Expressionsanalyse der DIMBOA-Biosynthese in Zea mays:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
|
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| Beschreibung: | München, Techn. Univ., Diss., 2003 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
SEKUNDAERSTOFLWECHSEL
BEI
PFLANZEN
.
1
1.2
DER
DIMBOA-BIOSYNTHESEWEG
.
2
1.3
EINBINDUNG
IN
DEN
PRIMAERMETABOLISMUS
.
5
1.4
ZIEL
DER
ARBEIT
.
7
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
10
2.1
MATERIAL
UND
BEZUGSQUELLEN
.
10
2.1.1
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
10
2.1.2
E.
CO/I-STAEMME
.
11
2.1.3
PHAGENBANKEN
.
11
2.1.4
PFLANZENMATERIAL
.
11
2.1.5
VERWENDETE
VEKTOREN
.
11
2.1.6
PRIMER
.
12
2.1.7
ANTIKOERPER
.
14
2.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
ARBEITSMETHODEN
.
14
2.2.1
ISOLIERUNG
VON
DNA
.
14
2.2.2
SOUTHERN
ANALYSE
VON
PHAGEN-DNA
AUS
CDNA/GENOMISCHEN
BANKEN
.
14
2.2.3
SEQUENZIERUNGEN
.
15
2.2.4
ISOLIERUNG
VON
RNA
UND
CDNA-SYNTHESE
.
15
2.2.5
PCR
.
16
2.2.6
YYREAL
TIME
PCR
" MIT
DEM
LIGHTCYCLER
.
16
2.2.7
KLONIERUNGEN
.
17
2.2.7.1
KONSTRUKTE
FTLR
HETEROLOGE
EXPRESSION
DES
ZMASA2-PROTEINS
IN
E.
COLI
.
17
2.2.7.2
KONSTRUKTE
FUER
SONDEN
FUER
DIE
IN
S/TA-HYBRIDISIERUNG
.
18
2.3
PROTEINCHEMISCHE
ARBEITSMETHODEN
.
18
2.3.1
GEWINNUNG
VON
HETEROLOG
EXPRIMIERTEN
PROTEINEN
.
18
2.3.2
PROTEINGEWINNUNG
AUS
MAISKEIMLINGEN
.
18
2.3.3
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
19
2.3.4
WESTERN-ANALYSE
.
19
2.4
HISTOLOGISCHE
ARBEITSMETHODEN
.
20
2.4.1
FIXIERUNG
VON
MAISKEIMLINGEN
.
20
2.4.2
TECHNIK
DER
IN
S/FTR-HYBRIDISIERUNG.
20
2.4.2.1
HERSTELLUNG
DER
SONDEN
.
20
2.4.2.2
IN
SRTA-HYBRIDISIERUNG
.
21
2.5
NATURSTOFFANALYSEN
.
23
2.5.1
BENZOXAZINON-FAERBUNG
MIT
EISENCHLORID
.
23
2.5.2
ISOLIERUNG
VON
DIMBOA
UND
HPLC-ANALYSE
.
23
3.
ERGEBNISSE
.
25
3.1
ISOLIERUNG
VON
ANTHRANILATSYNTHASEGENEN
AUS
MAIS
.
25
3.1.1
ISOLIERUNG
DER
CDNA
VON
ZMASAL
UND
ZMASAZ
.
25
3.1.2
ISOLIERUNG
DER
GENOMISCHEN
KLONE
VON
ZMASAL
UND
ZMASAZ
.
26
3.1.3
VERGLEICHENDE
CHARAKTERISIERUNG
VON
ZMASAL
UND
ZMASAZ.
.
32
3.1.4
HETEROLOGE
EXPRESSION
VON
ZMASAZ
.
34
3.2
EXPERIMENTE
AUF
RNA-EBENE
.
34
3.2.1
QUANTITATIVE
REAL
TIME-PCR
MIT
DEM
LIGHTCYCLER
.
34
3.2.1.1
VERWENDETES
PFLANZENMATERIAL
.
34
3.2.1.2
ANALYSE
VON
PRIMAERWURZELN
VON
Z.
MAYS.
.
36
3.2.1.3
ANALYSE
VON
EMBRYONAL
UND
KRONWURZELN
VON
Z.
MAYS
.
37
3.2.1.4
ANALYSE
DER
MUTANTE
IRTL
.
38
3.2.2
IN
S/FU-HYBRIDISIERUNGEN
.
39
3.2.2.1
AUSWAHL
DER
SONDEN
.
40
3.2.2.2
ERGEBNISSE
DER
IN
SIIU-HYBRIDISIERUNGSEXPERIMENTE
.
41
3.3
EXPERIMENTE
AUF
PROTEIN-EBENE
.
44
3.3.1.
WESTEMANALYSE
VON
PRIMAERWURZELN
.
44
3.3.2
DIE
MUTANTE
IRTL
.
45
3.4
EXPERIMENTE
AUF
ENDPRODUKT-EBENE
.
46
3.4.1
DIMBOA-ISOLATION
UND
HPLC-ANALYSE
.
46
3.4.2
BENZOXAZINON-FAERBUNG
.
47
4.
DISKUSSION
.
50
4.1
DIE
A-UNTEREINHEITEN
DER
ANTHRANILATSYNTHASEN
ZMASAL
UND
ZMASAZ
.
50
4.1.1
GENSTRUKTUR
VON
ZMASAL
UND
ZMASAZ.
50
4.1.2
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
A-UNTEREINHEITEN
DER
ANTHRANILATSYNTHASEN
.
51
4.1.3
EXPRESSION
VON
ZMASAL
UND
ZMASAZ
.
56
4.2
TECHNIKEN
DER
EXPRESSIONSANALYSE
UND
IHRE
GRENZEN
.
56
4.2.1
QUANTITATIVE
PCR
.
56
4.2.2
IN
SRTU-HYBRIDISIERUNGEN
.
57
4.3
DIE
DIMBOA-BIOSYNTHESE:
VERTEILUNGSMUSTER
DER
MRNA
UND
PROTEINE
DER
BETEILIGTEN
GENE
UND
DES
ENDPRODUKTS
.
58
4.4
WIRD
DAS
DIMBOA-GLUCOSID
TRANSPORTIERT?
.
61
4.5
DAS
UEBEREINSTIMMENDE
ENTWICKLUNGSPROGRAMM
DER
MAISWURZELN
.
63
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
65
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
67
7.
ANHANG
.
73
DANKSAGUNG
.
74 |
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