Charakterisierung des endogenen Axin-b-Catenin-Proteinkomplexes:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Rottenburg-Kiebingen
Selbstverl.
2003
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Tübingen, Univ., Diss., 2003 (Nur beschränkt für den Austausch) |
| Beschreibung: | 96 S. Ill. 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
D
ER
UNSTIMULIERTE
WNT/P-C
ATENIN
-S
IGN
ALWEG
.
3
1.2
R
EAKTIONEN
DES
A
XIN
-P-C
ATENIN
-K
OMPLEXES
AUF
W
NT
.
4
1.3
K
OMPONENTEN
UND
I
NTERAKTIONEN
DES
A
XIN
-P-C
ATENIN
-K
OMPLEXES
.
5
1.3.1
DISHEVELLED
IST
EIN
SS-CATENIN
STABILISIERENDER
FAKTOR.
.
6
1.3
2
APC
IST
EIN
WESENTLICHER
FAKTOR
IM
WNT-SIGNALWEG
.
8
1.3
3
DER
AXIN-KOMPLEX
WIRD
DURCH
VERSCHIEDENE
SIGNALE
BEEINFLUSST
.
10
1.4
C
HOLESTERINREICHE
M
EMBRANSTRUKTUREN
.
10
1.5
Z
IELE
DER
A
RBEIT
.
13
2
ERGEBNISSE.
14
2.1
A
XIN
IST
IN
VERSCHIEDENEN
Z
ELLKOMPARTIMENTEN
NACHWEISBAR
.
15
2.2
P-C
ATENIN
WIRD
NACH
W
NT
-B
EHANDLUNG
STABILISIERT
.
16
2.3
Z
ONALE
U
LTRAZENTRIFUGATION
.
17
2.3.1
AXIN
KANN
IN
ZWEI
FRAKTIONEN
UNTERSCHIEDLICHER
MIGRATIONS
GESCHWINDIGKEIT
SEPARIERT
WERDEN.
1
7
2.3.2
DER
SCHWERE
AXIN
UND
DISHEVELLED
POOL
WIRD
NACH
WNT3A-BEHANDLUNGPROTEASOMAL
.
ABGEBAUT
.
19
2.3.3
DIE
SCHWERE
AXINFRAKTION
IST
ZELLMEMBRAN-ASSOZIIERT
.
20
2.3.3.1
DIE
SCHWERE
AXINFRAKTION
IST
ZELLMEMBRAN-ASSOZIIERT,
NACHWEIS
DURCH
ZELLMEMBRAN
-ENTFERNUNG.
21
2.3.3.2
DIE
SCHWERE
AXINFRAKTION
IST
ZELLMEMBRAN-ASSOZIIERT,
HINWEIS
DURCH
CHOLESTERIN-ENTFERNUNG
.
22
2.3.3.3
DIE
SCHWERE
AXINFRAKTION
IST
ZELLMEMBRAN-ASSOZIIERT,
HINWEISE
DURCH
FLOTATIONS
-EXPERIMENTE
.
23
2.3.3.4
AXIN
IST
AN
CHOLESTENNREICHE
MEMBRANPARTIKEL
(RAFT-)
ASSOZIIERT
.
25
2.4
G
ELFILTRATIONS
-C
HROMATOGRAPHIE
DER
LEICHTEN
UND
SCHWEREN
A
XINFRAKTIONEN
.
27
2.4.1
APC,
AXIN,
SS-CATENIN,
DISHEVELLED,
PP2A,
CK-LEUND
GSK3
HEGEN
INTRAZELLULAER
.
IN
UNTERSCHIEDLICHEN
KOMPLEXEN
VOR
.
28
2.4.2
WNT-STIMULATION
BEEINFLUSST
DAS
ELUTIONSVERHALTEN
VON
DISHEVELLED,
AXIN
UND
GSK3
.
30
2.5
K
O
-I
MMUNPRAEZIPITATION
.
33
2.6
P
HOSPHORYLIERUNG
P-C
ATENINS
IM
KANONISCHEN
W
NT
-S
IGNALWEG
.
36
2.6.1
SS-CATENIN
WIRD
IM
RADIOAKTIVEN
KINASE-ASSAY
BEVORZUGT
IM
SCHWEREN
POOLPHOSPHORYLIERT
.
36
2.6.2
SS-CATENM
WIRD
SPEZIFISCH
AN
N-TEMINALEN
SERIN/THREONIN-RESTEN
PHOSPHORYLIERT
.
39
2.6
3
CHOLESTERINEXTRAKTION
BEEINFLUSST
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
SS-CATENINS
IM
LEICHTEN
.
UND
SCHWEREN
POOL
.
41
2.6.4
AXIN
VERSTAERKT
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
SS-CATENINS
DURCH
GSK3
UND
CK-LS
.
42
2.6.5
WNT3A
BEEINFLUSST
DIE
PHOSPHORYLIERUNGSKINETIK
SS-CATENINS
IM
LEICHTEN
UND
SCHWEREN
POOL
.
44
2.6.6
N-TERMINAL
PHOSPHORYLIERTES
SS-CATENIN
IST
IM
SCHWEREN
POOL
LOKALISIERT
.
50
3
DISKUSSION
.
53
3.1
A
XIN
-L
OKALISATION
.
53
3.2
A
XIN
BILDET
P
ROTEINKOMPLEXE
UNTERSCHIEDLICHER
G
ROEBE
.
55
3.3
W
NT
BEEINFLUBT
DIE
A
XIN
K
OMPLEXE
.
56
3.4
E
INFLUESSE
AUF
DIE
P
HOSPHORYLIERUNG
P-C
ATENINS
IM
KANONISCHEN
W
NT
-S
IGNALWEG
.
58
3.4.1
DIE
N-TERMINALE
PHOSPHORYLIERUNG
SS-CATENINS
KANN
DURCH
PHOSPHORYLIERUNGSSPEZIFISCHE
.
ANTIKOERPER
NACHGEWIESEN
WERDEN
.
59
3.4.2
N-TERMINALPHOSPHORYLIERTES
SS-CATENIN
IST
IM
SCHWEREN
POOL
LOKALISIERT
.
61
3.4.3
WNT
BEEINFLUSST
DIE
KINASE-AKTIVITAET
IM
LEICHTEN
UND
SCHWEREN
POOL
.
62
4
MATERIAL
UND
METHODEN
.
66
4.1
C
HEMIKALIEN
,
M
ATERIAL
UND
G
ERATE
.
66
4.1.1
CHEMIKALIEN
.
66
4.1.2
MATERIAL
.66
4.1.3
ANTIKOERPER.
.
66
4.1.4
GERAETE
.
67
4.2
ZELLKULTUR
.
67
4.2.1
STANDARD-ZELL-LMIEN
.
68
4
2.2
HERSTELLUNG
DES
WNT3A-KONDITIONIERTEN
MEDIUMS
.
68
4.2.3
WNT-BEHANDLUNG
VON
ZELLEN
.
68
4.3
P
ROTEINBIOCHEMISCHE
M
ETHODEN
.
69
4.3.1
PROTEINEXTRAKTION
AUS
ZELLKULTUR-ZELLEN
.
70
4.3.2
ZELLMEMBRAN
-ENTFERNUNG
.
70
4.3.3
CHOLESTERINEXTRAKTION
.
70
4.3.4
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
71
4.3.5
COMASSIE-FAERBUNG
VON
PAGE-GELEN
.
72
4.3.6
WESTERN
BLOT
.
72
4.3.7
GEIFILTRATIONS-CHROMATOGRAPHIE
.
73
4.3.8
KO-IMMUNPRAZIPITATION.74
4.3
9
HERSTELLUNG
VON
REKOMBINANTEM
SS-CATENIN
.
75
4
3.10
RADIOAKTIVER
KMASE-ASSAY
.
76
4
311
KINASE-ASSAY
MIT
PHOSPHORYLIERUNGSSPEZIFISCHEN
ANTIKOERPERN.
77
4.4
Z
ENTRIFUGATIONSMETHODEN
.
77
4.4.1
DIFFERENTIELLE
ZENTRIFUGATION,
ZELLFRAKTIONIERUNG
.
77
4.4.2
ZONALE
ULTRAZENTRIFUGATION
.
78
4.5
Q
UANTIFIZIERUNG
VON
W
ESTERN
BLOTS
.
80
4.6
C
OMPUTERPROGRAMME
UND
D
ATENBANKEN
.
80
5
ABKUERZUNGEN
.
81
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
82
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
95 |
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