Markerfreie transplastome Tabakpflanzen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
|
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| Beschreibung: | München, Univ., Diss., 2003 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
EINLEITUNG
.
3
1.1
DIE
PLASTIDENTRANSFORMATION
IN
HOEHEREN
PFLANZEN
.
3
1.2
VISUELLE
MARKER
IN
DER
PFLANZENTRANSFORMATION
.
7
1.3
DELETION
UND
REKONSTITUTION
EINES
PLASTIDAEREN
GENS
.
10
1.4
MARKERFREIE
PLASTIDENTRANSFORMANTEN
.
12
MATERIAL
UND
METHODEN
.
18
2.1
BIOCHEMIKALIEN,
ENZYME
.
18
2.2
DNA,
ORGANISMEN
.
19
2.3
GERAETE,
VERBRAUCHSMATERIAL,
SOFTWARE
.
20
2.4
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
PLASMIDE
.
20
2.4.1
ALLGEMEINE
METHODEN
.
20
2.4.2
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
.
20
2.4.3
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
21
2.4.4
DNA-SEQUENZIERUNG
.
23
2.4.5
KLONIERUNG
DER
TRANSFORMATIONSVEKTOREN
.
23
2.5
CHLOROPLASTEN-TRANSFORMATION
.
26
2.5.1
IN
VITRO-KULTUR
VON
TABAKPFLANZEN
.
26
2.5.2
,PARTICLE
GUN
'
-TRANSFORMATION
VON
TABAK-BLAETTERN
.
26
2.5.3
PEG-TRANSFORMATION
VON
PROTOPLASTEN
.
28
2.5.4
,PARTICLE
GUN
'
-TRANSFORMATION
VON
MIKROKOLONIEN
.
31
2.6
SELEKTION
PLASTIDAERER
TRANSFONNANTEN
.
31
2.6.1
SELEKTION
MIT
SPEKTINOMYCIN/STREPTOMYCIN
.
32
2.6
2
SELEKTION
MIT
KANAMYCIN
.
32
2.6.3
KANAMYCIN-UNTERSTUETZTE
PHOTOSYNTHESE-SELEKTION.
33
2.6.4
MIXOTROPHE
SELEKTIONSBEDINGUNGEN.
33
2.7
ANALYSE
POTENTIELLER
PLASTIDENTRANSFORMANTEN
.
33
2.7.1
ALLGEMEINE
METHODEN
.
33
2.7.2
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
TABAKPFLANZEN
.
34
2.7.3
PCR-ANALYSE
.
35
2.7.4
SOUTHERN-ANALYSE
.
35
2.7.5
EXPRESSIONSSTUDIEN
DES
APHA-6-GENS
.
36
2.7.6
EXPRESSIONSNACHWEIS
DES
UIDA-GENS
.
36
2.7.7
DETEKTION
STARKER
CHLOROPHYLL-FLUORESZENZ
.
37
INHALTSVERZEICHNIS
II
ERGEBNISSE
.
38
3.1
MIKROKOLONIEN
ALS
ZIELGEWEBE
FUER
DIE
PLASTIDENTRANSFORMATION
.
38
3.1.1
,PARTICLE
GUN
'
-BESCHUSS
VON
MIKROKOLONIEN
.
38
3.1.2
ANALYSE
SPEKTINOMYCIN-RESISTENTER
REGENERATE
.
41
3.2
ETABLIERUNG
DES
APHA-6-GENS
ALS
PLASTIDAERER
MARKER
.
41
3.2.1
KLONIERUNG
VON
VEKTOREN
MIT
DEM
APHA-6-GEN
ALS
SELEKTIONSMARKER
.
41
3.3.2
BESTIMMUNG
DER
KANAMYCIN-SELEKTIONSBEDINGUNGEN
.
42
3.2.3
SELEKTION
KANAMYCIN-RESISTENTER
REGENERATE
.
42
3.2.4
ANALYSE
KANAMYCIN-RESISTENTER
REGENERATE
.
45
3.2.5
EXPRESSION
DES
AP/VL-6-GENS
IN
PLASTIDENTRANSFORMANTEN
.
46
3.2.6
ANALYSE
DER
NACHKOMMEN
(TI)
.
46
3.3
DELETION
UND
REKONSTITUTION
EINES
PLASTIDAEREN
GENS
.
47
3.3.1
DELETION
DES
PETT-GENS
.
47
3.3.2
SAMENPRODUKTION
AUSPEM-DEFIZIENTEN
MUTANTEN
.
50
3.3.3
REKONSTITUTION
DES
PETA-GENS
.
52
3.4
INTEGRATION
DES
TRANSFORMATIONSVEKTORS
UEBER
EINE
FLANKE
.
57
3.5
HERSTELLUNG
MARKER-FREIER
PLASTIDENTRANSFORMANTEN
.
61
3.5.1
REKONSTITUTION
VON
APELA
-MUTANTEN
UNTER
MIXOTROPHEN
SELEKTIONS
BEDINGUNGEN
.
61
3.5.2
REKONSTITUTION
VON
APEM-MUTANTEN
MIT
HILFE
EINER
KOMBINIERTEN
KANAMYCIN/PHOTOSYNTHESE-SELEKTION.
64
DISKUSSION
.
69
4.1
DAS
APM-6-GEN
ALS
NEUER
EFFIZIENTER
PLASTIDAERER
SELEKTIONSMARKER
IN
HOEHEREN
PFLANZEN
.
69
4.2
DELETION
UND
REKONSTITUTION
DES
PLASTIDAEREN
PETA-GENS
.
72
4.3
NEUE
ERKENNTNISSE
UEBER
DIE
REKOMBINATION
IN
CHLOROPLASTEN
.
76
4.4
MIXOTROPHE
BEDINGUNGEN
ZUR
SELEKTION
PLASTIDAERER
TRANSFORMANTEN
.
78
4.5
HERSTELLUNGMARKERFFEIER
PLASTIDENTRANSFORMANTEN
.
80
4.5.1
VERBREITUNG
VON
TRANSGENEN
.
80
4.5.2
MARKERFREIE
CHLOROPLASTEN-TRANSFORMANTEN
.
83
LITERATURVERZEICHNIS
.
88
ANHANG
.
106
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
.
106
TABELLENVERZEICHNIS
.
106
LEBENSLAUF
.
107
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
107
DANKSAGUNG
.
108 |
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