Funktionale Untersuchung neuer Internaline von Listeria monocytogenes:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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INHALTSVERZEICHNIS
I
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
I
ZUSAMMENFASSUNG
IV
SUMMARY
VI
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DIE
GATTUNG
LISTERIA
1
1.2.
LISTERIA
MONOCYTOGENES
1
1.2.1.
DIE
PATHOGENESE
1
1.2.2.
DAS
PRFA-ABHAENGIGE
VIRULENZGENCLUSTER
4
1.2.3.
DIE
INTEMALINE
4
1.2.3.1.
INTEMALIN
A
6
1.2.3.2.
INTEMALIN
B
7
1.2.3.3.
INTEMALIN
C
9
1.2.3.4.
DIE
INTEMALINE
G,
H,
E
UND
F
9
1.2.4.
WEITERE
INVASIONSFAKTOREN
10
1.2.5.
DIE
INVASION
-
EIN
KURZER
UEBERBLICK
10
1.3.
ZIELSETZUNG
DIESER
DISSERTATION
12
2.
ERGEBNISSE
13
2.1.
FUNKTIONALE
ANALYSE
DER
INTEMALINE
G,
H
UND
E
14
2.1.1.
UNTERSUCHUNG
DER
STABILITAET
DES
PLASMIDS
'PACTK-GJP
14
2.1.2.
IN
VZ/RO-UNTERSUCHUNG
DER
ZW/GHE-DELETIONSMUTANTE
16
2.1.3.
IN
VZ'ZRO-UNTERSUCHUNG
DER
L.
MONOCYTOGENES
EGD
DELETIONSMUTANTEN
A
ZM
X
J
,
AZZZ/H
UND
18
AZNZE
SOWIE
DER
ENTSPRECHENDEN
REVERTANTEN
INLG
+
,
INLH*
UND
INLE
+
2.1.4.
PROTEINANALYTISCHE
UNTERSUCHUNG
DES
INLA,
B,
C-EXPRESSIONSPROFILS
DER
L.
MONOCYTOGENES
19
EGD
DELETIONSMUTANTEN
AZW/GHE,
\INLG,
AINLH
UND
AINLE
2.2.
UNTERSUCHUNG
DER
INVASIVITAET
VERSCHIEDENER
INTERNALIN-DELETIONSMUTANTEN
21
2.2.1.
INVASION
DER
INTERNALIN-DELETIONSMUTANTEN
IN
CACO-2-ZELLEN
21
2.2.2.
INVASION
DER
INTERNALIN-DELETIONSMUTANTEN
IN
HBMECS
23
2.2.3.
PROTEINANALYTISCHE
UNTERSUCHUNG
DES
INLA,
B,
C-EXPRESSIONSPROFILS
DER
L.
MONOCYTOGENES
25
EGD
INTERNALIN-DELETIONSMUTANTEN
2.2.4.
FRUEHE
ASSOZIATION
DER
INTERNALIN-DELETIONSMUTANTEN
MIT
CACO-2-ZELLEN
UND
HBMECS
26
2.3.
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
IN
GEGENWART
VON
INTEMALIN
C
UND
EGF
28
2.3.1.
EINFLUSS
VON
INTEMALIN
C
UND
EGF
AUF
INLA-INDUZIERTE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
28
IN
CACO-2-ZELLEN
2.3.1.1.
EINFLUSS
VON
INLC
AUF
DIE
FRUEHE
ASSOZIATION
VON
L.
MONOCYTOGENES
MIT
CACO-2-ZELLEN
30
2.3.1.2.
EINFLUSS
VON
WORTMANNIN
AUF
INLA-INDUZIERTE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
IN
31
CACO-2-ZELLEN
IN
GEGENWART
VON
INLC
UND
EGF
2.3.1.3.
EINFLUSS
VON
TYRPHOSTIN
AG1478
AUF
INLA-INDUZIERTE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
IN
32
CACO-2-ZELLEN
IN
GEGENWART
VON
INLC
UND
EGF
2.3.1.4.
EINFLUSS
VON
ETHANOL
AUF
INLA-INDUZIERTE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
IN
CACO-2
34
ZELLEN
IN
GEGENWART
VON
INLC
UND
EGF
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.3.2.
EINFLUSS
VON
INTEMALIN
C
UND
EGF
AUF
INLB-INDUZIERTE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
36
IN
HBMECS
2.4.
BEDEUTUNG
VON
ACTA
FUER
DIE
INVASION
VON
L.
MONOCYTOGENES
EGD
IN
CACO-2-ZELIEN
37
2.5.
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
VON
INTERNALINEN
MIT
HILFE
DES
YEAST
TWO-HYBRID
38
SYSTEMS
2.5.1.
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
FUER
DAS
YEAST
TWO-HYBRID
SYSTEM
3
8
2.5.2.
EXPRESSION
DER
FUSIONSPROTEINE
IN
S.
CEREVISIAE
39
2.5.3.
UNTERSUCHUNG
DER
INTERAKTION
MITTELS
SS-GAL
FILTERTEST
42
3.
DISKUSSION
44
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
63
4.1.
GERAETE
63
4.2.
MATERIALIEN
63
4.2.1.
CHEMIKALIEN,
MEDIEN,
ENZYME
63
4.2.2.
VERBRAUCHSMATERIAL
64
4.3.
BAKTERIEN
UND
HEFESTAEMME
64
4.4.
ZELLLINIEN
65
4.5.
DESOXYRIBONUKLEINSAEUREN
65
4.5.1.
OLIGONUKLEOTIDE
65
4.5.2.
VEKTOREN
UND
REKOMBINANTE
PLASMIDE
65
4.6.
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
66
4.7.
PROTEINE,
INHIBITOREN,
WACHSTUMSFAKTOREN
67
4.8.
BAKTERIEN-,
HEFEN
UND
ZELLKULTUR
67
4.8.1.
MEDIEN
FUER
BAKTERIEN
UND
HEFENANZUCHT
67
4.8.2.
MEDIENZUSAETZE
FUER
BAKTERIENANZUCHT
68
4.8.3.
MEDIEN
FUER
ZELLKULTUR
68
4.9.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
69
4.10.
METHODEN
71
4.10.1
HALTUNG
UND
AUFZUCHT
DER
BAKTERIEN
UND
HEFESTAEMME
71
4.10.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
71
4.10.2.1.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
71
4.10.2.2.
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
71
4.10.2.3.
AUFTRENNUNG
VON
DNA-MOLEKUELEN
(AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE)
71
4.10.2.4.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
72
4.10.2.5.
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
HILFE
VON
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
72
4.10.2.6.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
72
4.10.2.7.
HERSTELLUNG
VON
BAKTERIENLYSAT
72
4.10.2.8.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
73
4.10.2.9.
REINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
73
4.10.2.10.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
VON
E.
COLI
DH5A
(CACH-METHODE)
73
4.10.2.11.
TRANSFORMATION
VON
PLASMID-DNA
IN
E.
COLI
DH5A
73
4.10.2.12.
TRANSFORMATION
VON
PLASMID-DNA
IN
S.
CEREVISIAE
14
4.10.3.
PROTEINANALYTISCHE
METHODEN
74
4.10.3.1.
ISOLIERUNG
VON
UEBERSTANDS
UND
ZELLASSOZIIERTEN
PROTEINEN
AUS
L.
MONOCYTOGENES
74
4.10.3.2.
ISOLIERUNG
VON
PROTEINEN
AUS
S.
CEREVISIAE
74
4.10.3.3.
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
MITTELS
SDS-PAGE
(LAEMMLI,
1970)
74
4.10.3.4.
FAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
POLYACRYLAMIDGELEN
MITTELS
COOMASSIE-BRILLIANT
BLUE
75
4.10.3.5.
WESTERN
BLOT
75
4.10.4.
ZELLKULTUR
76
4.10.4.1.
BESCHICHTEN
DER
ZELLKULTURGEFAESSE
MIT
GELATINE
(COATEN)
76
4.10.4.2.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
76
INHALTSVERZEICHNIS
III
4.10.4.3.
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
77
4.10.4.4.
LEBENDZELLZAHLBESTIMMUNG
MITTELS
TRYPANBLAU-FAERBUNG
77
4.10.4.5.
HERSTELLUNG
VON
BAKTERIENALIQUOTS
FUER
INFEKTIONSVERSUCHE
77
4.10.4.6.
INFEKTION
DIVERSER
ZELLEN
MIT
LISTERIEN
UND
UNTERSUCHUNG
DER
INVASIONSEFFIZIENZ
78
4.10.4.7.
UNTERSUCHUNG
DER
FRUEHEN
ASSOZIATION
VON
BAKTERIEN
MIT
ZELLEN
79
4.10.4.8.
INTRAZELLULAERE
VERMEHRUNG
80
4.10.4.9.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
DER
ZELLKULTURVERSUCHE
80
4.10.5.
PLASMIDSTABILITAETSTEST
80
4.10.6.
SS-GAL
FILTERTEST
80
5.
LITERATURVERZEICHNIS
81
6.
ANHANG
89
6.1.
ABKUERZUNGEN
89
CURRICULUM
VITAE
91
PUBLIKATIONEN
92 |
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