Expressionsanalysen zu den Pathomechanismen der chronisch lymphatischen Leukämie vom B-Zell-Typ und des Mantelzellenlymphoms:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Heidelberg
[Selbstverl.]
2003
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| Beschreibung: | Zugl.: Tübingen, Univ., Diss., 2003 |
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EXPRESSIONSANALYSEN
ZU
DEN
PATHOMECHANISMEN
DER
B-CLL
UND
DES
MCL
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
.
4
1.1
DAS
IMMUNSYSTEM
.
4
1.2
B-ZELLEN
UND
LYMPHOME
.
4
1.3
NON-HODGKIN-LYMPHOME
.
6
1.3.1
B-CLL
UND
MCL
.
6
1.3.2
B-CLL
.
7
1.3.3
MCL
.
8
1.4
MODERNE
TECHNIKEN
.
8
1.4.1
REAL-TIME
QUANTITATIVE
REVERSE
TRANSCRIPTION
PCR
(RQ-PCR)
.
9
1.4.2
CDN
A-MIKROARRAYS
.
10
1.5
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
.
11
1.5.1
ERLAEUTERUNGEN
ZUR
QUANTITATIVEN
RNA-EXPRESSIONSSTUDIE
.
12
1.5.2
ERLAEUTERUNGEN
ZUR
MUTATIONSANALYSE
.
13
2
MATERIAL
.
14
2.1
CHEMIKALIEN
UND
REAGENZIEN
.
14
2.2
ENZYME
UND
ANTIKOERPER
.
16
2.3
VEKTOREN
.
16
2.4
E.
CO/Z-STAMM
.
17
2.5
KITS
.
17
2.6
ZELLKULTUR
.
17
2.7
VERBRAUCHSMATERIAL
.
18
2.8
GERAETE
.
18
2.9
ZELLINIEN
.
19
2.10 KLONE
UND
HYBRIDISIERUNGSFILTER
.
20
2.11
OLIGONUKLEOTIDE
.
20
2.11.1
SEQUENZEN
DER
PRIMER
.
20
2.11.2
SEQUENZEN
DER
PRIMER
UND
SONDEN
DER
RQ-PCR-EXPERIMENTE
.
21
2.12
PUFFER
UND
LOESUNGEN
(ALLGEMEIN)
.
22
2.13
PUFFER
UND
LOESUNGEN
DER
WESTERN
BLOT
EXPERIMENTE
.
23
2.14
PUFFER
UND
LOESUNGEN
DER
MIKROARRAY-EXPERIMENTE
.
24
2.15
MEDIEN
UND
ANTIBIOTIKA
.
24
3
PATIENTEN
UND
KONTROLLEN
.
26
3.1
MUTATIONSANALYSE,
RQ-PCR-STUDIE
UND
WESTERN
BLOT-EXPERIMENTE
.
26
3.2
MIKROARRAY-EXPERIMENTE
.
27
3.3
HERKUNFT
UND
CHARAKTERISIERUNG
DES
PATIENTENMATERIALS
.
27
4
METHODEN
.
28
4.1
ZELLKULTUR
.
28
4.2
ALLGEMEINE
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
28
4.2.1
ELEKTROPHORESE
VON
NUKLEINSAEUREN
.
28
4.2.2
NUKLEINSAEURE-QUANTIFIZIERUNG
DURCH
SPEKTROSKOPISCHE
MESSUNGEN
.
29
4.2.3
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
30
4.2.4
SCREENING
EINER
BAC-BIBLIOTHEK
.
30
4.2.5
ANZUCHT
VON
BAKTERIEN
.
31
4.2.6
DNA
PRAEPARATION
AUS
PLASMIDEN
.
31
4.2.7
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
.
31
4.2.8
POLYMERASE
KETTENREAKTION
.
32
4.2.9
KOLONIE-PCR
.
33
4.2.10
AUFREINIGUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
.
33
EXPRESSIONSANALYSEN
ZU
DEN
PATHOMECHANISMEN
DER
B-CLL
UND
DES
MCL
INHALTSVERZEICHNIS
4.2.11
KLONIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
.
34
4.2.12
SEQUENZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
34
4.2.13
SEQUENZINFORMATIONEN
ONLINE
.
35
4.2.14
RNA-EXTRAKTION
AUS
ZELLEN
.
35
4.2.15
DNA-EXTRAKTION
.
37
4.2.16
MRNA-EXTRAKTION
.
37
4.2.17
DESOXYRIBONUKLEASE-VERDAU
.
38
4.2.18
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
38
4.3
RQ-PCR
.
39
4.3.1
ANWENDUNG
DER
RQ-PCR
.
39
4.3.2
PRIMER
UND
TAQMAN
SONDEN
.
39
4.3.3
NORMALISIERUNG
DER
DATEN
.
40
4.3.4
STATISTISCHE
DATENANALYSE
.
41
4.4
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
.
43
4.4.1
EXTRAKTION
VON
PROTEINEN
.
43
4.4.2
PROTEINBESTIMMUNG
.
43
4.4.3
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
44
4.4.4
WESTERN
BLOT
.
44
4.4.5
ANTIKOERPERDETEKTION
AM
WESTERN
BLOT
.
45
4.4.6
QUANTITATIVE
AUSWERTUNGSVERFAHREN
DER
DETEKTIERTEN
WESTERN
BLOTS
.46
4.5
METHODEN
ZUR
CDNA-MIKROARRAY-TECHNOLOGIE
.
47
4.5.1
KLONSAMMLUNG
.
47
4.5.2
AUSWAHLKRITERIEN
FUER
CDNA-KLONE
.
47
4.5.3
KOLONIE-PCR
(VON
CDNA-KLONEN)
.
47
4.5.4
UEBERPRUEFUNG
DER
KOLONIE-PCR-PRODUKTE
.
48
4.5.5
VORBEREITUNG
DER
CDNA
.
48
4.5.6
AUFBRINGEN
DER
CDNA
AUF
DIE
OBJEKTTRAEGER
(SPOTTING)
.
49
4.5.7
VORBEREITUNG
DER
MIKROARRAYS
ZUR
HYBRIDISIERUNG
.
50
4.5.8
MARKIERUNG
DER
MRNA
DURCH
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
50
4.5.9
AUFREINIGUNG
DER
MARKIERTEN
CDNA
.
51
4.5.10
HYBRIDISIERUNG
DER
MIKROARRAYS
.
52
4.5.11
DETEKTION
DER
FLUORESZENZSIGNALE
.
52
4.5.12
AUSWERTUNG
DER
MIKROARRAY-DATEN
.
53
4.5.13
STATISTISCHE
METHODEN
.
55
5
ERGEBNISSE
.
58
5.1
RQ-PCR
.
58
5.1.1
RNA-EXTRAKTION
.
58
5.1.2
DNASE-VERDAU
.
58
5.1.3
PRIMERQUALITAET
.
59
5.1.4
EICHGERADEN
.60
5.1.5
RQ-PCR-STUDIE
.
60
5.2
WESTERN
BLOT-EXPERIMENTE
.
67
5.2.1
PROTEINBESTIMMUNG
.
67
5.2.2
WESTERN
BLOT-STUDIE
.
67
5.3
MIKROARRAY-EXPERIMENTE
.
75
5.3.1
AUSWAHL
DER
GENE
.
75
5.3.2
EINFLUSS
VON
RNA-EXTRAKTIONSMETHODEN
.
75
5.3.3
QUALITAETSUEBERPRUEFUNG
DER
RNA
.
77
5.3.4
MIKROARRAY-STUDIE
.
78
5.3.5
STATISTISCHE
ANALYSE
.
81
5.3.6
VERIFIZIERUNG
DER
(YYSIGNATUR
"
-)GENE
AUS
RQ-PCR-STUDIE
UND
LITERATUR
.
92
EXPRESSIONSANALYSEN
ZU
DEN
PATHOMECHANISMEN
DER
B-CLL
UND
DES
MCL
INHALTSVERZEICHNIS
5.4
MUTATIONSANALYSE
DES
GENS
TNFRSF
1
OB
IN
MCL-PATIENTEN
.
93
5.4.1
IDENTIFIZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINES TNFRSF
1
OB-POSITIVEN
B
AC-KLONS
.
93
5.4.2
MUTATIONSANALYSE
AM
TNFRSFIOB-GEN
.
95
6
DISKUSSION
.
99
6.1
UNTERSCHIEDLICHE
PATHOMECHANISMEN
IN
DER
B-CLL
UND
IM
MCL
.
99
6.1.1
TP53UNDATM
.
101
6.1.2
VERMINDERTE
APOPTOSEINDUKTION
IN
DER
B-CLL
IM
GEGENSATZ
ZUM
MCL
.
101
6.1.3
VERSTAERKTE
ZELLZYKLUSPROGRESSION
IM
MCL
IM
GEGENSATZ
ZUR
B-CLL
.
102
6.1.4
KLASSIFIKATION
VON
B-CLL
UND
MCL
.
103
6.1.5
ETV5,
EIN
NEUES
KANDIDATENGEN
.
103
6.1.6
RESUEMEE
.
104
6.2
KORRELATION
VON
PROTEIN
UND
RNA-EXPRESSION
.
105
6.3
ENTDECKUNG
NEUER
KANDIDATENGENE
IN
DER
B-CLL
UND
IM
MCL
.
107
6.3.1
DIFFERENTIELLE
EXPRESSION
.
109
6.3.2
KLASSIFIZIERUNG
DER
PATIENTENGRUPPEN
.
122
6.3.3
RESUEMEE
.
123
6.4
ANALYSE
EINES
POTENTIELLEN
TUMORSUPPRESSORGENS
.
125
7
ZUSAMMENFASSUNG
.
127
8
V
EROEFFENTLICHUNG
.
130
9
REFERENZEN
.
131
10
ABKUERZUNGEN
.
156
11
ABKUERZUNGEN
WICHTIGER
GENE
(IN
ENGLISCH)
.
159
12
DANKSAGUNG
.
161
13
APPENDIX
.
162
14
LEBENSLAUF
.
165
3 |
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