Tissue Factor im akuten Koronarsyndrom: Molekulare Mechanismen und klinische Bedeutung
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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| Beschreibung: | 124 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG 7
1.1. GERINNUNGSAKTIVIERUNG DURCH TISSUE FACTOR 7
1.2. TISSUE FACTOR EXPRESSION 9
1.3. REGULATIONSMECHANISMEN DER TISSUE FACTOR AKTIVITAET 10
1.4. ZELLAKTIVIERUNG DURCH BINDUNG VON FVIIA AN TISSUE FACTOR 11
1.5. TISSUE FACTOR IM ARTERIOSKLEROTISCHEN PLAQUE UND DER NEOINTIMA 14
1.6. SYSTEMISCH PROKOAGULATORISCHE AKTIVITAET IM AKUTEN KORONARSYSNDROM
15
1.7. FRAGESTELLUNGEN 17
2. MATERIALIEN UND METHODEN 19
2.1 REAGENZIEN 19
2.2 VERBRAUCHSMATERIALIEN UND GERAETE 23
2.3 ZELLISOLATION UND ZIELLINIEN 24
2.3.1 ECV304-ZELLEN 24
2.3.2 J82-ZELLEN 24
2.3.3 CHINESISCHE HAMSTEROVARZELLEN 24
2.3.4 EMBRYONALE MAUSFIBROBLASTEN 25
2.3.5 NABELSCHNURENDOTHELZELLEN 25
2.3.6 KORONARE GLATTE MUSKELZELLEN 25
2.3.7 LEUKOZYTEN 25
2.3.7.1 UNFRAKTIONIERTE LEUKOZYTEN 25
2.3.7.2 MONONUKLEAERE ZELLSUSPENSIONEN 25
2.4 KLONIEREN EINES GLYKOSYLPHOSPHATIDYLINOSITOL-VERANKERTEN TFPI-1 26
2.5 DURCHFLUSSZYTOMETRIE 26
2.6 MESSUNG DER PROKOAGULATORISCHEN AKTIVITAET 26
2.7 Y EAST-TWO-HYBRID-SCREENING 27
2.8 BIACORE INTERAKTIONSANALYSE 28
2.9 AFFINITAETSPRAEZIPITATION VON ABP-280 MIT REKOMBINANTEM TF 28
2.10 TRANSFEKTIONEN 28
2.11 PHOSPHORYLIERUNG DER FOKALEN ADHAESIONSKINASE 28
2.12 MITOGEN-AKTIVIERTE KINASEN ASSAY 29
2.13 RAC AKTIVIERUNGSASSAY 29
2.14 WESTERN BLOTTING 29
2.15 ADHAESIONSASSAY 30
2.16 MIGRATIONSASSAY 30
2.17 IMMUNFLUORESZENZ 31
2.18 IMMUNOASSAYS 31
2.19 RNA-PRAEPARATION, REVERSE TRANSKRIPTION UND POLYMERASEKETTENREAKTION
31
2.20 TRITON X-114-FRAKTIONIERUNG 32
2.21 PROTEASENSENSITIVITAET 32
2.22 SACCHAROSEGRADIENTENZENTRIFUGATION 33
2.23 STATISTIK 33
4
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.
ERGEBNISSE
34
3.1 TISSUE FACTOR UND ZELLAKTIVIERUNG 34
3.1.1 BEDEUTUNG DER TISSUE FACTOR EXPRESSION FUER DIE ZELLFUNKTION 34
3.1.1.1 ZELLADHAESION UND -AUSBREITUNG 35
3.1.1.2 ZELLMIGRATION 39
3.1.2 INTERAKION DER ZYTOPLASMATISCHEN DOMAENE VON TISSUE FACTOR
MIT DEM AKTIN BINDENDEN PROTEIN-280 47
3.1.2.1 YEAST-TWO-HYBRID-SYSTEM 47
3.1.2.2 PRAEZIPITATION DES AKTIN-BINDENDEN PROTEIN-280 MIT REKOMBINANTEM
TISSUE FACTOR 49
3.1.2.3 BINDUNG VON ISOLIERTEM AKTIN-BINDENDEN PROTEIN-280 AN ISOLIERTEN
TISSUE FACTOR 49
3.1.2.4 LOKALISATION VON AKTIN-BINDENDEN PROTEIN-280 IN TISSUE FACTOR
VERMITTELTEN ADHAESIONSKONTAKTEN 50
3.1.3 AKTIVIERUNG VON SIGNALTRANSDUKTIONSKASKADEN 52
3.1.3.1 FOKALE ADHAESIONSKINASE 53
3.1.3.2 P38 MITOGEN-AKTIVIERTE KINASE 54
3.1.3.3 RHO GTP-ASEN RAC UND CDC42 56
3.1.4 DISKUSSION 61
3.2 REGULATION DER TISSUE FACTOR AKTIVITAET DURCH
TISSUE FACTOR PATHWAY INHIBITOR 66
3.2.1 BINDUNGSSTELLEN FUER REKOMBINANTEN TFPI-1 UND ENDOGENEN TFPI-1 66
3.2.2 DIE HEMMIMG DER TISSUE FACTOR AKTIVITAET DURCH ENDOGENEN
TFPI-1 IST REVERSIBEL 68
3.2.3 GLYKOSYLPHOSPHATIDYLINOSITOL-VERANKERTER TFPI-1 IST AUSREICHEND
FUER EINE
LOKALISATION IN DETERGENZ-UNLOESLICHEN MIKRODOMAENEN 70
3.2.4 UEBEREXPRESSION VON TFPI-1 IN ECV304-ZELLEN 72
3.2.5 DISKUSSION 73
3.3 TISSUE FACTOR EXPRESSION IM AKTUEN MYOKARDINFARKT 78
3.3.1 TISSUE FACTOR UND TFPI-1 EXPRESSION AUF ZIRKULIERENDEN MONOZYTEN
78
3.3.2 FUNKTIONELLE KONSEQUENZEN DER TISSUE FACTOR UND TFPI-1 EXPRESSION
82
3.3.3 BINDUNGSSTELLEN FUER TFPI-1 AUF MONOZYTEN 84
3.3.4 WIRKUNG VON FIBRINOLYTIKA 84
3.3.5 GESTEIGERTE TISSUE FACTOR AKTIVITAET AUF ZIRKULIERENDEN
MIKROPARTIKELN NACH THROMBOLYSE 87
3.3.6 DISKUSSION 89
5
4. ZUSAMMENFASSENDE DISKUSSION 94
5. ZUSAMMENFASSUNG 102
6. LITERATURVERZEICHNIS 105
7. ABKUERZUNGEN 123
6 |
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