Untersuchungen zur Assoziation von Chlamydiapneumoniae-Infektionen und Koronarsklerose mittels molekularbilogischer und serologischer Testverfahren:
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2002
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| Beschreibung: | Münster (Westfalen), Univ., Diss., 2002 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG
1.1 TITEL DER ARBEIT
1.2 GRUNDLAGEN UND ZIELE DER VORGELEGTEN UNTERSUCHUNG
2 THEORETISCHE GRUNDLAGEN
2.1 HISTORIE UND KLASSIFIZIERUNG VON CHLAMYDIEN
2.2 CHLAMYDIA PNEUMONIAE
2.2.1 KLASSIFIZIERUNG
2.2.2 EPIDEMIOLOGIE
2.2.3 MORPHOLOGIE UND PHYSIOLOGIE
2.2.4 ENTWICKLUNGSZYKLUS
2.2.5 KLINIK
2.2.6 IMMUNOLOGISCHE ABWEHRMECHANISMEN
2.2.7 PATHOGENESE UND POSTULIERTE ASSOZIATION MIT CHRONISCHEN
ERKRANKUNGEN
2.2.8 DIAGNOSTIK
2.2.9 THERAPIE
2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE DIAGNOSTIK
2.3.1 NUKLEINSAEURE-AMPLIFIKATIONSVERFAHREN
2.3.2 POLYMERASEKETTENREAKTION - PCR
2.4 ZELLKULTUREN
2.5 SEROLOGISCHE DIAGNOSTIK
2.5.1 ALLGEMEINES
2.5.2 ENZYMIMMUNOASSAY
2.5.3 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ
2.6 ARTERIOSKLEROSE
2.6.1 DEFINITIONEN
2.6.2 PATHOGENESE
2.7 KORONARE ENDARTERIEKTOMIE
2.7.1 PRINZIP DER ENDARTERIEKTOMIE
3 MATERIAL
3.1 GERAETE
3.2 CHEMIKALIEN, PUFFERLOESUNGEN
1
1
1
2
2
4
4
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6
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14
16
16
17
17
21
24
24
25
25
25
III
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.3 PCR-REAGENZIEN 26
3.4 OLIGONUKLEOTID-PRIMER 26
3.5 GELELEKTROPHORESE 27
3.6 SEROLOGIE 28
3.6.1 SEROCP(IGA/ IGG)-KIT VON HAIN - ELISA FUER C.
PNEUMONIAE 28
3.6.2 SEROCT(IGA/ IGG)-KIT VON HAIN - ELISA FUER C.
TRACHOMATIS 28
3.6.3 CHLAMYDIEN-IGA-/ UND -IGG-RELISA-KIT, MEDAC 29
3.6.4 IFT-KIT FUER C. PNEUMONIAE UND C. TRACHOMATIS - VON EUROIMMUN 29
4 METHODIK 30
4.1 PCR-OPTIMIERUNG 30
4.1.1 MAGNESIUMCHLORIDKONZENTRATION 31
4.1.2 ANNEALINGTEMPERATUR 32
4.1.3 PRIMERSTRUKTUR UND -KONZENTRATION 32
4.2 ZELLKULTUREN VON C. PNEUMONIAE 32
4.3 KORONARE ENDARTERIEKTOMIE 33
4.3.1 PATIENTEN 33
4.4 DNA-EXTRAKTION 36
4.4.1 DNA-EXTRAKTION AUS DEN GEWEBEPROBEN 36
4.4.2 DNA-EXTRAKTION AUS EDTA-BLUT 37
4.5 QUALITATIVE UND QUANTITATIVE DNA-BESTIMMUNG 38
4.6 C.
PNEUMONIAE-PCR MIT INTIMAZYLINDER-GEWEBE 39
4.7 GELELEKTROPHORESE 4
4.8 SEROLOGISCHE METHODIK "*1
4.8.1 ELISA-VERFAHREN
41
4.8.2 UNSPEZIFISCHE CHLAMYDIEN-RELISA
42
4.8.3 CHLAMYDIA TRACHOMATISAGA UND -PELISA, MEDAC 45
4.8.4 SEROCP(IGA UND IGG), HAIN
45
4.8.5 SEROCT(IGA UND IGG), HAIN 48
4.8.6 IFT FUER C.
PNEUMONIAE UND C. TRACHOMATIS, EUROIMMUN 49
5 ERGEBNISSE
51
5.1 OPTIMIERUNG DER DNA-EXTRAKTION
51
5.1.1 OPTIMIERUNG DER DNA-AUFREINIGUNG
52
IV
5.2 OPTIMIERUNG DER PCR-BEDINGUNGEN 53
5.2.1 AMPLIFIKATIONSVERSUCHE UNTER STANDARDBEDINGUNGEN 53
5.2.2 OPTIMIERUNG DER MAGNESIUMCHLORIDKONZENTRATION 54
5.2.3 OPTIMIERUNG DER ANNEALINGTEMPERATUR 55
5.2.4 OPTIMIERUNG DER PRIMERKONZENTRATIONEN 56
5.3 BESTIMMUNG DER SENSITIVITAET DER C.
PNEUMONIAE-PCR 57
5.4 EINSATZ DER OPTIMIERTEN
C. PNEUMONIAE-PCR 58
5.4.1 STUDIENPOPULATION 58
5.4.2 C.
PNEUMONIAE-?CR MIT INTIMALYSATEN 62
5.4.3 C.
PNEUMONIAE-PCR MIT LYSATEN MIT GENOMISCHER C. PNEUMONIAE-DNA 65
5.5 CHLAMYDIEN-SEROLOGIE 67
6 DISKUSSION 69
6.1 PCR-OPTIMIERUNG 69
6.1.1 MAGNESIUMCHLORID-KONZENTRATION 69
6.1.2 ANNEALINGTEMPERATUR 70
6.1.3 PRIMERSTRUKTUR UND -KONZENTRATION 70
6.1.4 TEMPLATE-KONZENTRATION 71
6.2 ENDARTERIEKTOMIE 71
6.3 DISKUSSION DER PCR-ERGEBNISSE 72
6.4 DISKUSSION DER SEROLOGIE-ERGEBNISSE 75
6.5 GESAMTBETRACHTUNG 60
7 ZUSAMMENFASSUNG 83
8 LITERATURVERZEICHNIS 84
9 ABKUERZUNGSVERZEICHNIS 94
10 LEBENSLAUF 96
11 DANKSAGUNG 97
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