Beeinflussung cAMP-spezifischer Signalwege und Transkriptionsfaktoren in Tumorzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | VII, 163 S. Ill., graph. Darst. : 21 cm |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
2
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
3
2.1
D
ER
C
AMP-S
IGNALWEG
3
2.1.1
DAS
CAMP-RESPONSIVE
ELEMENT
(CRE)
6
2.1.2
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
CREB/ATF-FAMILIE
7
2.1.2.1
CREB
(CAMP-RESPONSIVE-ELEMENT
BINDING
PROTEIN)
7
2.1.2.2
CREM
(CAMP-RESPONSIVE-ELEMENT-MODULATOR)
11
2.1.2.3
ICER
(INDUCIBLE-CAMP-EARLY-REPRESSOR)
15
2.1.3
EINFLUSS
ANDERER
SIGNALWEGE
AUF
DIE
AKTIVITAET
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
DER
CREB/ATF-FAMILIE
17
2.1.3.1
DER
MAPK-SIGNALWEG
18
2.1.3.2
CA
2+
-SIGNALWEG
22
2.1.4
PHOSPHODIESTERASEN
24
2.1.4.1
DIE
PDE4-ISOENZYMFAMILIE
26
2.1.5
EINGRIFFSMOEGLICHKEITEN
IN
DEN
CAMP-SIGNALWEG
27
2.2
D
ER
Z
ELLZYKLUS
31
2.2.1
CYCLINE
UND
CYCLIN-ABHAENGIGE
KINASEN
(CYCLIN-DEPENDENT-KINASE,
CDK)
33
2.2.1.1
REGULATION
DES
ZELLZYKLUS
35
2.2.1.2
REGULATION
DER
CDK-AKTIVITAET
39
2.2.2
DAS
RETINOBLASTOMA-PROTEIN
(PRB)
44
2.2.2.1
AUFBAU
DES
PRB
44
2.2.2.2
FUNKTION
UND
REGULATION
DES
PRB
WAEHREND
DES
ZELLZYKLUS
45
2.2.3
EINGRIFFSMOEGLICHKEITEN
IN
DIE
REGULATION
DES
ZELLZYKLUS
48
2.3
A
POPTOSE
50
3
PROBLEMSTELLUNG
53
4
ERGEBNISSE
UND
DISKUSSION
55
4.1
E
INFLUB
VON
DC-TA-46
AUF
DIE
B
INDUNG
VON
T
RANSKRIPTIONSFAKTOREN
AN
DIE
CRE-S
EQUENZ
55
II
INHALTSVERZEICHNIS
4.1.1
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
CAMP-ABHAENGIGKEIT
DER
BINDUNG
VON
KEMPROTEINEN
AN
CAMP-RESPONSIVE
ELEMENTE
(CRE)
55
4.1.2
EINFLUSS
UNTERSCHIEDLICHER
CRE-SEQUENZEN
AUF
DAS
BINDUNGSVERHALTEN
VON
KEMPROTEINEN
60
4.1.3
IDENTIFIZIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
IN
DEM
RETARDIERTEN
KOMPLEX
62
4.1.3.1
IDENTIFIZIERUNG
MITTELS
SUPERSHIFTEXPERIMENTEN
62
4.1.3.2
ISOLIERUNG
DER
DURCH
DC-TA-46
RETARDIERTEN
BANDEN
MITTELS
ELEKTROELUTION
_65
4.1.4
IDENTIFIZIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
AUS
DEM
ZELLLYSAT
68
4.1.4.1
CREM
68
4.1.4.2CREB
70
4.1.4.3
PHOSPHO-CREB
71
4.1.5
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
AUS
4.1
73
4.2
E
INFLUB
AUF
DIE
Z
ELLZYKLUSREGULATION
75
4.2.1
UNTERSUCHUNGEN
VON
CYCLIN
A
IM
KOMPLEX
MIT
CDK2
76
4.2.2
UNTERSUCHUNGEN
DER
GESAMTMENGE
AN
CYCLIN
A
80
4.2.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS
DES
PRB
84
4.2.3.1
EINFLUSS
AUSGEWAEHLTER
SUBSTITUIERTER
PTERIDINDERIVATE
AUF
DIE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
PRB
84
4.2.3.2
EINFLUSS
AUSGEWAEHLTER
INDIRUBINDERIVATE
AUF
DEN
PHOSPHORYLIERUNGSSTATUS
DES
PRB
93
4.2.4
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ERGEBNISSE
AUS
4.2
97
5
ZUSAMMENFASSUNG
99
6
METHODEN
102
6.1
Z
ELLKULTUR
102
6.1.1
ZELLLINIEN
102
6.1.2
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
102
6.1.3
PASSAGIEREN
VON
ZELLEN
102
6.1.4
ZELLZAHLBESTIMMUNG
103
6.1.5
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
104
6.1.6
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
104
6.1.7
MYCOPLASMENSCREENING
104
6.2
P
ROTEINBESTIMMUNG
106
INHALTSVERZEICHNIS
III
6.3
S
ULFORHODAMIN
B-A
SSAY
107
6.4
M
ETHODEN
ZUR
C
HARAKTERISIERUNG
DER
T
RANSKRIPTIONS
FAKTOREN
109
6.4.1
GELRETENTIONSANALYSE
(BAND-SHIFT-ASSAY)
109
6.4.1.1
PROBENVORBEREITUNG
109
6.4.1.2
BANDSHIFT-ANSATZ
111
6.4.1.3
NATIVE
GELELEKTROPHORESE
112
6.4.1.4
BLOTTING
DER
NATIVEN
GELE
113
6.4.1.5
DETEKTION
(DIGOXIGENIN-SYSTEM)
113
6.4.1.6
DIGOXIGENIN
3
'
-END-LABELING
DER
OLIGONUKLEOTIDE
115
6.4.1.7
DOT
BLOT
117
6.4.2
SUPERSHIFT
118
6.4.3
CHARAKTERISIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
119
6.4.3.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
IM
BANDSHIFT-KOMPLEX
ENTHALTENEN
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
119
6.4.3.1.1
ELEKTROELUTION
AUS
NATIVEN
GELEN
119
6.4.3.1.2
PROTEINKONZENTRIERUNG
120
6.4.3.1.3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
122
6.4.3.1.4
WESTERN
BLOT
124
6.4.3.1.5
SILBERFAERBUNG
VON
PROTEINEN
IN
ACRYLAMIDGELEN
126
6.4.3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
TRANSKRIPTIONSFAKTOREN
AUS
DEM
ZELLLYSAT
127
6.4.3.2.1
PROBENVORBEREITUNG
127
6.43.2.2
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOT
128
6.5
M
ETHODEN
ZUR
B
EEINFLUSSUNG
DES
Z
ELLZYKLUS
128
6.5.1
IMMUNOPRAEZIPITATION
ZUR
BESTIMMUNG
VON
CYCLIN
A
IM
KOMPLEX
MIT
CDK2
128
6.5.1.1
PROBENVORBEREITUNG
129
6.5.1.1.1
NOCODAZOLARREST
129
6.5.1.1.2
AUFARBEITUNG
129
6.5.1.2
DURCHFUEHRUNG
DER
IMMUNOPRAEZIPITATION
MIT
PROTEIN
G/SEPHAROSE
130
6.5.1.3
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOT
131
6.5.2
BESTIMMUNG
DES
CYCLIN
A-GEHALTES
AUS
DEM
ZELLLYSAT
132
6.5.2.1
PROBENVORBEREITUNG
132
6.5.2.2
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOT
132
6.5.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
132
IV
INHALTSVERZEICHNIS
6.5.3.1
PROBENVORBEREITUNG
133
6.5.3.2
MESSUNG
133
6.5.4
RB-PHOSPHORYLIERUNG
135
6.5.4.1
PROBENVORBEREITUNG
135
6.5.4.2
SDS-PAGE
UND
WESTERN
BLOT
136
7
MATERIAL
137
7.1
V
ERWENDETE
G
ERAETE
137
7.2
R
EAGENZIEN
139
7.3
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
142
8
LITERATUR
143 |
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| title_full | Beeinflussung cAMP-spezifischer Signalwege und Transkriptionsfaktoren in Tumorzellen vorgelegt von Sandra Jakobs |
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