2
WIRKUNGEN
BEI
WIEDERKAEUERN
.
12
1.3.1.3
WIRKUNG
VON
DEOXYNIVALENOL
AUF
DEN
MENSCHEN
.
13
1.3.2
BIOSYNTHESE
DER
TRICHOTHECENE
.
14
1.4
MOEGLICHE
ANSAETZE
ZUR
BEKAEMPFUNG
VON
FUSARIEN
AUF
GETREIDE
.
17
1.5
MILCHSAEUREBAKTERIEN
.
19
1.5.1
DIE
GATTUNG
LACTOBACILLUS
.
19
1.6
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
.
21
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
22
2.1
MATERIAL
.
22
2.1.1
LABORGERAETE
.
22
2.1.2
HPLC-KOMPONENTEN
.
23
2.1.3
ELEKTROPHORESE-KOMPONENTEN
.
24
2.2
MIKROORGANISMEN
UND
STAMMHALTUNG
.
24
2.2.1
MIKROORGANISMEN
.
24
2.2.2
STAMMHALTUNG
.
26
2.2.3
VERSUCHSMATERIAL
GETREIDE
.
26
2.2.4
CHEMIKALIEN
UND
LOESUNGEN
.
26
2.2.4.1
TE-PUFFER
FUER
FLUORESZENSMESSUNGEN
.
27
2.2.4.2
LYSEPUFFER
3,3FACH
.
27
2.2.4.3
TBE-PUFFER
(LOFACH
KONZENTRIERT)
.
27
2.2.4.4
ETHIDIUMBROMID
.
27
2.2.4.5
STOPPPUFFER
.
28
2.2.5
NAEHRMEDIEN
.
28
2.2.5.1
WAKSMAN-AGAR
.
28
2.2.5.2
MRS-BOUILLON
BZW.
MRS-AGAR
.
28
2.2.5.3
BAKTERIOCIN-SCREENING-MEDIUM
(BSM)
.
29
2.2.5.4
VERDUENNUNGSLOESUNG
ZUR
KEIMZAHLBESTIMMUNG
.
30
2.2.5.5
KARTOFFEL-DEXTROSE-AGAR
(POTATO
DEXTROSE
AGAR,
PDA)
.
30
2.2.5.6
SYNTHETISCHER
NAEHRSTOFFARMER
AGAR
(SNA)
.
30
2.2.5.7
NELKENBLATT-AGAR
(CAMATION
LEAF
AGAR,
CLA)
.
31
2.2.5.8
YPG-AGAR
.
31
2.2.5.9
SELEKTIVER
FUSARIEN-AGAR
.
32
2.2.5.10
PEPTON-PCNB-AGAR
.
32
2.2.5.11
MANNIT-PCNB-AGAR
.
33
2.2.5.12
MANNIT-MALACHITGRUEN-AGAR
.
33
2.3
BAKTERIOZIN-ASSAY
.
33
2.3.1
AGAR-DIFFUSIONS-TEST
.
34
2.4
ISOLIERUNG
DER
ANTAGONISTEN
.
34
2.5
AGARKULTUR
DER
ANTAGONISTEN
MIT
VERSCHIEDENEN
TESTORGANISMEN
.
35
2.6
SAATGUTBEHANDLUNG
MIT
ANTAGONISTEN
.
35
2.7
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
MYKOFLORA
VON
GETREIDE
.
36
2.8
KEIMZAHLBESTIMMUNG
VON
FUSARIEN
AUF
GETREIDE
.
37
2.8.1
BESTIMMUNG
DER
KEIMZAHLEN
AUF
DER
KORNAUSSENSEITE
.
37
II
INHALTSVERZEICHNIS
2.8.2
BESTIMMUNG
DER
KEIMZAHLEN
IM
KORNINNEREN
.
37
2.9
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
VON
DNA
.
38
2.9.1
DNA-ISOLIERUNG
MIT
YYPUREGENE
DNA
ISOLATION
KITS
"
.
38
2.9.2
ISOLIERUNG
VON
FUSARIEN-DNA
AUS
GETREIDE
UND
MALZPROBEN
(KNOLL
ET
AL.,
2000).39
2.9.3
IN-VITRO-AMPLIFIKATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
MITTELS
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
NACH
SAIKI
ET
AL.
(1988)
.
39
2.9.4
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
.
41
2.9.5
SEQUENZANALYSE
VON
DNA-AMPLIFIKATEN
.
42
2.9.6
IN
DER
VORLIEGENDEN
STUDIE
VERWENDETE
PCR-PRIMER
.
42
2.10
PHYLOGENETISCHE
ANALYSE
.
43
2.11
MESSUNG
DER
FUSARIUM-DNA
MITTELS
FLUORESZENZFARBSTOFF
PICOGREEN
.
43
2.12
BESTIMMUNG
VON
KONSERVIERUNGSSTOFFEN
MITTELS
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DC)
.
44
2.13
BESTIMMUNG
VON
DEOXYNIVALENOL
MITTELS
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
(DC)
.
44
2.13.1
ISOLIERUNG
VON
DON
AUS
KULTURFLUESSIGKEITEN
ODER
BIER
.
44
2.13.2
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
VON
DEOXYNIVALENOL
.
45
2.14
BESTIMMUNG
DER
MYKOTOXINE
MITTELS
HPLC
.
46
2.14.1
BESTIMMUNG
VON
DON
MITTELS
MYCOSEP-DON-SAEULEN
.
46
2.14.1.1
EXTRAKTION
UND
AUFREINIGUNG
VON
DON
AUS
GETREIDE
UND
MALZ
.
46
2.14.1.2
AUFKONZENTRIERUNG
.
46
2.14.2
BESTIMMUNG
VON
DON
MITTELS
IMMUNOAFFINITAETSSAEULEN
.
46
3
ERGEBNISSE
.
47
3.1
ISOLIERUNG
VON
ANTAGONISTEN
AUS
BODENPROBEN
.
47
3.2
IN
VITRO-WIRKSAMKEIT
DER
AUS
BODENPROBEN
ISOLIERTEN
ANTAGONISTEN
.
47
3.3
WIRKSAMKEIT
DER
IN
VITRO
WACHSTUMSHEMMENDEN
MIKROORGANISMEN
IN
EINEM
IN
PLANTA
VERSUCHSSYSTEM
.
52
3.4
IDENTIFIZIERUNG
DES
ISOLATES
TMW2.418
ALS
STENOTROPHOMONAS
MALTOPHILIA
.
52
3.4.1
PHYSIOLOGISCHE
UND
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
ISOLATES
TMW2.418
.
52
3.4.2
PARTIELLE
16S-RRNA-SEQUENZIERUNG
DES
ISOLATES
TMW
2.418
.
55
3.5
IDENTIFIZIERUNG
DES
ISOLATES
LI2
ALS
PAENIBACILLUS
POLYMYXA
.
58
3.5.1
PHYSIOLOGISCHE
UND
MORPHOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DES
ISOLATES
LI2
.
58
3.5.2
PARTIELLE
16S-RRNA-SEQUENZIERUNG
DES
ISOLATES
LI2
.
61
3.6
CHARAKTERISIERUNG
DES
VERSUCHSMATERIALS
GERSTE
UND
WEIZEN
.
64
3.6.1
HPLC-BESTIMMUNG
DES
DEOXYNIVALENOL-GEHALTES
IM
VERSUCHSMATERIAL
.
65
3.7
DURCHFUEHRUNG
VON
MAELZUNGSVERSUCHEN
MIT
GERSTE
UND
WEIZEN
.
67
3.8
INDIREKTE
KEIMZAHLBESTIMMUNG
VON
FUSARIUM
CULMORUM
DURCH
ANWENDUNG
DER
TOX5
PCR
IN
EINEM
QUANTITATIVEN
SYSTEM
.
68
3.8.1
TOX5-PCR
.
68
3.8.2
QUANTIFIZIERUNGSMETHODE
MITTELS
FLUORESZENZFARBSTOFF
PICOGREEN
.
69
3.8.3
KORRELATION
ZWISCHEN
TOX5-PCR-PRODUKT
UND
PILZ-BIOMASSE
.
70
3.9
REPRODUZIERBARKEIT
DER
QUANTIFIZIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
MITTELS
FLUORESZENZFARBSTOFF
PICOGREEN
.
72
3.10
INDIREKTE
KEIMZAHLBESTIMMUNG
VON
FUSARIUM
CULMORUM
DURCH
QUANTIFIZIERUNG
DES
PCR-PRODUKTES
NACH
MAELZUNGEN
MIT
AUSGEWAEHLTEN
MIKROORGANISMEN
.
77
3.10.1
MAELZUNGEN
VON
WEIZEN
UNTER
ZUSATZ
VON
MIKROORGANISMEN
ZUM
WEICHWASSER
.
77
3.10.2
MAELZUNGEN
VON
GERSTE
UNTER
ZUSATZ
VON
MIKROORGANISMEN
ZUM
WEICHWASSER
.
80
3.11
EINFLUSS
VON
ANTAGONISTEN
AUF
DIE
BILDUNG
DES
MYKOTOXINS
DEOXYNIVALENOL
WAEHREND
DER
MAELZUNG
MIT
WEIZEN
UND
GERSTE
.
87
3.11.1
KONELATION
ZWISCHEN
DNA
UND
DON-GEHALT
.
90
3.12
TEST
AUF
BAKTERIOZINBILDUNG
DURCH
ANTAGONISTEN
.
95
3.13
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BILDUNG
VON
KONSERVIERUNGSSTOFFEN
.
96
4
DISKUSSION
.
97
INHALTSVERZEICHNIS
IN
4.1
IN
VITRO
HEMMUNG
VON
FUSARIEN
DURCH
BODENISOLATE
.
98
4.2
UEBERTRAGUNG
DER
IN
VITRO
ERGEBNISSE
AUF
IN
VIVO
SYSTEME
.
99
4.2.1
TEST
IN
EINEM
IN
PLANTA
SYSTEM
.
99
4.2.2
DURCHFUEHRUNG
VON
MAELZUNGSUNTERSUCHUNGEN
AN
WEIZEN
UND
GERSTE
.
99
4.2.3
AUSWERTUNG
DER
MAELZUNGSVERSUCHE
.
101
4.2.3.1
METHODENDISKUSSION
.
101
4.2.3.2
KORRELATION
ZWISCHEN
GRAVIMETRISCH
BESTIMMTER
BIOMASSE
VON
FUSARIUM
CULMORUM
UND
DEM
PCR-PRODUKT
VON
FUSARIUM
CULMORUM-DNA
.
103
4.2.3.3
BEWERTUNG
UND
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
.
104
4.3
MOEGLICHE
HEMMECHANISMEN
BEI
DER
MAELZUNG
VON
GETREIDE
UNTER
EINSATZ
VON
MIKROORGANISMEN
.
108
4.3.1
MOEGLICHE
HEMMECHANISMEN
BEI
MILCHSAEUREBAKTERIEN
.
109
4.3.1.1
BILDUNG
VON
BENZOESAEURE
UND
NIEDERMOLEKULAREN
VERBINDUNGEN
DURCH
MILCHSAEUREBAKTERIEN
.
110
4.3.1.2
BILDUNG
VON
FUNGIZIDEN
PROTEINEN
DURCH
MILCHSAEUREBAKTERIEN
.
111
4.3.2
MOEGLICHE
IN
VITRO
HEMMECHANISMEN
BEI
STENOTROPHOMONAS
MALTOPHILIA
.
112
4.3.3
MOEGLICHE
HEMMECHANISMEN
BEI
PAENIBACILLUS
POLYMYXA
.
113
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
115
6
SUMMARY
.
117
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
119
8
ANHANG
.
140
8.1
VERZEICHNIS
DER
ABKUERZUNGEN
UND
FORMELN
.
140
8.2
VERGLEICH
DER
16S-RRNA-SEQUENZEN
DER
ISOLATE
TMW
2.418,
DSM50170
UND
DSM8573.
.
141
8.3
VERGLEICH
DER
16S-RRNA-SEQUENZEN
DER
ISOLATE
JORDA,
JORDC
UND
JORDD
MIT
VERGLEICHBAREN
SEQUENZEN
AUS
DER
ARB-DATENBANK
.
146
8.4
VERGLEICH
DER
16S-RRNA-SEQUENZEN
DES
ISOLATES
,
JORDB
MIT
VERGLEICHBAREN
SEQUENZEN
AUS
DER
ARB-DATENBANK
.
149 |
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