Zelluläre Mechanismen der Reningenregulation:
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Regensburg
2003
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS.4
1 EINLEITUNG.8
1.1 RENIN- ANGIOTENSIN- ALDOSTERON SYSTEM.8
1.2 DIE JUXTAGLOMERULAERE ZELLE.9
1.3 RENIN.10
1.4 RENINSEKRETION.11
1.5 REGULATION DER RENINSEKRETION.13
1.5.1 PHYSIOLOGISCHE REGULATION DER REININSEKRETION.13
1.5.1.1 SALZHAUSHALT.13
1.5.1.2 BLUTDRUCK BZW. RENALER PERFUSIONSDRUCK.14
1.5.1.3 SYMPATHISCHE NERVENSYSTEM.15
1.5.1.4 ANGIOTENSIN II.15
1.5.1.5 ALDOSTERON.15
1.5.1.6 LOKAL WIRKENDE SUBSTANZEN.17
1.5.1.6.1 STICKSTOFFMONOXID (NO).17
1.5.1.6.2 PROSTAGLANDINE.18
1.5.1.6.3 TUMORNEKROSEFAKTOR A.18
1.5.1.6.4 TRANSFORMING GROWTH FACTOR- BETA.18
1.5.2 ZELLULAERE REGULATION DER RENINSEKRETION.20
1.5.2.1 KALZIUM UND PROTEINKINASE C.20
1.5.2.2 CAMP.22
1.5.2.3 CGMP.22
1.5.3 REGULATION DES RENINGENS. 23
1.5.3.1 TRANKRIPTIONELLE REGULATION.24
1.5.3.1.1 PROXIMAL REGULATORISCHE SEQUENZEN.24
1.5.3.1.2 DISTALE REGULATORISCHE SEQUENZEN (ENHANCER).24
1.5.3.1.3 SILENCER ELEMENTE.25
1.5.3.2 POSTTRANSKRIPTIONELLE REGULATION.26
1.6 FRAGESTELLUNG.27
2 MATERIAL UND METHODEN.28
2.1 MATERIAL.28
4
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/967680743
INHALTSVERZEICHNIS
2.1.1 PLASMIDE.28
2.1.2 OLIGONUKLEOTIDE.30
2.1.3 INTEMETDIENSTE UND SOFTWARE.31
2.1.4 MEDIEN, PUFFER UND LOESUNGEN.32
2.1.5 ENZYME, CHEMIKALIEN UND VERBRAUCHSMATERIAL.34
2.1.6 GERAETE.36
2.2 METHODEN.37
2.2.1 KUTIVIERUNG VON ORGANISMEN UND EUKARIONTISCHEN ZELLKULTUREN.37
2.2.1.1 ANZUCHT VON
E. COLI BAKTERIEN.37
2.2.1.2 ANZUCHT UND KULTIVIERUNG DER AS4.1 ZELLEN.37
2.2.1.3 ISOLATION UND KULTIVIERUNG VON NATIVEN JUXTAGLOMERULAEREN
ZELLEN.37
2.2.2 GENTECHNISCHE METHODEN.38
2.2.2.1 ELUTION VON DNA AUS AGAFOSEGELEN.38
2.2.2.2 PLASMIDPRAEPERATION AUS E. COLI.39
2.2.2.3 ISOLATION VON GENOMISCHER DNA AUS EUKARIONTISCHEN ZELLEN.39
2.2.2.4 DNA-SEQUENZANALYSE.39
2.2.2.5 ISOLATION VON GESAMT-RNA AUS EUKARYONTISCHEN ZELLEN.39
2.2.2.6 EINZELSTRANG CDNA SYNTHESE.40
2.2.2.7 POLYMERASEKETTENREAKTION.40
2.2.2.8 IN VITRO TRANSKRIPTION.40
2
.
2
.
1.9 QUANTITATIVE POLYMERASEKETTENREAKTION.41
2.2.2.10 RNASE^PROTECTION ASSAY.41
2.2.2.11 GERICHTETER BASENAUSTAUSCH.42
2.2.2.12 ERSTELLEN VON DELETIONSKONSTUKTEN.43
2.2.2.13 GELSHIFT ASSAY.43
2.2.3 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN. 43
2.2.3.1 PROTEINBESTIMMUNG.43
2.2.3.2 PROTEINEXTRAKT AUS AS4.1 ZELLEN.44
2.2.3.3 PRAEPERATION VON KEMEXTRAKTEN.44
2.2.3.4 AUFTRENNUNG VON PROTEINEN.44
2.2.3.5 WESTERN BLOT ANALYSE.45
2.2.4 CAMP KONZENTRATIONSBESTIMMUNG.45
2.2.5 BESTIMMUNG DES RENINGEHALTS.45
5
INHALTSVERZEICHNIS
2.2.6 ISOLIERT PERFUNDIERTE NIERE.46
2.2.7 STATISTIK.47
3 ERGEBNISSE. 48
3.1 WIRKUNGSWEISE DES CAMP AUF DIE RENINGENEXPRESSION.48
3.1.1 CAMP KONZENTRATION IN AS4.1 ZELLEN.48
3.1.2 RENIN MRNA KONZENTRATION UND PRORENIN- SEKRETION.50
3.1.3 PROTEINKINASE A. 53
3.1.4 RENIN MRNA STABILITAET.54
3.1.5 RENINGENTRANSKRIPTION.55
3.1.6 CRE- BINDENDES PROTEIN.61
3.2 EINFLUSS UND WIRKUNGSWEISE VON ALDOSTERON AUF DIE RENIN MRNA.65
3.2.1 EXPRESSION DES MINERALOKORTICOID- REZEPTORS IN JUXTA-GLOMERULAEREN
ZELLEN.66
3.2.2 WIRKUNG VON ALDOSTERON AUF DIE MAUS JG- ZELLEN IN PRIMAERKULTUR.67
3.2.3 WIRKUNG VON ALDOSTERON AUF DIE JUXTAGLOMERULAERE ZELLLINE AS4.1.69
3.2.4 MECHANISMUS DER ALDOSTERONWIRKUNG AUF DIE RENINGEN EXPRESSION.73
3.2.5 INTERAKTION ZWISCHEN DEM ALDOSTERON- UND DEM CAMP SIGNALWEG.75
3.2.6 WIRKUNG VON ALDOSTERON AUF DIE RENINSEKRETION IN DER ISOLIERT
PERFUNDIERTEN NIERE.77
3.3 EINFLUSS VON TGF-SSL UND TGF-SSH AUF DIE RENINGEN EXPRESSION.79
3.3.1 EXPRESSION DER REZEPTOREN TGF-SSL UND TGF-SSLL IN JG-ZELLEN IN
VITRO. 80
3.3.2 DIE WIRKUNG VON TGF-SSL UND TGF-SSLL AUF AS4.1 ZELLEN UND NATIVE JG-
ZELLEN.81
3.3.3 DIE WIRKUNG VON TGF-SSL UND TGF-SSLL AUF DIE RENINGEN- EXPRESSION .
85
3.3.4 INTERAKTION ZWISCHEN TGF-SSL/ TGF-SSLL UND DEM CAMP SIGNALWEG.86
4 DISKUSSION. 87
4.1 DIE WIRKUNG VON CAMP AUF DIE EXPRESSION DES RENINGENS.87
4.2 .DER DIREKTE EINFLUSS VON ALDOSTERON AUF DIE EXPRESSION DES
RENINGENS UND
DIE RENINSEKRETION.92
4.3 EINFLUSS VON TGF-SSL UND TGF-SSLL AUF DIE RENINGENEXPRESSION UND
RENINSEKRETION.96
5 ZUSAMMENFASSUNG.99
6 LITERATURVERZEICHNIS.101
6
INHALTSVERZEICHNIS
7 ANHANG. 116
7.1 PUBLIKATIONEN. 116
7.2 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.117
7.3 DANKSAGUNG.118
7 |
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