Yersinia enterocolitica als live carrier vaccine:
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2002
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Beschreibung: | München, Univ., Diss., 2003 |
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adam_text | DISSERTATION DER FAKULTAET FUER BIOLOGIE DER
LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAET MUENCHEN YERSINIA ENTEROCOLITICA ALS LIVE
CARRIER VACCINE VORGELEGT VON UWE KRAMER AUS WERNE AN DER LIPPE DER
FAKULTAET ZUR BEURTEILUNG AM 23.9.2002 EINGEREICHT INHALT 0. INHALT 0.
INHALT 1 1. EINLEITUNG 4 1.1 ORALE IMMUNISIERUNG MIT LIVE CARRIER
VAKZINEN 4 1.1.1 ORALE IMMUNISIERUNG 4 1.1.2 LEBENDE TRAEGERSYSTEME FUER
DIE ORALE VAKZINIERUNG 4 1.2 Y. ENTEROCOLITICA ALS PATHOGEN 6 1.2.1 DAS
KLINISCHES BILD DER HUMANEN YERSINIOSE 6 1.2.2 INFEKTIONSIMMUNOLOGIE DER
MURINEN YERSINIOSE 6 1.2.3 PATHOGENITAETSFAKTOREN VON Y. ENTEROCOLITICA
10 1.2.4 DAS TYP HL-SEKRETIONSSYSTEM VON Y. ENTEROCOLITICA 10 1.3 Y.
ENTEROCOLITICA ALS IMPFSTAMM 11 1.4 H. PYLORI ALS MODELL-PATHOGEN 13 1.5
OVALBUMIN ALS MODELL-ANTIGEN 14 1.6 ZIELSETZUNG DER ARBEIT 15 2.
MATERIAL UND METHODEN 17 2.1 MATERIALIEN 17 2.1.1 GERAETE 17 2.1.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN 19 2.1.3 LABORCHEMIKALIEN 20 2.1.4 ENZYME 21 2.1.5
ANTIKOERPER 21 2.1.6 SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE 22 2.1.7 PLASMIDE 23
2.1.8 BAKTERIENSTAEMME 24 2.1.9 ZEIL-LINIEN 25 2.1.10 VERSUCHSTIERE 25
2.2 METHODEN 26 2.2.1 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 26 2.2.1.1
PLASMID-PRAEPARATION MIT NUCLEOBOND AX-SAEULEN 26 2.2.1.2
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE 27 2.2.1.3 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR) 27
2.2.1.4 TRANSFORMATION VON CALCIUM-KOMPETENTEN BAKTERIEN 28 2.2.1.5
TRANSFORMATION VON ELEKTROKOMPETENTEN BAKTERIEN 28 2.2.1.6 SPALTUNG VON
DNA MIT RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN 29 2.2.1.7 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN
29 2.2.1.8 DEPHOSPHORYLIERUNG 29 2.2.1.9 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN
AUS AGAROSE-GELEN 30 2.2.1.10 NATRIUMACETAT-FAELLUNG VON DNA 30 2.2.1.11
SEQUENZIERUNG 30 2.2.2 PROTEINCHEMISCHE UND ALLGEMEINE BIOCHEMISCHE
METHODEN 30 2.2.2.1 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN 30
2.2.2.2 IMMUNOBLOT (WESTERN-BLOT) 32 2.2.2.3 PROTEINBESTIMMUNG 32 INHALT
2 2.2.2.4 ANTIGEN-ELISA 32 2.2.2.5 IMMUNPRAEZIPITATION 33 2.2.6.6
AUFREINIGUNG VON REKOMBINANTER H. PYLORI-UREASE B 34 2.2.3 ARBEITEN MIT
BAKTERIEN 34 2.2.3.1 MEDIEN FUER DIE KULTIVIERUNG VON BAKTERIEN 34
2.2.3.2 ANTIBIOTIKA IN BAKTERIEN-MEDIEN 35 2.2.3.3 ANZUCHT, ERNTE UND
WASCHEN VON BAKTERIEN 35 2.2.3.4 HERSTELLUNG VON GEFRIERKULTUREN VON
BAKTERIEN 36 2.2.3.5 HERSTELLUNG HITZEGETOETETER BAKTERIEN 36 2.2.2.6
PRAEPARATION VON SEKRETIERTEN PROTEINEN 36 2.2.3.7 UNTERSUCHUNG DER IN
VIRRO-STABILITAET VON PLASMIDEN 37 2.2.3.8 ANZUCHT VON//, PYLORI 37 2.2.4
ARBEITEN MIT EUKARYONTISCHEN ZELLEN 37 2.2.4.1 MEDIEN FUER DIE ZELLKULTUR
3 8 2.2.4.2 KULTIVIERUNG VON EUKARYONTISCHEN ZEIL-LINIEN 38 2.2.4.3
BESTIMMUNG DER LEBEND-ZELLZAHL MIT TRYPAN-BLAU 39 2.2.4.4 EINFRIEREN VON
ZELLEN 39 2.2.4.5 INOKULATION VON EUKARYONTISCHEN ZELLEN MIT YERSINIEN
39 2.2.4.6 UNTERSUCHUNG VON TRANSLOZIERTEN YERSINIEN-PROTEINEN 40
2.2.4.7 INTERAKTION VON YERSINIEN MIT ANTIGENPRAESENTIERENDEN ZELLEN 40
2.2.4.8 FIXIERUNG VON ZELLEN MIT PARAFORMALDEHYD 41 2.2.4.9 ISOLIERUNG
MURINER T-ZELLEN 41 2.2.4.10 AUFREINIGUNG VON T-ZELLEN DURCH PANNING 42
2.2.4.11 PROLIFERATIONSVERSUCHE MIT MURINEN T-ZELLEN 42 2.2.4.12
PHAENOTYPISIERUNG VON ZELLEN MITTELS DURCHFLUSSZYTOMETRIE 43 2.2.5
TIEREXPERIMENTELLE METHODEN 43 2.2.5.1 INTRAVENOESE IMMUNISIERUNG VON
MAEUSEN 43 2.2.5.2 INTRAPERITONEALE IMMUNISIERUNG VON MAEUSEN 43 2.2.5.3
BLUTENTNAHME 44 2.2.5.4 HERSTELLUNG EINER PROTEIN-ADJUVANS-EMULSION 44
2.2.5.5 PASSAGIERUNG VON YERSINIEN DURCH MAEUSE 44 2.2.5.6 ORALE
IMMUNISIERUNG VON MAEUSEN MIT YERSINIEN 44 2.2.5.7 REISOLIERUNG VON
YERSINIEN UND BESTIMMUNG DES INFEKTIONSGRADES 45 2.2.5.8 VISUALISIERUNG
DER PROLIFERATION VON OVALBUMIN-SPEZIFISCHEN T-ZELLEN 45 2.2.5.9
OROGASTRISCBE INFEKTION MIT H. PYLORI 46 2.2.5.10 REISOLIERUNG VON H,
PYLORI UND BESTIMMUNG DES INFEKTIONSGRADES 46 2.2.6 STATISTISCHE
BEWERTUNG DER ERGEBNISSE 46 , 3. ERGEBNISSE 47 3.1 IMMUNISIERUNG GEGEN
H. PYLORI 47 3.1.1 KONSTRUKTION UND EIGENSCHAFTEN DES IMPFSTAMMES 47
3.1.2 IN VI VO-EXPERIMENTE MIT DEM IMPFSTAMM 50 3.2 IMMUNISIERUNG MIT
OVALBUMIN ALS ANTIGEN 54 3.3 INTERAKTION ZWISCHEN ANTIGENPRAESENTIERENDEN
ZELLEN UND Y. ENTEROCOLITICA 64 4. DISKUSSION 74 4.1 ALLGEMEINE PROBLEME
MIT Y. ENTEROCOLITICA ALS IMPFSTAMM 74 4.2 IMMUNISIERUNG GEGEN H. PYLORI
77 4.3 IMMUNISIERUNG MIT OVALBUMIN ALS ANTIGEN 79 INHALT 4.4 INTERAKTION
ZWISCHEN ANTIGENPRAESENTIERENDEN ZELLEN UND Y. ENTEROCOLITICA. 81 4.5
AUSBLICK 87 5. ZUSAMMENFASSUNG 89 6. ABKUERZUNGEN 91 7. LITERATUR 93 8.
VEROEFFENTLICHUNGEN 112 9. DANKSAGUNGEN 113 10. LEBENSLAUF 114
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