Therapeutische Oligonukleotide: Beeinflussung der Apoptose maligner B-Lymphozyten durch Antisense-Hemmung und CpG-abhängige Immunmodulation
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
2003
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IV
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
FRAGESTELLUNG
.
1
1.2
APOPTOSE
.
2
1.2.1
BIOLOGISCHES
PHAENOMEN
UND
MORPHOLOGISCHE
KENNZEICHEN
.
2
1.2.2
MOLEKULARE
MECHANISMEN
.
3
1.2.3
PATHOGENETISCHE
BEDEUTUNG
DER
APOPTOSE
.
8
1.2.4
PATHOGENETISCHE
BEDEUTUNG
VON
BCL-2
.
10
1.3
CHRONISCHE
LYMPHATISCHE
LEUKAEMIE
VOM
B-ZELLTYP
(B-CLL)
.
13
1.3.1
KLINIK
DER
B-CLL
.
13
1.3.2
BIOLOGIE
DER
B-CLL
.
16
1.4
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
(ANTISENSE-ODN)
.
19
1.4.1
MOLEKULARE
GRUNDLAGEN
DER
ANTISENSE-TECHNOLOGIE
.
19
1.4.2
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTIDE
GEGEN
BCL-2
.
21
1.5
CPG-OLIGONUKLEOTIDE
(CPG-ODN)
.
25
1.5.1
BIOLOGISCHES
KONZEPT
.
25
1.5.2
WIRKUNGEN
AUF
DAS
IMMUNSYSTEM
.
26
1.5.3
WIRKUNGSWEISE
AUF
SUBZELLULAERER
EBENE
.
29
1.5.4
THERAPEUTISCHE
STRATEGIEN
.
31
V
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
33
2.1
EXPERIMENTE
MIT
PERMANENTEN
ZELLLINIEN
.
33
2.1.1
ZELLKULTUR
.
33
2.1.2
INDUKTION
DER
APOPTOSE
.
33
2.1.3
NACHWEIS
DER
APOPTOSE
.
35
2.1.4
MESSUNG
DER
PROTEINEXPRESSION
.
37
2.1.5
OLIGONUKLEOTIDE
UND
TRANSFEKTION
.
38
2.2
EXPERIMENTE
MIT
PRIMAEREN
ZELLEN
.
42
2.2.1
PRAEPARATION
MONONUKLEAERER
ZELLEN
AUS
DEM
PERIPHEREN
BLUT
(PBMC).42
2.2.2
INKUBATION
DER
PBMC
MIT
OLIGONUKLEOTIDEN
.
43
2.2.3
QUANTIFIZIERUNG
DER
MRNA
.
44
2.3
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS)
.
45
2.4
STATISTIK
.
46
3.
ERGEBNISSE
.
47
3.1
ETABLIERUNG
EINES
APOPTOSEMODELLS
.
47
3.1.1
ANNEXIN
V
UND
PROPIDIUMIODID
ZUM
NACHWEIS
VON
APOPTOSE
.
47
3.1.2
BESTIMMUNG
DER
CASPASE-3
ALS
ALTERNATIVER
APOPTOSENACHWEIS
.
51
3.1.3
VALIDIERUNG
DES
MODELLS
DURCH
NACHWEIS
DER
DNA-FRAGMENTIERUNG
.
53
3.2.
UNTERSUCHUNG
DES
ANTISENSE-EFFEKTS
.
55
3.2.1
TRANSFEKTION
DER
ZELLEN
MIT
OLIGONUKLEOTIDEN
.
55
3.2.2
SUPPRESSION
VON
BCL-2
DURCH
DAS
ANTISENSE-OLIGONUKLEOTID
G3139
.
61
3.2.3
NICHT-ANTISENSE-VERMITTELTE
EFFEKTE
VON
G3139
.
65
3.3.
UNTERSUCHUNG
DER
CPG-EFFEKTE
.
66
3.3.1
PATIENTENDATEN
.
68
3.3.2
ZELLIDENTIFIZIERUNG
UND
OLIGONUKLEOTID-AUFNAHME
.
70
3.3.3
ENDPUNKT
IMMUNSTIMULATION
.
71
3.3.4
ENDPUNKT
APOPTOSE
.
75
3.3.5
KOMBINATION
VON
G31
39
MIT
MITOXANTRON
.
82
VI
4.
DISKUSSION
.
83
4.1
UEBERSICHT
UEBER
DIE
EXPERIMENTELLEN
BEFUNDE
.
83
4.2
DISKUSSION
DER
METHODEN
.
85
4.2.1
MESSUNG
DER
APOPTOSE
.
85
4.2.2
PHOSPHOROTHIOAT-MODIFIKATION
DER
OLIGONUKLEOTIDE
.
88
4.2.3
TRANSFEKTION
IM
ALLGEMEINEN
.
89
4.2.4
TRANSFEKTION
MIT
LIPOFEKTIN
UND
EXGEN
500
.
91
4.2.5
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
92
4.3
DISKUSSION
DER
ERGEBNISSE
IM
HORIZONT
DER
LITERATUR
.
94
4.3.1
ANTISENSE-HEMMUNG
VON
BCL-2
.
94
4.3.2
CPG-EFFEKTE
IN
GM697-ZELLEN
UND
BURKITT-LYMPHOMZELLEN.;
.
97
4.3.3
CPG-EFFEKTE
IN
PRIMAEREN
B-CLL-ZELLEN
.
99
4.4
KLINISCHE
RELEVANZ
DER
ERGEBNISSE
.
111
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
113
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.116
VERZEICHIS
DER
ABKUERZUNGEN
UND
AKRONYME
.
134
DANKSAGUNG
.137
PUBLIKATIONEN
.
138
CURRICULUM
VITAE
.
139 |
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