Strukturelle und funktionelle Analyse des Porins MspA aus Mycobacterium smegmatis:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2003
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4
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
7
2
EINLEITUNG
8
2.1
DIE
GATTUNG
DER
MYCOBAKTERIEN
.
8
2.1.1
KLASSIFIZIERUNG
.
8
2.1.2
MEDIZINISCHE
BEDEUTUNG
DER
MYCOBAKTERIEN
.
8
2.2
AUFBAU
DER
MYCOBAKTERIELLEN
ZELLWAND
.
9
2.3
PORINE
IN
GRAM-NEGATIVEN
BAKTERIEN
.
11
2.4
PORINE
IN
GRAM-POSITIVEN
BAKTERIEN
.
11
2.5
PORINE
IN
MYCOBACTERIUM
SMEGMATIS
.
12
2.6
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
13
3
MATERIAL
UND
METHODEN
14
3.1
MATERIAL
.
14
3.2
MEDIEN,
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
18
3.2.1
BAKTERIENNAEHRMEDIEN
.
18
3.2.2
ENZYMLOESUNGEN
.
19
3.2.3
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
PROTEIN-GELELEKTROPHORESE
.
19
3.2.4
MASSENSTANDARDS
FUER
PROTEINE
.
20
3.2.5
LOESUNGEN
FUER
DIE
COOMASSIE-FAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
PAA-GELEN
.
21
3.2.6
LOESUNGEN
FUER
DIE
SILBERFARBUNG
VON
PROTEINEN
IN
PAA-GELEN
.
21
3.2.7
PUFFER
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
WESTERN-BLOT-ANALYSEN
.
22
3.2.8
PUFFER
FUER
DIE
SELEKTIVE
EXTRAKTION
VON
MSPA
.
23
3.2.9
PUFFER
FUER
DIE
CHROMATOGRAPHIE
.
24
3.2.10
LOESUNGEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
DER
PH-STABILITAET
VON
MSPA
.
24
3.2.11
SONSTIGE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
25
3.3
METHODEN
.
26
3.3.1
ANZUCHT
VON
BAKTERIEN
.
26
3.3.2
ANLEGEN
VON
DAUERKULTUREN
.
26
3.3.3
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
BL21
.
26
3.3.4
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
IN
PAA-GELEN
.
27
INHALTSVERZEICHNIS
5
3.3.5
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKOUZENTRATION
.
28
3.3.6
AUFREINIGUNG
VON
MSPA
AUS
MYCOBACTERIUM
SMEGMATIS
MC
2
155
.
28
3.3.7
AUFREINIGUNG
VON
MSPA
AUS
ESCHERICHIA
COLI
BL21(DE3)
.
30
3.3.8
WESTERN-BLOT-ANALYSEN
.
32
3.3.9
BILDVERARBEITUNG
UND
AUSWERTUNG
.
34
3.3.10 MESSUNGEN
MIT
DER
LIPID-BILAYER-APPARATUR
.
34
3.3.11
SPEKTROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
.
40
3.3.12
BERECHNUNG
DER
SEKUNDAERSTRUKTURANTEILE
IN
PROTEINEN
AUS
CD-SPEKTREN
.
41
3.3.13
DISSOZIATION
VON
MSPA
MIT
DMSO
.
41
3.3.14
UNVOLLSTAENDIGE
DISSOZIATION
VON
MSPA
MIT
DMSO
.
42
3.3.15
BESTIMMUNG
DER
STOECHIOMETRIE
VON
MSPA
.
42
3.3.16
ANALYSE
DER
STABILITAET
VON
MSPA
.
45
3.3.17
UNTERSUCHUNG
DER
EIGENSCHAFTEN
VON
RMSPA
.
48
4
ERGEBNISSE
49
4.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
MSPA
ALS
OLIGOMERES
PORIN
.
49
4.1.1
DISSOZIATION
VON
MSPA
.
49
4.1.2
WESTERN-BLOT
UND
N-TERMINALE
SEQUENZIERUNG
.
50
4.1.3
MASSENSPEKTROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNG
VON
MSPA
.
50
4.1.4
UEBEREXPRESSION
VON
MSPA
IN
E.
COHBL21(DE3)
.
50
4.1.5
NACHWEIS
POREN
BILDENDER
AKTIVITAET
VON
RMSPA
.
52
4.2
AUFREINIGUNG
VON
MSPA
MIT
HOHER
AUSBEUTE
.
54
4.2.1
SELEKTIVE
EXTRAKTION
VON
MSPA
BEI
HOHEN
TEMPERATUREN
.
54
4.2.2
SOLUBILISIERUNG
VON
MSPA
DURCH
VERSCHIEDENE
DETERGENZIEN
.
56
4.2.3
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG
VON
MSPA
.
57
4.2.4
UEBERPRUEFUNG
DER
KANAL
BILDENDEN
AKTIVITAET
.
59
4.3
DIE
KANALEIGENSCHAFTEN
VON
MSPA
.
61
4.3.1
LONENSELEKTIVITAET
VON
MSPA
.
61
4.3.2
ASYMMETRIE
VON
MSPA
.
62
4.4
DIE
STRUKTUR
VON
MSPA
.
64
4.4.1
SEKUNDAERSTRUKTUR
VON
MSPA
.
64
4.4.2
STOECHIOMETRIE
VON
MSPA
.
67
4.5
DIE
STABILITAET
VON
MSPA
.
73
6
INHALTSVERZEICHNIS
4.5.1
EINFLUSS
VON
TEMPERATUR,
SDS
UND
HARNSTOFF
AUF
MSPA
.
73
4.5.2
EINFLUSS
VON
TEMPERATUR
UND
ORGANISCHEN
LOESUNGSMITTELN
AUF
MSPA
.
81
4.5.3
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
PH-WERTE
AUF
MSPA
.
84
4.5.4
STABILITAET
UND
LOESLICHKEIT
VON
MSPA
IN
REINEN
LOESUNGSMITTELN
.
86
4.5.5
EINFLUSS
VON
PROTEASEN
AUF
MSPA
.
87
4.6
AUFREINIGUNG
VON
RMSPA
MIT
HOHER
AUSBEUTE
.
89
4.6.1
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG
.
89
4.7
BIOCHEMISCHE
UND
STRUKTURELLE
ANALYSE
VON
RMSPA
.
92
4.7.1
STABILITAET
VON
RMSPA
.
92
4.7.2
STRUKTUR
VON
RMSPA
.
94
5
DISKUSSION
97
5.1
IDENTIFIZIERUNG
VON
MSPA
ALS
OLIGOMERES
PORIN
VON
M.
SMEGRNATIS
.
97
5.2
AUFREINIGUNG
VON
MSPA
.
99
5.3
DIE
KANALEIGENSCHAFTEN
VON
MSPA
.
101
5.4
DIE
STRUKTUR
VON
MSPA
.
103
5.5
DIE
STABILITAET
VON
MSPA
.
108
5.6
AUFREINIGUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
REKOMBINANTEM
MSPA
.
113
5.7
AUSBLICK
.
116
6
LITERATURVERZEICHNIS
117 |
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