Modulation von Aktivität und Selektivität heterolog exprimierter spannungsabhaengiger Natriumkanaele durch extrazelluläre Natrium- und Kalziumionen:
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2003
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INHALTSUEBERSICHT
1 EINLEITUNG.1
1.1 FAMILIE DER SPANNUNGSABHAENGIGEN
NA-KANAELE_._. 2
1.2 PRIMAERSTRUKTUR DER
NA-KANAELE.
4
1.2.1 KANALPROTEINKOMPLEX.4
1.2.2 A-UNTEREINHEITEN.5
1.2.3 PORE UND PERMEATION.6
1.2.4 SPANNUNGSSENSOREN.7
1.2.5 INAKTIVIERUNG.8
1.2.6 NEUROTOXINE.9
1.3 REGULATION DER
NA-KANAELE.
10
1.3.1 SS-UNTEREINHEITEN.10
1.3.2 SYMPATHISCHE STIMULATION UND G-PROTEINVERMITTELTE
KANALREGULATION.10
1.3.2.1 EFFEKTE VON PHOSPHORYLIERUNGEN AUF DIE SELEKTIVITAET.13
1.3.3 MECHANISCHE STIMULATION.14
1.3.4 VERAENDERUNG DER SCHALT- UND PERMEATIONSEIGENSCHAFTEN DURCH
KATIONEN.14
1.4
AUFGABENSTELLUNG.
17
1.4.1 REGULATION DER SELEKTIVITAET DURCH SYMPATHISCHE STIMULATION
(SLIP-MODE-PERMEATION)L 7
1.4.2 QUANTITATIVE BESCHREIBUNG DER STROMAENDERUNG DURCH MECHANISCHEN
STRESS.17
1.4.3 BEEINFLUSSUNG DER STROMAMPLITUDE DURCH EXTRAZELLULAERE IONEN.17
2 MATERIAL UND METHODEN.19
2.1
MOLEKULARBIOLOGIE.
2.1.1 DNS UND RNS DER NA-KANAELE.
2.1.2 VERWENDETE ZELLLINIEN UND KULTUR.
2.1.3 TRANSFEKTIONSMETHODEN.
2.1.4 OOZYTENPRAEPARATION UND -INJEKTION.
2.1.5 ZELLLYSATE, PROTEINGELE UND WESTEMBLOTS.
2.1.6 AUFREINIGUNG VON KAVEOLEN UND IMMUNOPRAEZIPITATION
2.2 ELEKTROPHYSIOLOGISCHE MESSMETHODEN.
2.2.1 GANZZELL-PATCH-CLAMP-MESSUNGEN.
2.2.1.1 GERAETE, MATERIALIEN UND SOFTWARE.
19
19
19
20
20
21
22
23
23
23
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.2.1.2 PERFUSIONSSYSTEM.25
2.2.1.3 LOESUNGEN.26
2.2.2 ZWEI-ELEKTRODEN-SPANNUNGSKLEMME.28
2.2.2.1 GERAETE, MATERIALIEN UND SOFTWARE.28
22
.
2.2
LOESUNGEN.28
2.2.3 SELEKTIVITAETSBESTIMMUNG MIT HILFE DES UMKEHRPOTENTIALS.28
2.2.4 BESTIMMUNG DER INAKTIVIERUNGSZEITKONSTANTE.31
2.2.5 MICHAELIS-MENTEN-BEZIEHUNGEN.31
2.2.6 NICHTSTATIONAERE RAUSCHANALYSE.32
2.3
ELEKTRONENMIKROSKOPIE.33
2.3.1 GEFFIERBRUCHTECHNIK.33
2.3.2 ULTRADUENNSCHNITT-ELEKTRONENMIKROSKOPIE VON IN EPOXYDHARZ
EINGEBETTETEN
HERZMUSKELBIOPSIEN.34
2.3.3 IMMUNZYTOLOGISCHE ELEKTRONENMIKROSKOPIE.34
3 ERGEBNISSE.36
3.1 SLIP-MODE-PERMEATION DURCH HNA
V1.5.
36
3.2 AUSWIRKUNG VON MECHANISCHER STIMULATION AUF DIE STROMAMPLITUDE DURCH
RNA
V1.4_40
3.2.1 QUANTITATIVE BESCHREIBUNG DER STROMAMPLITUDENABNAHME.40
3.2.2 KAVEOLEN.45
3.2.2.1 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER KAVEOLENNACHWEIS.46
3.2.2.2 KANALDETEKTION IN AUFGEREINIGTEN KAVEOLEN.46
3.2.2.3 IMMUNZYTOLOGISCHER NA-KANALNACHWEIS IN KAVEOLEN.49
3.3 EINFLUSS VON EXTRAZELLULAEREN DIVALENTEN KATIONEN AUF DEN
AUSWAERTSSTROM DURCH
NA-KANAELE.51
3.3.1 EINFLUSS VON [CA
2+]A UND [MG2+]A AUF DEN NA+-AUSWAERTSSTROM DURCH HNAV1.5.52
3.3.1.1 REGULATION DES HNA
VL .5-AUSWAERTSSTROMS DURCH [CA2+]A.53
3.3.1.2 VERGLEICH DER REGULATION DES HNA
VL.5-AUSWAERTSSTROMS DURCH [CA2+]AUND [MG2+]A.57
3.3.1.3 NICHTSTATIONAERE RAUSCHANALYSEN VON HNA
V 1.5.60
3.3.2 REGULATION DES RNA
V1.4-AUSWAERTSSTROMS DURCH [CA2+]A UND [MG2+]A.64
3.3.3 REGULATION DES RNA
V1.2-AUSWAERTSSTROMS DURCH [CA2+]A.66
3.3.4 SCHALTVORGAENGE.67
3.3.5 EINFLUSS DER PORENSTRUKTUR AUF DIE AMPLITUDENMODULATION DURCH [CA
2+]A.68
3.3.6 NICHTINAKTIVIERENDE STROMKOMPONENTE.70
3.3.6.1 ABHAENGIGKEIT VON [CA
2+]A.71
3.3.6.2 ZEITABHAENGIGKEIT.72
3.3.
6
.
3 WIRKUNG VON TTX
.
73
4 DISKUSSION.75
4.1
SLIP-MODE-PERMEATION.75
4.2 AMPLITUDENREDUKTION NACH MECHANISCHER STIMULATION VON RNA
V1.4. 79
4.3 REGULATION DER AUSWAERTSSTROMAMPLITUDE DURCH HNA
V1.5, RNAV1.4 UND RNAV1.2
DURCH EXTRAZELLULAERE DIVALENTE
KATIONEN.
85
4.3.1 NICHTINAKTIVIERENDE STROMKOMPONENTE.91
5 SCHLUSSFOLGERUNGEN.93
6 LITERATUR.36
7 ANHANG.I |
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