Vollständige Primärstrukturaufklärung von Mistellektin-III aus Viscum album L.:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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2001
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VOLLSTAENDIGE PRIMAERSTRUKTURAUFKLAERUNG
VON MISTELLEKTIN-III AUS VISCUM ALBUM L.
DISSERTATION
DER FAKULTAET FUER CHEMIE UND PHARMAZIE
DER EBERHARD-KARLS-UNIVERSITAET TUEBINGEN
ZUR ERLANGUNG DES GRADES EINES DOKTORS
DER NATURWISSENSCHAFTEN
2001
VORGELEGT VON
ROLAND WACKER
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS I
ABKUERZUNGEN IV
1. EINLEITUNG 1
1.1 DIE BOTANIK DER MISTEL 1
1.2 DIE ROLLE DER MISTEL IN DER PHARMAKOLOGIE UND MEDIZIN 3
1.3 PHARMAKOLOGISCH RELEVANTE INHALTSSTOFFE VON VISCUM ALBUM L. 4 MIT
AUSNAHME DER MISTELLEKTINE
1.4 DIE LEKTINE DER MISTEL 8
1.4.1 STRUKTUR UND EIGENSCHAFTEN VON MISTELLEKTIN 1 9
1.4.2 MISTELLEKTIN 2 UND MISTELLEKTIN 3 18
1.5 PHARMAKOLOGISCH RELEVANTE WIRKUNGEN VON MISTELLEKTINEN 20 1.5.1
CYTOTOXIZITAET VON MISTELLEKTINEN IN VIVO UND IN VITRO 20
1.5.2 IMMUNMODULATORISCHE WIRKUNGEN VON MISTELLEKTINEN 22
1.6 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT 24
2. MATERIAL & METHODEN 26
2.1 MATERIAL 26
2.1.1 GERAETE 26
2.1.2 CHROMATOGRAPHIESAEULEN 27
2.1.3 MATERIALIEN 27
2.1.4 LOESUNGEN 28
2.2 METHODEN 29
2.2.1 HERSTELLUNG DES MISTELEXTRAKTES 29
2.2.2 KATIONENAUSTAUSCHERVORFRAKTIONIERUNG VON 30
MISTELEXTRAKTPROTEINEN 2.2.3 HERSTELLUNG DER GALACTOSAMID-SEPHAROSE 30
2.2.4 HERSTELLUNG DER LACTOSYL-SEPHAROSE 4B 31
2.2.5 ISOLIERUNG VON ML3 DURCH AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN 31
GALACTOSAMID-SEPHAROSE 4B 2.2.6 ISOLIERUNG VON ML3 UND ML1 DURCH
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE AN 32 LACTOSYLSEPHAROSE
2.2.7 ANIONENAUSTAUSCHERNACHREINIGUNG VON ML3 32
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.8 KATIONENAUSTAUSCHERREINIGUNG VON ML3 33
2.2.9 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 33
2.2.10 HAEMAGGLUTINIERUNGSASSAY 33
2.2.11 SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE 34
2.2.12 ISOLIERUNG DER A- UND B-KETTEN VON ML3 35
2.2.13 REDUKTION UND PYRIDYLETHYLIERUNG VON CYSTEINEN 36
2.2.14 ENZYMATISCHE SPALTUNGEN UND HPLC-TRENNUNG DER SPALTPEPTIDE 36
2.2.14.1 ENDOPROTEINASE ASPN-SPALTUNG VON ML3A 36 2.2.14.2
CHYMOTRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3A 37
2.2.14.3 CHYMOTRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3B-PE 38
2.2.14.4 TRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3-PE 38
2.2.15 MALDI-MS VON SPALTPEPTIDEN 39
2.2.16 SEQUENZANALYSE VON SPALTPEPTIDEN 40
2.2.17 AMINOSAEURENANALYSE 41
2.2.18 GLYCOPEPTIDDETEKTION MIT ORCINOL 41
2.2.19 MONOSACCHRIDKOMPOSITIONSANALYSE VON ML3 41
2.2.20 GLYCOSIDASESPALTUNGEN VON GLYCOPEPTIDEN 42
3. ERGEBNISSE 44
3.1 ISOLIERUNG VON MISTELLEKTINEN 44
3.1.1 DIREKTES VERFAHREN ZUR ML3-ISOLIERUNG 44
3.1.2 INDIREKTES VERFAHREN ZUR KOMBINIERTEN ML1 - UND ML3-ISOLIERUNG 46
3.1.3 HOCHREINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON MISTELLEKTINEN 50 3.1.4
ISOLIERUNG DER KETTEN UND ALKYLIERUNG DER CYSTEINRESTE 54 3.1.5
REDUKTION UND ALKYLIERUNG VON ML3 UND ML3B 57
3.2 SEQUENZANALYSE DER ML3A-KETTE 57
3.2.1 ENDOPROTEINASE ASPN-VERDAU 58
3.2.2 CHYMOTRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3A 60
3.2.3 SEQUENZAUFSTELLUNG VON ML3A 64
3.3 SEFLUENZANLYSE DER ML3B-KETTE 67
3.3.1 CHYMOTRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3B-PE 67
3.3.2 TRYPTISCHE SPALTUNG VON ML3-PE 70
3.3.3 SEQUENZAUFSTELLUNG VON ML3B 72
3.3.4 AMINOSAEURENKOMPOSITIONSANALYSE VON ML3 74
3.4 STRUKTURANALYSE DER GLYCOSYLIERUNG VON ML3 75
3.4.1 MONOSACCHARIDKOMPOSITIONSANALYSE VON ML3 75
3.4.2 OLIGOSACCHARIDCHARAKTERISIERUNG VON ML3 79
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
4. DISKUSSION 91
4.1 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON ML3 91
4.2 PRIMAERSTRUKTUR VON ML3A 93
4.3 HOMOLOGIEVERGLEICH UND ENZYMATISCHE AKTIVITAET VON ML3A 95
4.4 PRIMAERSTRUKTUR VON ML3B 100
4.5 HOMOLOGIEVERGLEICH UND ZUCKERBINDUNG VON ML3B 101
4.6 DISULFIDBRUECKENVERTEILUNG IN ML3 110
4.7 SEKUNDAERSTRUKTURVORHERSAGE, ANTIGENE DETERMINANTEN UND
STRUKTURMODELL 111
4.8 GLYCANANALYSE VON ML3 120
5. ZUSAMMENFASSUNG 123
6. LITERATUR 126
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