Etablierung eines Transposon-Tagging-Systems in transgener Gerste (Hordeum vulgare L.):
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Beschreibung: | 93 S. Ill. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1
ABKUERZUNGEN
4
ZUSAMMENFASSUNG
.
6
EINLEITUNG_
7
1.
SYSTEMATIK
UND
HERKUNFT
DER
GERSTE
.
7
2.
WIRTSCHAFTLICHE
BEDEUTUNG
UND
VERWENDUNG
DER
GERSTE
.
8
3.
GEWEBEKULTUR
UND
TRANSFORMATION
_
9
4.
TRANSPOSON
TAGGING
_
11
5.
ZIEL
DER
ARBEIT
_
.
_
15
MATERIAL
UND
METHODEN
_
17
1.
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
17
2.
PFLANZENANZUCHT
UND
-TRANSFORMATION
_
18
2.1
GERATE
UND
MATERIALIEN
.
18
2.2
SONSTIGE
GERATE
.
19
3.
PLASMIDE
_
19
4.
KONSTRUKTE
FUER
DIE
ETABLIERUNG
DES
ZWEI-KOMPONENTEN-SYSTEMS:
.20
5.
VERWENDETE
BAKTERIENSTAEMME
UND
ANZUCHT
.
22
6.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
_
23
6.1
HERSTELLUNG
ELEKTROKOMPETENTER
ZELLEN
UND
TRANSFORMATION
.
23
6.1.1
E.COH:
.23
6.1
2.
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS:
.
23
6.2
TRANSFORMATION
VON
AGROBACTENUM
UEBER
TRI-PARENTAL
MATING
.
24
6.3
PRAPARATION
VON
DNA
.
25
6.3.1
E.COH:
.
25
6.3.2
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS:
.25
6.3.3
PFLANZEN
.
26
6.4
SOUTHERN
BLOT-HYBRIDISIERUNG
.
26
6.5
PCR
.
28
6
6
SEQUENZIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
29
6.7
ANALYSE
DER
UEBERGAENGE
ZWISCHEN
T-DNA
UND
PFLANZEN-DNA
.
29
7.
HERSTELLUNG
TRANSFORMIERTER
GERSTE-PFLANZEN
_
32
7.1
PFLANZENMATERIAL
.
32
7.1.1
UNTRANSFORMIERTE
PFLANZEN
(SPENDERPFLANZEN)
.
32
7.1.2
ANZUCHT
DER
SPENDERPFLANZEN
.
32
7.1.3
TRANSFORMIERTE
PFLANZEN
.
34
INHALTSVERZEICHNIS
2
7.2
ERNTE
UND
ISOLIERUNG
UNREIFER
GERSTEN-EMBYONEN
.
34
7.3
TRANSFORMATION
MITTELS
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS
.
35
7.3.1
VORBEREITUNG
DER
BAKTERIEN
.
35
7.3.2
TRANSFORMATION
VON
GERSTEN-EMBRYONEN
MIT
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS
.
35
7.4
GEWEBEKULTUR
.
36
7.4.1
MEDIEN
FUER
DIE
KULTUR
DER
EMBRYONEN
.
36
7.4.2
WEITERE
KULTUR
DEREMBYRONEN
.
37
8.
ANALYSE
TRANSGENER
PFLANZEN
_
38
8
1
GUS
HISTOCHEMISCHE
FAERBUNG.
38
8.2
"
BASTA"-SPRUEHTEST
.
39
ERGEBNISSE
_
40
1.
GEWEBEKULTUR
UND
TRANSFORMATION
_
40
1
1
SPEZIFISCHER
NACHWEIS
VON
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS
.
40
1.2
ZERSTOERUNG
DER
KEIMACHSE
.
42
1.3
ETABLIERUNG
DER
TRANSFORMATION
MITTELS
AGROBACTENUM
TUMEFACIENS
.
43
2.
ETABLIERUNG
DER
TRANSFORMATIONS-METHODE
_
47
2.1
DAS
BAR-GEN
ALS
SELEKTIONS-MARKER
.
;
.
47
2.2
GUS
ALS
REPORTER-GEN
.
48
2.3
VERWUNDUNG
DURCH
PARTIKEL-BESCHUSS
.
49
2.4
IST
PARTIKEL-BESCHUSS
NOTWENDIG?
.
50
2
5
VAKUUM-INFILTRATION
.
51
3.
ANALYSE
DER
MIT
PDM805
TRANSFORMIERTEN
PFLANZEN.
_
57
3.1
GUS-FAERBUNG
.
57
3.2
ANALYSE
DURCH
SOUTHERN
BLOT
.
58
3.3
ANALYSE
DER
T-DNA-INTEGRATIONSSTELLEN
.
64
4.
TRANSFORMATION
DES
ZWEI-KOMPONENTEN-SYSTEMS
UND
ANALYSE
DES
TRANSGENEN
GEWEBES
.
_.66
4.1
EN/SPM
ALS
MOLEKULARES
WERKZEUG
.
66
4.2
KLONIERUNG
DER
KONSTRUKTE
FUER
DAS
ZWEI-KOMPONENTEN-SYSTEM
.
67
4.2.1
AKTIVIERBARE
KOMPONENTE:
NICHT-AUTONOMES
ELEMENT
DSPM/EN
16078
.
68
4.2.2
EXCISIONS-REPORTER
35S/6078GUS-BAR
.
70
4.2.3
AKTIVATOR-KOMPONENTE:
CWEN/SPM
.
71
4.2
4
AUTONOMES
ELEMENT:
EN/SPM
.
71
4.3
BASTA-TEST
FUER
PFLANZEN
MIT
INSERTION
VON
CWEN
UND
AUTONOMEN
EN
.
74
4
4
PCR-FOOTPRINT-ANALYSE
.
77
DISKUSSION
_
79
1.
ETABLIERUNG
DER
TRANSFORMATIONSMETHODE
_
79
1.1.
VORAUSSETZUNGEN
UND
GEGEBENHEITEN
FUER
GEWEBEKULTUR
UND
TRANSFORMATION
.
79
INHALTSVERZEICHNIS
3
1.2
AGROTRANSFER
VERSUS
PARTICLE
BOMBARDMENT
.
81
1.3
T-DNA-TRANSFER
UND
KONSEQUENZEN
FILR
DIE
KLONIERUNG
DER
KONSTRUKTE
.
82
1.4
KLONIERUNG
DER
KONSTRUKTE
FILR
DAS
SUPER-BINAERE
HYBRID
VEKTOREYSTEM
.
84
1.5
ERMITTLUNG
EINER
EFFIZIENTEN
TRANSFORMATIONS-METHODE
.
85
1.5.1
VERWUNDUNG
DER
EMBYRONEN
DURCH
PARTIKELBESCHUSS
.85
1.5.2
VAKUUM-INFILTRATION
UND
VERWUNDUNG
DER
EMBRYONEN
.
86
1.6
NACHWEIS
VON
AGROBACTENUM
UEBER
FAERBEREAKTION
.
87
1.7.
ANALYSE
DER
PFLANZEN
MIT
KONSTUKTEN
FILR
CWEN
UND
EN
.
88
LITERATUR
_
89 |
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