Untersuchungen zur Induktion und zum Transfer der Vancomycin-Resistenz vom VanA-Typ sowie zur Flavophospholipol-Resistenz in Enterococcus faecium:
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| Format: | Buch |
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
1. ZUSAMMENFASSUNG. 1
1. SUMMARY.3
2. EINLEITUNG. 5
2.1 DIE GATTUNG
ENTEROCOCCUS.5
2.2 ENTEROKOKKEN ASSOZIIERTE INFEKTIONEN.5
2.3 VIRULENZFAKTOREN BEI ENTEROKOKKEN.6
2.4 ANTIBIOTIKARESISTENZEN BEI ENTEROKOKKEN.7
2.5 DIE GLYCOPEPTIDRESISTENZ IN ENTEROKOKKEN.9
2.6 EPIDEMIOLOGIE VON VRE.13
2.7 FLAVOPHOSPHOLIPOL.14
2.8 ZIELSETZUNG DIESER ARBEIT.17
3. MATERIAL.18
3.1 BAKTERIENSTAEMME.18
3.2 PLASMIDE.19
3.3 OLIGONUKLEOTIDE.20
3.4 ANTIKOERPER.20
3.5 CHEMIKALIEN UND ENZYME.20
3.6 MEDIEN, AGARPLATTEN UND ANTIB IOTIKA.21
3.6.1 MEDIEN
.21
3.6.2 AGARPLATTEN
.23
3.6.3 ANTIBIOTIKA
.23
3.7 GERAETE.24
4. METHODEN.25
4.1 BESTIMMUNG DER BAKTERIENSPEZIES.25
4.2 BESTIMMUNG DER MINIMALEN HEMMKONZENTRATION.25
4.3 IN
V/77?O-FILTERKONJUGATION.25
4.4 ISOLIERUNG VON RIFAMPICIN- UND FUSIDINSAEURE-RESISTENTEN
REZIPIENTEN.26
4.5 PULSFELD-GELELEKTROPHORESE (PFGE).27
4.5.1 GESAMT-DNS-LSOLIERUNG AUS ENTEROKOKKEN
.:.27
4.5.2 RESTRIKTIONSSPALTUNG
.27
4.5.3 PULSFELDGELELEKTROPHORESE
.27
4.5.4 LOESUNGEN
.28
4.6 SDS-POLYACRYLAMIDGEL-ELEKTROPHORESE (SDS-PAGE) DER
GESAMTZELLPROTEINE VON
ENTEROKOKKEN.28
4.6.1 ISOLIERUNG VON GESAMTZELLPROTEINEN
.29
4.6.2 CHEMIKALIEN
.29
4.6.3 HERSTELLUNG EINES POLYACRYLAMIDGELS.30
4.6.4 ELEKTROPHORESE-LAUF.30
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/968408907
INHALTSVERZEICHNIS
4.6.5 ANFAERBEN DES GELS
.30
4.7 HERSTELLUNG EINES VANA-LIGASE ANTIKOERPERS.31
4.7.1 KLONIERUNG, EXPRESSION UND AUFREINIGUNG DES VANA-UGASE PROTEINS
.31
4.7.2 HERSTELLUNG POLYKLONALER VANA-UGASE ANTIKOERPER
.32
4.8 WESTERN BLOT.33
4.9 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNS.34
4.9.1 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNS AUS E. COLI IM KLEINEN MASSSTAB
.34
4.9.2 ISOLIERUNG VON PLASMID-DNS AUS E. COLI IM MITTLEREN MASSSTAB
.35
4.10 ISOLIERUNG CHROMOSOMALER DNS AUS ENTEROKOKKEN-STAEMMEN.36
4.11 POLYMERASE KETTEN REAKTION (PCR).36
4.12 SPALTUNG VON DNS MITTELS RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN.36
4.13 HORIZONTALE GELELEKTROPHORESE.37
4.14 AUFREINIGUNG VON DNS-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN.37
4.15 AUFREINIGUNG VON PCR-FRAGMENTEN.38
4.16 LIGATION VON PCR-FRAGMENTEN.38
4.16.1 KLONIERUNGSVEKTOR
. 38
4.16.2 YYSHUTTLE "-VEKTOREN
.38
4.17 TRANSFORMATION.39
4.17.1 HERSTELLUNG CACH-KOMPETENTER E. COLI-ZELLEN
.39
4.17.2 TRANSFORMATION CACL
2
-KOMPETENTER E. COLI-ZELLEN.39
4.17.3 HERSTELLUNG ELEKTROKOMPETENTER ENTEROKOKKEN-ZELLEN
.39
4.17.4 TRANSFORMATION ELEKTROKOMPETENTER ENTEROKOKKEN-ZELLEN
.39
4.18 SOUTHERN BLOT-ANALYSE.40
4.19 MARKIERUNG DER SONDE, HYBRIDISIERUNG UND ENTWICKLUNG DES BLOTS.40
4.20 NORTHERN BLOT-ANALYSE.41
4.20.1 RNA GELELEKTROPHORESE
.41
4.20.2 BLOTTEN DER RNA
.42
4.21 SEQUENZIERUNG.42
4.21.1 UCOR-SEQUENZIERUNG
.42
4.21.2 ABL-SEQUENZIERUNG
.43
4.22 TRANSPOSONMUTAGENESE.43
4.22.1 IN VITRO-FILTERKONJUGATION
.R.43
4.22.2 SELEKTION DER TRANSKONJUGANTEN
.44
4.22.3 INVERSE PCR
.44
4.22.4MARKIERUNG DER PENICILLIN-BINDEPROTEINE MIT F H]PENICILLIN
.44
4.23 SEQUENZANALYSEN.45
4.24 VERWENDETE COMPUTERPROGRAMME.45
5. ERGEBNISSE.46
5.1 EINFLUSS VON FLAVOPHOSPHOLIPOL UND VANCOMYCIN AUF DEN KONJUGATIVEN
TRANSFER VON
VANCOMYCIN-RESISTENZ-PLASMIDEN.46
INHALTSVERZEICHNIS
5.1.1 CHARAKTERISIERUNG DER DONORSTAEMME UND DES REZIPIENTEN
.46
5.1.2 EINFLUSS VON FPL AUF DIE UEBERTRAGUNGSRATE VON KONJUGATIVEN VANA-
PLASMIDEN
.41
5.1.3 EINFLUSS VON VANCOMYCIN AUF DIE TRANSFERRATE VON KONJUGATIVEN
VANA- PLASMIDEN
.50
5.1.4 GENOMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER TRANSKONJUGANTEN-KLONE
.50
5.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR INDUKTION DES VA/M-OPERONS DURCH ANTIBIOTIKA UND
UMWELTFAKTOREN.53
5.2.1 HERSTELLUNG EINES POLYKLONALEN VANA-LIGASE ANTIKOERPERS
.53
5.2.2 NACHWEIS DES VANA-LIGASE PROTEINS DURCH VANA-LIGASE ANTIKOERPER
.55
5.3 TRANSPOSONMUTAGENESE ZUR IDENTIFIZIERUNG DER PUTATIVEN
FPL-RESISTENZDETERMINANTE IN
E. FAECIUM
.61
5.3.1 LN VITRO-FILTERKONJUGATION
.61
5.3.2 SELEKTION DER TRANSKONJUGANTEN
.61
5.3.3 GENETISCHE CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTEN
.61
5.3.4 CHARAKTERISIERUNG DER TN916 INSERTIONSSTELLEN UND DER
FLANKIERENDEN CHROMOSOMALEN
SEQUENZEN
.62
5.3.5 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER MUTANTEN
. .66
5.3.6 SEQUENZVERGLEICHE DES THREONYL-TRNA SYNTHETASE GENS UND DES
PENICILLIN-BINDEPROTEIN GENS
ZWISCHEN E. FAECIUM UND E. FAECALIS
.68
5.3.7 VERSUCHE ZUR KOMPLEMENTATION DES FPU-PHAENOTYPS
.68
5.3.8 TRANSKRIPTIONSANALYSE DES PENICILLIN-BINDEPROTEINS
.69
5.3.9 PENICILLIN-BINDEPROTEIN STUDIEN MIT FH]PENICILLIN
.70
5.3.10 SEQUENZANALYSEN BEI EINEM FPU UND FPU STAMMPAAR
.71
5.4 VERSUCHE ZUR UEBERTRAGBARKEIT DER FPL-RESISTENZDETERMINANTE ZWISCHEN
FPL-
RESISTENTEN UND FPL-SENSITIVEN
E. FAECIUM-STAEMMEN.73
5.4.1 AUSWAHL DER DONOR-UND REZIPIENTENSTAEMME.73
5.4.2 LN VITRO-FILTERKONJUGATIONSEXPERIMENTE
.73
6. DISKUSSION.75
6.1 EINFLUSS VON FLAVOPHOSPHOLIPOL UND VANCOMYCIN AUF DEN KONJUGATIVEN
TRANSFER VON
VANCOMYCIN-RESISTENZ PLASMIDEN.75
6.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR INDUKTION DES VANA-OPERONS.79
6.3 TRANSPOSONMUTAGENESE ZUR IDENTIFIZIERUNG DER PUTATIVEN
FPL-RESISTENZ-DETERMINANTE
IN
E. FAECIUM.84
6.4 VERSUCHE ZUR UEBERTRAGBARKEIT DER FPL-RESISTENZDETERMINANTE ZWISCHEN
FPL-
RESISTENTEN UND FPL-SENSITIVEN
E. FAECIUM-STAMMEN.91
7. LITERATUR.93
8. ANHANG.108
8.1 SEQUENZEN.108
8.1.1 YYALIGNMENT" EINES 187 BP UMFASSENDEN SEQUENZBEREICHES DER
MUTANTEN.108
8.1.2 INSERTIONSSTELLE VON TN916 IM GEN FUER DIE THREONYL-TRNA SYNTHETASE
.109
INHALTSVERZEICHNIS
8.1.3 YYALIGNMENT" VON 4078 BP (4,1 KB) DES STAMMPAARES E.FAECIUM ATCC
6569, FPL
R(1 IO)/FPLS
(111)
.109
8.2 DENSITOMETR ISCHE AUSWERTUNG.
116
8.3 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.117
8.4 ERKLAERUNGEN.
119
8.5
PUBLIKATIONEN, PRAESENTATIONEN UND BERICHTE.
120
8.6
LEBENSLAUF.
121 |
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| topic_facet | Flavomycin Genregulation Vancomycin Streptococcus faecium Arzneimittelresistenz Hochschulschrift |
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