Chorion-Gonadotropin-abhängige Regulation von Angiogenesefaktoren in humanen Granulosazellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Freiburg (Breisgau), Univ., Diss., 2002 (Nur beschränkt für den Austausch) |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG: 1
1.1. ANGIOGENESE UND IHRE KLINISCHE RELEVANZ 1
1.2. DER ENTWICKLUNGSPROZESS DES FOLLIKELS UND DER OVARIALZYKLUS 4
1.2.1. DIE FOLLIKELPHASE 4
1.2.2. OVULATION 6
1.2.3. DAS CORPUS LUTEUM 6
1.3. HUMANES CHORION GONADOTROPIN UND SEIN WIRKUNGSMECHANISMUS
AUF GRANULOSAZELLEN 7
1.4. ANGIOGENESE IM OVAR 9
1.4.1. ANGIOGENESE IN DER FOLLIKELPHASE - 9
1.4.2. ANGIOGENESE IM CORPUS LUTEUM 10
1.5. WACHSTUMSFAKTOREN UND ZYTOKINE, DIE AN DEN REGULATIONSMECHANISMEN
DER
ANGIOGENENSE BETEILIGT SEIN KOENNEN 11
1.5.1. TISSUE INHIBITOR OF METALLOPROTEINASE-1 (TIMP-1) 11
1.5.2. LEPTIN 12
1.5.3. INTERLEUKIN-8 (IL-8) 13
1.5.4. CONNECTIVE TISSUE GROWTH FACTOR (CTGF) 14
1.5.5. MAC25/ IGFBP-7/ IGFBP-RP-1/ ANGIOMODULIN 15
1.5.6. BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR (BFGF) 16
1.5.7. MIDKINE (MK) 17
1.6. FRAGESTELLUNG UND ZIELSETZUNG DER ARBEIT 18
2. PATIENTINNEN, MATERIAL UND METHODEN 19
2.1. PATIENTINNEN 19
2.2. PROGESTERON BESTIMMUNG 19
2.3. METHODE ZUR BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION IM
ZELLKULTURUEBERSTAND 19
2.4. ZELLKULTUR FUER HUMANE GRANULOSAZELLEN (GC) 20
2.5. INDUKTION DER GC IN KULTUR 21
2.6. RNA- ISOLIERUNG 21
2.7. REVERSE TRANSKRIPTASE- POLYMERASE KETTEN REAKTION (RT-PCR) 22
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2.7.1. REVERSE TRANSKRIPTASE REAKTION 22
2.7.2. POLYMERASE KETTEN REAKTION 22
2.7.2.1. STANDARD PCR- BEDINGUNGEN 23
2.7.2.2. ZYKLER PROGRAMM DER PCR- REAKTION 23
2.7.2.3. PRIMER SEQUENZEN 25
2.7.2.4. DARSTELLUNG DER AMPLIFIKATIONSPRODUKTE VON PCR- REAKTIONEN 2 7
2.7.2.5. DENSITOMETRISCHE A USWERTUNG DER PCR- A MPLIFIKATE (SEMI-
QUANTIFIZIERUNG) 2 7
2.8. DOT- BLOT/ MEMBRANHYBRIDISIERUNG MIT MARKIERTEM RADIOISOTOP (
32 P) 27
2.8.1. VORBEREITUNG DER RT-PCR PRODUKTE UND DER DOT- BLOT MEMBRAN 28
2.8.2. HERSTELLUNG DER CDNA- SONDE MIT RADIOISOTOP MARKIERUNG
(RADIOAKTIVE
MARKIERUNG) 28
2.8.3. HYBRIDISIERUNGSREAKTION 29
2.8.4. AUTORADIOGRAPHIE 30
2.9. WESTERN BLOT ANALYSE 30
2.9.1. VORBEREITUNG DER PROTEIN ENTHALTENDEN LOESUNGEN 3 0
2.9.2. SDS- POLYACRYLAMID- GELELEKTROPHORESEN (SDS- PAGE) 31
2.9.3. ELEKTROTRANSFER DES PROTEINS AUF DIE PVDF MEMBRAN 32
2.9.4. COOMASIE- FAERBUNG VON PROTEINEN 33
2.9.5. IMMUNODETEKTION VON CTGF MIT ANTI- CTGF ANTIKOERPER 34
2.10. BESTIMMUNG DER STRUKTUR EINES ZWEITEN RT-PCR PRODUKT VON MAC25/
IGFBP-7 35
2.10.1. EXTRAHIEREN VON DNA AUS AGAROSE GELEN 35
2.10.2. KLONIERUNG VON DNA FRAGMENTEN IN DEN VEKTOR PCR 2.1-TOPO 35
2.10.3. ISOLIERUNG DER PLASMID- DNA VON DEN TRANSFIZIERTEN BAKTERIEN 37
2.10.3.1. PLASMID DNA MINIPRAEPARATION 3 7
2.10.3.2. RESTRIKTIONSVERDAU DER PLASMID DNA 38
2.10.4. ANALYSE DER STRUKTUR DER ZU UNTERSUCHENDEN DNA SEQUENZ 38
2.10.4.1. RESTRIKTIONSENDONUCLEASE 3 8
2.10.4.2. SEQUENZREAKTION 3 8
2.11. SONSTIGES MATERIAL 39
2.12. METHODEN DER AUSWERTUNG UND STATISTIK 3 9
N
3. ERGEBNISSE: 40
3.1. VITALITAETSTEST DER GC IN KULTUR 40
3.1.1. MORPHOLOGISCHE KONTROLLE 40
3.1.2. PROGESTERON PRODUKTION VON ZELLPROBEN 41
3.1.3. GAPDH- EXPRESSION VON ZELLPROBEN 41
3.2. EINFLUSS VON HCG AUF DIE TIMP-1 PRODUKTION IN GC 42
3.2.1. TIMP-1 PRODUKTION IN GC AUF MRNA EBENE 42
3.2.2. TIMP-1 PRODUKTION IN GC AUF PROTEIN EBENE 44
3.3. EINFLUSS VON HCG AUF DIE LEPTIN PRODUKTION IN GC 45
3.3.1. LEPTIN PRODUKTION IN GC AUF MRNA EBENE 45
3.3.2. LEPTIN PRODUKTION IN GC AUF PROTEIN EBENE 46
3.4. EINFLUSS VON HCG AUF DIE IL-8 PRODUKTION IN GC 47
3.4.1. IL-8 PRODUKTION IN GC AUF MRNA EBENE 47
3.4.2. IL-8 PRODUKTION IN GC AUF PROTEIN EBENE 49
3.5.
EINFLUSS
VON HCG AUF DIE CTGF PRODUKTION IN GC AUF MRNA EBENE 49
3.6. EINFLUSS VON HCG AUF DIE MAC25 PRODUKTION IN GC 51
3.7. EINFLUSS VON HCG AUF DIE BASIC FIBROBLAST
GROWTH FACTOR (BFGF) PRODUKTION IN GC 53
3.8. EINFLUSS VON HCG AUF DIE MIDKINE PRODUKTION IN GC 54
3.9. EINFLUSS VON PROGESTERON AUF DIE CTGF PRODUKTION IN GC
KULTUR AUF MRNA EBENE * 56
3.10. ERGEBNIS DER UNTERSUCHUNG DES ZWEITEN AMPLIFIKATIONSPRODUKTES
BEI DER PCR- ANALYSE VON MAC25/ IGFBP-7 57
3.10.1. KLONIERUNG DES AMPLIFIKATIONSPRODUKTES IN DIE E.COLI BAKTERIEN
57
3.10.2. UNTERSUCHUNG DER DNA STRUKTUR DES ZU UNTERSUCHENDEN FRAGMENTS 58
3.10.2.1. RESTRIKTIONSANALYSE DURCH RESTRIKTIONSENZYM BGLL 58
3.10.2.2. A NALYSE DURCH SEQUENZREAKTION 60
3.10.3. UNTERSUCHUNG ZUR EXPRESSION DER NEU ENTDECKTEN SPLICEVARIANTE
DES MAC25/ IGFBP-7 GENS IN TUMORZELLLINIEN 63
4. DISKUSSION 65
4.1. FAKTOREN, DIE SICH SIGNIFIKANT DURCH HCG REGULIEREN LASSEN 66
4.1.1. EINFLUSS VON HCG AUF DIE TIMP-1 PRODUKTION IN GC 66
III
4.1.2. EINFLUSS VON HCG AUF DIE CTGF PRODUKTION IN GC 68
4.1.3. EINFLUSS VON HCG AUF DIE MAC25 PRODUKTION IN GC 71
4.2. FAKTOREN, DIE SICH NICHT DURCH HCG REGULIEREN LASSEN 73
4.2.1. INTERLEUKIN-8 PRODUKTION IN GC 73
4.2.2. EINFLUSS VON HCG AUF DIE LEPTIN PRODUKTION IN GC 74
4.2.3. BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR (BFGF) PRODUKTION IN GC 75
4.2.4. MIDKINE PRODUKTION IN GC 76
4.3. DISKUSSION UEBER DIE ENTDECKUNG EINER NEUEN SPLICEVARIANTE
VON MAC25/IGFBP-7/IGFBP-RP-1 GEN 76
5. ZUSAMMENFASSUNG 80
6. LITERATUR 81
7. DANKSAGUNG 95
IV |
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