Neue Ansätze zur zellulären Charakterisierung von Autoimmunerkrankungen an Vollblut:
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Regensburg
2003
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
4
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
INHALTSVERZEICHNIS
4
ABSTRACT
8
1
EINLEITUNG
10
1.1
ENTSTEHUNG
UND
FOLGEN
VON
AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
10
1.1.1
ALLGEMEINE
MECHANISMEN
DER
AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
10
1.1.2
AUTOIMMUNERKRANKUNGEN
11
1.1.2.1
INSULINPFLICHTIGER
DIABETES
MELLITUS
11
1.1.2.2
SYSTEMISCHER
LUPUS
ERYTHEMATOSUS
(SLE)
14
1.1.2.3
SJOEGREN'S
SYNDROM
15
1.1.2.4
RHEUMATOIDE ARTHRITIS
(RA)
16
1.2
ANTIGENSPEZIFISCHE
IMMUNANTWORT
18
1.2.1
T-ZELLEN
UND
IHRE
FUNKTION
18
1.2.1.1
T-ZELLREZEPTOR
(TCR)
VON
CD4
+
UND
CD8
+
T-ZELLEN
18
1.2.1.2
INTERAKTIONEN
VON
TH-ZELLEN
MIT
DENDRITISCHEN
ZELLEN
19
1.2.2
DENDRITISCHE
ZELLEN
UND
IHRE
FUNKTION
21
1.2.2.1
DIFFERENZIERUNG
UND
MIGRATION
DENDRITISCHER
ZELLEN
21
1.2.2.1.1
ANALYSE
VON
BLUTVORLAEUFERZELLEN
UND
GENERIERUNG
VON
21
UNREIFEN
DENDRITISCHEN
ZELLEN
1.2.2.1.2
REIFUNG
DER
DENDRITISCHEN
ZELLEN
24
1.2.2.1.3
MIGRATION
DER
DENDRITISCHEN
ZELLEN
IN
DAS
GEWEBE
25
1.2.2.2
FUNKTION
DENDRITISCHER
ZELLEN
26
1.2.2.2.1
AUFNAHME
VON
ANTIGENEN
DURCH
DIE
DENDRITISCHEN
ZELLEN
26
1.2.2.2.2
ANTIGENPROZESSIERUNG
IM
MHC-I-SYSTEM
26
1.2.2.2.3
ANTIGENPROZESSIERUNG
IM
MHC-II-SYSTEM
28
1.2.2.2.4
ANTIGENPROZESSIERUNG
IM
CDL-SYSTEM
29
1.2.3
CDL-RESTRINGIERTE
T-ZELLEN
32
1.2.4
AUFBAU
UND
FUNKTION
DES
SEKUNDAEREN
LYMPHGEWEBES
33
1.2.4.1
EINWANDERUNG
DER
LEUKOZYTEN
IN
DAS
SEKUNDAERE
33
LYMPHGEWEBE
1.2.4.2
VERTEILUNG
DER
LEUKOZYTEN
IM
SEKUNDAEREN
LYMPHGEWEBE
34
INHALTSVERZEICHNIS
SEI
T
E
5
SEITE
1.2.5
AKTIVIERUNG
VON
T-ZELLEN
UND
IHRE
DETEKTION
35
1.2.5.1
T-ZELLAKTIVIERUNG
35
1.2.5.2
METHODEN
ZUR
DETEKTION
AKTIVIERTER
T-ZELLEN
36
1.2.5.3
AKTIVIERUNGSMARKERUND
KOSTIMULATORISCHE
REZEPTOREN
AUFT
37
ZELLEN
1.3
T-ZELLGEDAECHTNIS
41
1.3.1
PROLIFERATION
UND
DIFFERENZIERUNG
DER
TH-ZELLEN
41
1.3.2
INTERAKTIONEN
VON
TH
UND
B-ZELLEN
44
1.3.3
TH-ZELLEN
ALS
TEIL
DES
IMMUNGEDAECHTNISSES
45
1.3.4
ZIRKULATION
DER
TH-ZELLEN
IM
ORGANISMUS
45
1.4
ENTFERNUNG
DER
T-ZELLEN
UEBER
APOPTOSE
46
1.4.1
BEDEUTUNG
DER
APOPTOSE
46
1.4.2
INDUKTION
DER
APOPTOSE
UEBER
CD95
47
1.4.3
INDUKTION
DER
APOPTOSE
UEBER
ANDERE
MECHANISMEN
48
1.4.4
EXEKUTION
UND
REGULATION
DER
APOPTOSE
50
1.4.5
FOLGEN
DER
APOPTOSEINDUKTION
51
1.4.6
ANALYTIK
APOPTOTISCHER
ZELLEN
52
1.5
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
53
2
MATERIALIEN
UND
METHODEN
54
2.1
MATERIALIEN
54
2.1.1
VERWENDETE
ANTIKOERPER
54
2.1.2
VERWENDETE
FLUORESZIERENDE
SUBSTANZEN
56
2.1.3
VERWENDETE
PEPTIDE
56
2.1.4 SONSTIGE
REAGENZIEN,
LOESUNGEN
UND
VERBRAUCHSMATERIALIEN
57
2.1.5
VERWENDETE
GERAETE
UND
SOFTWARE
59
2.1.6
BLUTPROBEN
59
2.1.7
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
59
2.2 METHODEN
60
2.2.1
METHODENOPTIMIERUNG
UND
ANWENDUNG
VERSCHIEDENER
60
STIMULATIONSANSAETZE
2.2.2
METHODEN
ZUR
DETEKTION
ANTIGENSPEZIFISCHER
T-ZELLEN
UND
63
ANDERER
LEUKOZYTEN
MIT
NIEDRIGER
FREQUENZ
INHALTSVERZEICHNIS
SEIT
E.,6
SEITE
2.2.3
METHODEN
ZUR
INDUKTION
UND
DETEKTION
DER
T-ZELL-APOPTOSE
66
2.2.4
DURCHFLUSSZYTOMETER
(DFZ)
69
2.2.4.1
FLUESSIGKEITSSYSTEM
DES
DFZ
69
2.2.4.2 OPTISCHES
SYSTEM
UND
DATENVERARBEITUNG
69
2.2.4.3
GEMESSENE
PARAMETER:
FSC
UND
SSC
71
2.2.4.4
GEMESSENE
PARAMETER:
FL-1
BIS
FL-4
72
2.2.4.5
KALIBRATION
DES
DFZ
72
2.2.5
AUSWERTUNG
DER
MESSDATEN
73
2.2.6
SEROLOGISCHE
HLA-TYPISIERUNG
81
3
ERGEBNISSE
83
3.1
OPTIMIERUNG
DER
VOLLBLUTSTIMULATION
IM
MODELLSYSTEM
83
UND
ANWENDUNG
3.1.1
PROTOKOLL
ZUR
KURZZEITSTIMULATION
84
3.1.2
VERGLEICH
VON
DREI
ANTIKOAGULANZIEN
85
3.1.3
ERMITTLUNG
DER
OPTIMALEN
ZELLDICHTE
88
3.1.4
ZELLERNTE
MIT
UND
OHNE
EDTA
91
3.1.5
ERMITTLUNG
DES
OPTIMALEN
ANALYSEZEITPUNKTS
93
3.1.6
OPTIMIERUNG
DER
DETEKTION
AKTIVIERTER
T-ZELLEN
95
3.1.7
AUSTESTUNG
VERSCHIEDENER
PROTEASEINHIBITOREN
97
3.1.8
OPTIMIERUNG
DER
APROTININKONZENTRATION
99
3.1.9
VERGLEICH
DER
APROTININWIRKUNG
IM
ZEITVERLAUF
101
3.1.10
STIMULATION
VON
VOLLBLUT
MIT
LIPOPHILEN
SUBSTANZEN
103
3.1.11
ERPROBUNG
STIMULIERENDER
TT-PEPTIDE
106
3.1.12
ERMITTLUNG
DER
OPTIMALEN
TT-PEPTIDKONZENTRATION
109
3.2
KONTROLLE
DER
SPEZIFITAET
DER
STIMULATIONEN
111
3.2.1
STIMULATION
VON
NABELSCHNURBLUT
MIT
TT
112
3.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DER
TT-REAKTIVEN
KOMPARTIMENTE
115
3.2.3
PEPTIDKINETIK
UND
PEPTIDREAKTIVE
KOMPARTIMENTE
118
3.2.4
DETEKTION
CMV-SPEZIFISCHER ZYTOTOXISCHER
T-LYMPHOZYTEN
124
3.3
ANWENDUNG
IM
IDDM-SYSTEM
127
3.3.1
STIMULATION
MIT
GAD-PEPTIDEN
FUER
EINEN
BIS
FUENF
TAGE
128
3.3.2
STIMULATION
MIT
GAD-PEPTIDEN
FUER
DREI
UND
VIER
TAGE
137
INHAL
TSVERZ
EI
CHNIS
3.3.3
3.4
3.4.1
3.4.2
3.4.3
3.4.4
3.5
3.5.1
3.5.2
4
4.1
4.2
4.3
4.4
4.5
5
6
7
KONTROLLE
DER
SPEZIFITAET
DER
GAD-PEPTIDSTIMULATION
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
APOPTOSE
BEI
AUTOIMMUN
PATIENTEN
ERPROBUNG
VON
FUENF
VERSCHIEDENEN
APOPTOSESTIMULI
VERGLEICH
VON
DREI
APOPTOSEINDUKTOREN
AN
T-ZELLEN
VON
AUTO
IMMUNPATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
INDUKTION
DER
T-ZELLEN
VON
AUTOIMMUNPATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
MIT
2-DEOXY-D-RIBOSE
INDUKTION
DER
T-ZELLEN
VON
AUTOIMMUNPATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
MIT
ANTI-CD95
CHARAKTERISIERUNG
VON
NK-T-ZELLEN
UND
DENDRITISCHEN
ZELLEN
IM
CDL-SYSTEM
BESTIMMUNG
DER
FREQUENZ
VON
NK-T-ZELLEN
IM
VOLLBLUT
VON
AUTOIMMUNPATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
BESTIMMUNG
DER
FREQUENZ
VON
CDLC
+
UND
CDD
+
DENDRITISCHEN
ZELLEN
IM
VOLLBLUT
VON
AUTOIMMUNPATIENTEN
UND
KONTROLLPERSONEN
DISKUSSION
STIMULATIONSANSATZ
SPEZIFITAET
DER
STIMULATION
GAD-REAKTIVITAET
APOPTOSEINDUKTIONSANSATZ
CD
L-RELEVANTE
LEUKOZYTEN
ZUSAMMENFASSUNG
LITERATURVERZEICHNIS
ANHANG
SEITEN
SEITE
142
148
149
151
157
161
167
168
170
173
173
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