Nachweis nosokomialer Corynebacterium-urealyticum-Infektionen mittels eines genetischen Fingerabdrucks:
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| Veröffentlicht: |
Wettenberg
VVB Laufersweiler
2002
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| Ausgabe: | 1. Aufl. |
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Inhaltsverzeichnis
0. Verzeichnis der Abkürzungen 3
1. Einleitung 5
2. Schriftum 7
2.1. Taxonomie coryneformer Bakterien 7
2.1.1. Die Gattung Corynebacterium 9
2.1.2. Einteilung und Differenzierung von Corynebacterium spp. 10
2.1.3. Vorkommen und Bedeutung von Corynebacterium spp. 18
2.2. Corynebacterium urealyticum 23
2.2.1. Phänotypische und biochemische Eigenschaften 24
2.2.2. Vorkommen, Verbreitung und Isolierung 25
2.2.2.1. Pathogene Bedeutung beim Menschen 25
2.2.2.2. Pathogene Bedeutung beim Tier 29
2.2.3. Risiko und prädisponierende Faktoren 33
2.2.4. C. urealyticum und Hospitalismusgeschehen 36
2.2.5. Antibiotika Empfindlichkeit und therapeutische Aspekte 38
3. Material und Methoden 42
3.1. Verwendete Bakterienstämme 42
3.2. Konservierung der Stämme 45
3.3. Biochemische Untersuchung und Identifizierung 46
3.4. Anzuchtmedien zur Massenvermehrung der Stämme für die weitere
Zellpräparation 46
3.5. Resistenztest gegen chemotherapeutische Wirkstoffe 46
3.6. Erstellung eines Proteinfingerprint 48
3.6.1. Herstellung der Zellpräparationen 48
3.6.2. Proteinbestimmung 48
3.6.3. SDS Polyacrylamidgelelektrophorese 48
3.6.4. Coomassie Färbung 49
3.7. Erstellen eines DNA Fingerprints 49
3.7.1. Herstellen der Agaroseblöckchen und Zellwandlyse 49
3.7.2. Auswahl von geeigneten Restriktionsenzymen für die Makrorestriktion 50
3.7.3. Restriktionsverdau der Gesamtzell DNA 51
Inhaltsverzeichnis
3.7.4. Anpassung der Elektrophorese Parameter und Etablierung der
Pulsfeldgelelektrophorese 51
3.8. Plasmidpräparation 53
3.9. DNA DNA Hybridisierung 55
3.10. Herstellung von Gensonden 55
3.11. Downward Southern Blot 58
3.12. Hybridisierung und Entwicklung 59
3.13. Exonuclease Ill Verdau 60
3.14. EcoR I Verdau 60
4. Ergebnisse 61
4.1. Morphologische und biochemische Eigenschaften 61
4.2. Wachstumseigenschaften 62
4.3. Erstellen eines DNA Fingerprints 62
4.4. Proteinfingerprinting 83
4.5. Resistenzspektrum gegenüber chemotherapeutischen Wirkstoffen 86
4.6. Untersuchung auf Vorhandensein von Plasmiden bei C. urealyticum 95
5. Diskussion 103
6. Zusammenfassung 115
7. Summary 117
8. Anhang 119
8.1. Material 119
9. Literatur 127
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