Untersuchungen zur Eignung M-DC8-positiver dendritischer Zellen für Vakzinierungsansätze beim Menschen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2003
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2003 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG. 1
1.1 VAKZINIERUNGSSTRATEGIEN IN DER TUMORTHERAPIE. 1
1.2 DENDRITISCHE ZELLEN.5
1.2.1 UEBERSICHT.5
1.2.2 ANTIGENPRAESENTIERENDE EIGENSCHAFTEN.7
1.2.3 INTERAKTION MIT T-ZELLEN.12
1.3 M-DC8
+ZELLEN.14
1.4 CD16: EIN FCY-REZEPTOR ALS ZIELSTRUKTUR.16
1.4.1 UEBERSICHT.16
1.4.2 CD 16-BASIERTE ANSAETZE IN DER TUMORTHERAPIE.18
1.5 ZIELSETZUNG DER ARBEIT.19
2 MATERIAL UND METHODEN.21
2.1 CHEMIKALIEN UND LOESUNGEN. 21
2.2 PROTEIN-TECHNIKEN.23
2.2.1 KOPPLUNG VON PEPTIDANTIGEN MIT ANTIKOERPERN.23
2.2.2 KOPPLUNG VON PROTEINANTIGEN MIT ANTIKOERPERN.24
2.2.3 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON PROTEINEN (SDS-PAGE).26
2.2.4 NACHWEIS VON IGG-ANTIKOERPERN IM IMMUNBLOTVERFAHREN.27
2.2.5 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON ANTIKOERPERN IM ELISA.28
2.2.6 BESTIMMUNG VON CYTOKIN-KONZENTRATIONEN IN ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
DURCH
ELISA .29
2.2.7 BESTIMMUNG DER KOPPLUNGSEFFIZIENZ VON FLUORESZENZMARKIERTEN
ANTIGENEN MIT
ANTIKOERPERN (F/P-RATIO).30
2.2.8 BIOTINYLIERUNG UND FLUORESCEINMARKIERUNG VON ANTIKOERPERN.30
2.2.9 HERSTELLEN EINER ANTI-MAUS IGG-AFFINITAETSSAEULE ZUR REINIGUNG DES
D-DC 8.3-ANTIKOERPERS.31
2.2.10 REINIGUNG VON IGG-ANTIKOERPERN.31
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.2.11 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON ANTIKOERPERN DURCH PHOTOMETRISCHE
MESSUNG. 32
2.3 ZELLKULTURTECHNIKEN.32
2.3.1 MEDIEN UND PUFFER FUER DIE ZELLKULTUR.32
2.3.2 VERWENDETE T-ZELL-KLONE UND ZELL-LINIEN.34
2.3.3 ISOLIERUNG VON PERIPHEREN MONONUKLEAEREN ZELLEN AUS BLUT.35
2.3.4 LYSE VON ERYTHROZYTEN.35
2.3.5 ISOLATION VON M-DC8
+-ZELLEN AUS PBMCS MIT HILFE VON MAGNETISCHEN
PARTIKELN.36
2.3.6 DIFFERENZIERUNG VON M-DC8
+-ZELLEN ZU IMMATUREN DENDRITISCHEN ZELLEN.36
2.3.7 MATURIERUNG VON IMMATUREN DENDRITISCHEN ZELLEN.37
2.3.8 KULTIVIERUNG UND RESTIMULATION VON CD4
+ T-ZELLKLONEN.37
2.3.9 KULTIVIERUNG UND RESTIMULATION VON CD8
+ T-ZELLKLONEN.38
2.3.10 KRYOKONSERVIERUNG VON ZELLEN.38
2.4 DURCHFLUSSZYTOMETRIE.
39
2.4.1 VERWENDETE ANTIKOERPER.39
2.4.2 DARSTELLUNG VON OBERFLAECHENMARKEM.41
2.5 ZELLULAERE ASSAYS.
43
2.5.1 AKTIVIERUNG VON T-ZELLEN DURCH M-DC8
+-ZELLEN BEI ZUGABE VON
ANTIKOERPER-ANTIGEN-KONJUGATEN.43
2.5.2 ANALYSE DES AUFNAHMEWEGES DER KONJUGATE.44
2.5.3 ZYTOTOXIZITAETSTEST ZUM NACHWEIS DER SPEZIFITAET DES CD8
+ T-ZELLKLONS.45
3 ERGEBNISSE.47
3.1 CHARAKTERISIERUNG DER VON DEN MONOKLONALEN ANTIKOERPERN M-DC
8
UND
D-DC8.3 ERKANNTEN ZELLPOPULATIONEN.
47
3.1.1 EXPRESSION DER M-DC8 UND D-DC8.3-ANTIGENE.47
3.1.1.1 SPENDERVARIABILITAET DER ANTIGENEXPRESSION.47
3.1.1.2 VERAENDERUNG DER ANTIGENEXPRESSION UNTER KULTURBEDINGUNGEN.48
3.1.1.3 EXPRESSION VON ZELLINIENSPEZIFISCHEN OBERFLAECHENMOLEKUELEN.49
3.1.1.4 EINORDNUNG DER M-DC8
+-ZELLEN UND D-DC8.3+-ZELLEN UNTER DEN
MONOZYTAEREN ZELLEN.50
3.1.2 EXPRESSION DES FCY-REZEPTORS CD16.52
3.1.3 EXPRESSION VON OBERFLAECHENMOLEKUELEN AUF M-DC8
+-ZELLEN.52
3.1.3.1 EXPRESSION VON MHC-MOLEKUELEN.52
3.1.3.2 EXPRESSION VON KOSTIMULATORISCHEN MOLEKUELE.53
3.1.3.3 VERAENDERUNG DER M-DC8+-ZELLEN DURCH IN-VITRO-KULTIVIERUNG.54
3.1.4 INTERNALISIERUNG DES CD 16- UND DES D-DC8.3-ANTIGENS DURCH
M-DC8+-ZELLEN NACH ANTIKOERPERBINDUNG.55
3.2 STUDIEN ZUR AUFNAHME, PROZESSIERUNG UND PRAESENTATION VON EXOGEN
AUFGENOMMENEM ANTIGEN FUER DIE AKTIVIERUNG VON CD4
+ T-ZELLEN.56
3.2.1 HERSTELLUNG VON ANTIKOERPER-PEPTIDANTIGEN-KONJUGATEN.56
3.2.1.1 CHEMISCHE KOPPLUNG.56
3.2.1.2 ANALYSE DER ANTIKOERPER-PEPTIDANTIGEN-KONJUGATE.59
3.2.2 SPEZIFISCHE AKTIVIERUNG VON CD4
+ T-ZELLEN DURCH M-DC8+-ZELLEN.62
3.2.2.1 EFFIZIENZ UNTERSCHIEDLICHER
ANTIKOERPER-PEPTIDANTIGEN-KONJUGATE.64
3.2.2.2 DIE BEDEUTUNG EINER STABILEN
ANTIKOERPER-PEPTIDANTIGEN-KONJUGATION.65
3.2.2.3 EFFEKT VON ANTIKOERPER-PEPTIDANTIGEN-KONJUGATEN AUF T-ZELLEN IN
ABWESENHEIT VON M-DC8
+-ZELLEN.67
3.2.2.4 STIMULATION VON T-ZELLEN DURCH M-DC8
+-ZELLEN IN ABHAENGIGKEIT VON
DER INKUBATIONSDAUER MIT ANTIKOERPER-TETANUSTOXOID-PEPTID-KONJUGAT.68
3.2.2.5 UNTERSUCHUNGEN ZUM MECHANISMUS DER INTERNALISIERUNG.69
3.2.3 SPEZIFISCHE AKTIVIERUNG VON CD4
+ T-ZELLEN DURCH IMMATURE DENDRITISCHE
ZELLEN.71
3.2.3.1 AKTIVIERUNGSEFFIZIENZ UNTERSCHIEDLICHER
ANTIKOERPER-TETANUSTOXOID-
PEPTID-KONJUGATE.72
3.2.3.2 DIE BEDEUTUNG DER KOVALENTEN BINDUNG ZWISCHEN ANTIKOERPER UND
T ETANUSTOXOID-PEPTID. 73
3.3 UNTERSUCHUNGEN ZUR KREUZPRAESENTATION VON EXOGEN AUFGENOMMENEM
ANTIGEN IM MHC-KIASSE I-KONTEXT DURCH M-DC8
+-ZELLEN.75
3.3.1 ETABLIERUNG EINES TESTSYSTEMS ZUR UNTERSUCHUNG DER
KREUZPRAESENTATION.76
3.3.2 SPEZIFITAET DES CD8
+ T-ZELLKLONS.77
3.3.3 HERSTELLUNG VON KONJUGATEN AUS ANTIKOERPER UND HER2/NEU-PEPTID.79
3.3.4 AKTIVIERUNG VON HER2/NEU-SPEZIFISCHEN CD8
+ T-ZELLEN DURCH M-DC8+-
ZELLEN, DIE MIT ANTIKOERPER-HER2/NEU-PEPTID-KONJUGAT INKUBIERT WURDEN.81
3.3.4.1 T-ZELLAKTIVIERUNG IN ABHAENGIGKEIT VON DER
KONJUGATKONZENTRATION.81
3.3.4.2 T-ZELLAKTIVIERUNG BEI ZUSAETZLICHER KOSTIMULATION DURCH
ANTI-NKG2D.82
3.3.5 HERSTELLUNG VON ANTIKOERPER-PROTEIN-KONJUGATEN.86
3.3.6 AKTIVIERUNG VON HER2/NEU-SPEZIFISCHEN CD8
+ T-ZELLEN DURCH M-DC8+-
ZELLEN, DIE MIT ANTIKOERPER-PROTEIN-KONJUGAT INKUBIERT WURDEN.91
4 DISKUSSION.93
4.1 SYNTHESESTRATEGIEN FUER ANTIKOERPER-ANTIGEN-KONJUGATE.93
4.2 VERWENDUNG VON CD25 UND CD69 ALS T-ZELLAKTIVIERUNGSMARKER.94
4.3 D-DC8.3-ANTIGEN UND FCAE-REZEPTOR III ALS ZIELSTRUKTUREN AUF M-DC8 -
ZELLEN.95
4.4 MOEGLICHKEITEN FUER DAS TARGETING VON NATIVEN M-DC8
+-ZELLEN UND
IMMATUREN M-DC8
+ DENDRITISCHEN ZELLEN.98
4.5 FAEHIGKEITEN DER M-DC8
+-ZELLEN ZUR ANTIGENPRAESENTATION.99
4.5.1 PROZESSIERUNG UND PRAESENTATION VON EXOGEN AUFGENOMMENEN ANTIGEN
IM MHC-KLASSE II-KONTEXT.99
4.5.2 PROZESSIERUNG UND PRAESENTATION VON EXOGEN AUFGENOMMENEN ANTIGEN
IM MHC-KLASSE I-KONTEXT. 101
4.6 ANWENDUNGSPOTENTIAL VON M-DC8
+-ZELLEN FUER VAKZINIERUNGSANSAETZE.106
4.7 AUSBLICK. 108
5 ZUSAMMENFASSUNG.110
6 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.112
7 LITERATURVERZEICHNIS.114 |
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