Peptidbindung Melanom-assoziierter Tumorantigene und In-vitro-Stimulierung Antigen-spezifischer CD4 positiver T-Zellen:
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2002
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DISSERTATION
SA
SKIA
KRAOIWNIKOW
SEITE
3
INHALTSVERZEICHNIS
EINLEITUNG.
1
1.1
K
LINIK
UND
P
ROGNOSE
DES
MALIGNEN
M
ELANOMS
.YY.YY.YYYY.
-
YY.
--------------------------
7
1.2
THERAPIE
DES
MALIGNEN
MELANOMSYYYYYYYY
-
-
-
.YYYYYY
-
YY.
-
YY.YY.
-
-
YY.
8
1.2.1
E
TABLIERTE
T
HERAPIEVERFAHREN
.
8
1.2.2
I
MMUNTHERAPEUTISCHE
B
EHANDLUNGSKONZEPTE
.
9
1.3
W
IE
T
UMOREN
DER
I
MMUNABWEHR
ENTKOMMEN
-
YYYY
-
YY
-
YY
-
-
YYYYYYYYYY
-
*
-
-
11
1.4
D
IE
R
OLLE
DENDRITISCHER
Z
ELLEN
BEI
DER
A
BWEHR
VON
T
UMOREN
YY
-
-
12
1.5
D
IE
B
EDEUTUNG
VON
T-H
ELFERZELLEN
-
-
-----------------
-------------
-
-------------
14
1.6
D
IE
M
OLEK
O
LE
DES
H
AUPTHISTOKOMPATIBILITAETSKOMPLEXES
(MHC)
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
14
1.6.1
ANTIGENPROZESSIERUNO
UND
-PRAESENTATION
.
14
1.6.2
D
IE
G
ENE
DES
H
AUPTHISTOKOMPATTBILITAETSKOMPLEXES
.
15
1.6.3
D
IE
B
INDUNG
ANTIGENER
P
EPTIDE
AN
MHC
K
LASSE
-H-P
ROTEINE
.
18
1.7
T
UMORANTIGENE
_
_
.
_
-
_
_
.20
1.7.1
D
EFINITION
.
20
1.7.2
MHC
K
LASSE
-H
RESTRINGIERTE
M
ELANOMANTIGENE
.
20
1.8
F
RAGESTELLUNG
23
2
MATERIAL
UND
METHODEN,
24
2.1
A
BKUERZUNGSVERZEICHNIS
------------------------------------------------------------------------------------------
24
2.2
H
AEUFIG
VERWENDETE
P
UFFER
UND
L
OESUNGEN
-
_
.
-
.
_
.
.
26
2.3
DNA-E
XTRAKTION
-
S
CHNELLMETHODE
FUER
DIE
HLA-T
YPISIERUNG
_
_
_
28
2.3.1
P
HOTOMETRISCHE
B
ESTIMMUNG
VON
K
ONZENTRATION
UND
R
EINHEITSGRAD
DER
DNA
.
29
2.4
HLA-DR-T
YPISIERUNG
NACH
DER
PCR-SSP-M
ETHODE
IN
2.4.1
A
GAROSEGEL
-E
LEKTROPHORESE
.
31
2.4.2
A
USWERTUNG
.
31
2.5
KULTIVIERUNG
DER
ZELLLINIEN.
_
.
_
33
2.6
M
ONOZYTENISOLIERUNG
AUS
PERIPHEREM
B
LUT
YY.YY.
_
.
_
.
_
_
33
2.7
PBMC/
T
-Z
ELL
-I
SOLIERUNG
-
_
-
_
-
_
YYYY
-
.
_
33
2.8
G
ENERIERUNG
VON
DENDRITISCHEN
Z
ELLEN
(M
O
DZ)
AUS
M
ONOZYTEN
2.9
I
MMUNOLOGISCHE
F
AERBUNGEN
F
O
R
DIE
D
URCHFLUSSZYTOMETRIE
.
2.9.1
A
NWENDUNG
.
34
SEITE
4
2.9.2
D
URCHFUEHRUNG
.
35
2.10
D
URCHFLUSSZYTOMETRISCHE
A
NALYSE
.
,
.
36
2.10.1
P
RINZIP
DER
D
URCHFLUSSZYTOMETRIE
(FACS-A
NALYSE
)
.
36
2.10.2
S
ETTINGS
.
37
2.10.3
A
USWERTUNG
DER
FACS-D
ATEN
.
38
2.11
P
EPTIDE
.
.
30
2.11.1
P
EPTIDE
DES
P
ROTEINS
T
YROSINASE
.
39
2.11.2
P
EPTIDE
DER
P
ROTEINS
MAGE-3
.
40
2.12
B
INDUNGSSTUDIEN
_
_
_
.
.
40
2.12.1
T
YROSINASE
221-235
.
40
2.12.2
MAGE-3
NI-ISS
UND
MAGE-3
.
40
2.13
T-Z
ELL
-P
ROPAGATION
42
2.13.1
A
LLGEMEINES
.
42
2.13.2
S
TIMULIEREN
.
43
2.13.3
S
PEZIFITAETSTESTUNG
.
43
2.14
IFN-Y-ELISPOT
.
_
_
_
_
.
44
2.14.1
D
URCHFUEHRUNG
.
45
2.14.2
DARSTELLUNG
.
46
2.15
^VERSUCHSPERSONEN
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
47
2.16
STATISTIKHIHTUTUMMHHAITHHLMHMFHTMHHHHTMHHMMAIMAHHMKHTMTMXMMHMMMMTLMMMMMWIMHTMMIAWWAHHMH
47
2.17
B
EZUGSQUELLEN
FUER
V
ERBRAUCHSMATERIALIEN
.
_
47
3
ERGEBNISSE
3.1
I
DENTIFIZIERUNG
VON
HLA-DR
RESTRINGIERTEN
M
ELANOM
-
ASSOZIIERTEN
A
NTIGENEN
.,
SI
3.1.1
TYROSINASE
.
51
3.1.2
MAGE-3
.
52
3.1.3
P
HAENOTYP
VON
M
ONOZYTEN
.
54
3.1.4
A
UFREGULIERUNG
VON
HLA-DR
AUF
M
O
DC
WAEHREND
DER
A
USDIFFERENZIERUNG
UND
R
EIFUNG
56
3.1.5
M
ORPHOLOGISCHE
V
ERAENDERUNGEN
WAEHREND
DER
A
USDIFFERENZIERUNG
VON
M
ONOZYTEN
ZU
M
O
DC
.
57
3.1.6
P
HAENOTYP
VON
REIFEN
MODC
.
58
3.1.7
HLA-T
YPISIERUNG
DER
S
PENDER
.
58
3.1.8
B
INDUNG
VON
M
ELANOMPEPTIDEN
AN
APC
VON
S
PENDERN
UNTERSCHIEDLICHER
HLA-DR-H
APLOTYPEN
.
62
32
A
KTIVIERUNG
UND
P
ROPAGATION
M
ELANOMANTIGEN
-
SPEZIFISCHER
T-H
ELFERZELLEN
._
72
3.2.1
ALLGEMEINES
.
72
3.2.2
P
HAENOTYP
VON
T-Z
ELLPOPULATIONEN
.
72
3.2.3
MAGE-3
A
NTIGEN
-
SPEZIFISCHE
T-Z
ELLEN
LASSEN
SICH
W
VITRO
DURCH
WOECHENTLICHE
R
ESTIMULIERUNG
MIT
A
NTIGEN
-
BELADENEN
MODC
IN
DER
T-Z
ELLPOPULATION
ANREICHERN
.
74
3.2.4
MAGE-3
I7
|.|U
UND
MAGE-3
IS4.UO
INDUZIEREN
BEIM
GLEICHEN
SPENDER
UNTERSCHIEDLICH
STARKE
T-ZELLANTWORTEN
.
78
3.2.5
MAGE-3
171
.
1U
STIMULIERT
T-ZELLEN
UNTERSCHIEDLICHSTER
SPENDER,
DIE
STIMULIERUNG
DURCH
MAGE-3
1
S4-170
IST
ABHAENGIG
VOM
HLA-DR-HAPLOTYP
.
80
3.2.6
D
ER
G
RAD
AN
D
IFFERENZIERUNG
UND
R
EIFUNG
DER
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
HAT
EINEN
EINFLUSS
AUF
DIE
T-ZELLANTWORT
.
82
3.2.7
D
IE
A
KTIVIERUNG
VON
T-Z
ELLEN
EINES
S
PENDERS
MIT
MAGE-3
I
7
I
-
I
M
UND
MAGE-3
I
TL
.I
AS
KORRELIERT
MIT
DER
STAERKE
DER
BINDUNG
DES
JEWEILIGEN
PEPTIDS
AN
DIE
APC
.
84
4
DISKUSSION
---------------------------------------------------------------------------------------------------------------
86
4.1
W
AHL
DER
A
NTIGEN
-
PRAESENTIERENDEN
Z
ELLEN
.
87
4.2
DIE
A
LLELFREQUENZEN
VON
HLA-DR
DER
VON
UNS
UNTERSUCHTEN
S
PENDER
ENTSPRECHEN
WEITGEHEND
DER
VERTEILUNG
IN
DER
NORMALBEVOELKERUNG
_
89
43
DIE
B
INDUNG
DER
M
ELANOM
-P
EPTIDE
AN
APC
IST
EINE
G
RUNDVORAUSSETZUNG
FUER
EINE
ERFOLGREICHE
T-Z
ELL
-A
NTWORT
.
.
,
.
.
,
U
,,OI
4.4
D
IE
ELISPOT-M
ETHODE
IST
GEEIGNET
,
UM
GERINGE
F
REQUENZEN
SPEZIFISCHER
TL
YMPHOZYTEN
ZU
DETEKTIEREN
_
_
_
_
.92
4.5
BEI
DER
S
TIMULIERUNG
CD4
POSITIVER
T-H
ELFERZELLEN
MUSS
ZWISCHEN
EINER
T
H
1
UND
EINER
T
H
2-ANTWORT
UNTERSCHIEDEN
WERDEN
.
,
,
,
YY9-1
4.6
N
UR
REIFE
M
O
DC
SIND
POTENT
GENUG
,
EINE
PRIMAERE
T-Z
ELL
-A
NTWORT
CD4
POSITIVER
T-H
ELFERZELLEN
AUSZULOESEN
.
_
_
_
_
_
.
95
4.7
MAGE-3
I
7
|.
)U
STIMULIERT
T-ZELLEN
ALLER
SPENDER,
DIE
ANTWORT
AUF
MAGE-3
U*.
17
,
IST
ABHAENGIG
VOM
HLA-DR-H
A
PLOTYP
_
_
JIJT
INFASSUNG,
SEITE
6
^_SJXEB^XUBXBZIIC0AEJMUUTTSASSUUSUNU2UCAIUUUUUUNHISUITTUMUUIUSUSTMASSUUUWUIAWUAM^
7
ANHANG
YY22222XSX2TL222TS&TS&&&ST2TTLX2TTTTTTTSUS2UI2S&S2SSSTTB128BBTTLTSTTSSTT2TTSTTTTTT2SSSTTXTSTTTL8TTTTTTT2TTTTKTT^TT2TTTTTX2S&L9L
7.1
D
ANKSAGUNG
_
_
_
109
7.2
V
EROEFFENTLICHUNGEN
UND
P
REISE
.
.
._.
._.YYYYYY
-
YY.
_
_
111
73
LEBENSLAUF
.
FEHLER!
TEXTMARKE
NICHT
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