Einfluss von Glukokortikoiden auf die regulierte Expression des Vascular-endothelial-growth-Factors (VEGF, VPF) durch den transformierenden Wachstumsfaktor-alpha (TGF-a) und den Hepatozytenwachstumsfaktor (HGF, SF) in kultivierten Keratinozyten:
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
5
1.1
BEDEUTUNG
DER
ANGIOGENESE
5
1.2
VEGF/VPF
ALS
ZENTRALER
ANGIOGENESEFAKTOR
DER
HAUT
6
1.2.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISTIKA
VON
VEGF/VPF
7
13
REGULATOREN
DER
VEGF/VPF-EXPRESSION
8
1.3.1
EIGENSCHAFTEN
VON
HGF/SF
8
1.3.2
EIGENSCHAFTEN
VON
TGF-A
9
1.4
GLUKOKORTIKOIDE
ALS
THERAPEUTIKA
IN
ENTZUENDLICHEN
DERMATOSEN
9
1.4.1
CHEMIE
DER
GLUKOKORTIKOIDE
10
1.4.2
GLUKOKORTIKOIDWIRKUNGEN
10
1.4.3
MOLEKULARE
WIRKMECHANISMEN
DER
GLUKOKORTIKOIDE
11
15
INTENTION
DER
STUDIE
11
2
MATERIALIEN
UND
METHODIK
13
2.1 REAGENZIEN
13
2.1.1
HGF/SF
13
2.1.2.
TGF-A
13
2.1.3
ACTINOMYCIND
14
2.1.4
CYCLOHEXIMID
14
2.1.5
HYDROCORTISON
(CORTISOL)
14
2.1.6
DEXAMETHASON
15
2.1.7
CLOBETASOL
15
2.2
ZELLEN
UND
KULTURBEDINGUNGEN
15
2.3 QUANTIFIZIERUNG
VON
VEGF/VPF-PROTEIN
16
2.4
BESTIMMUNG
DER
VEGF/VPF-MRNA
17
2.4.1
RNA-ISOLIERUNG
17
2.4.2
QUANTIFIZIERUNG
DER
GEWONNENEN
RNA
18
2.4.3
HERSTELLUNG
EINES
AGAROSE-FORMALDEHYD-GELS
18
2.4.4
RNA-AUFBEREITUNG
FUER
DIE
GELBESCHICKUNG
19
2.4.5
GELELEKTROPHORESE
19
2.4.6
VORBEREITUNG
DES
GELS
FUER
DEN
NORTHERN
BLOT
19
2A.1
ANFERTIGUNG
DES
NORTHERN
BLOTS
-
20
2.4.8
DNA-SONDENVORBEREITUNG
20
2.4.9
PRAEHYBRIDISIERUNG
DER
MEMBRAN
22
2.4.10
HYBRIDISIERUNG
22
2.4.11
AUTORADIOGRAPHIE
22
23
ANALYSE
DER
VEGF/VPF-MRNA-STABILITAET
23
2.6
PROTOKOLL
ZUR
STIMULIERUNG
DER
ZELLEN
23
2.6.1
VEGF/VPF-PROTEINEXPRESSION
IN
TGF-A-,
HGF/SF
UND
DEXAMETHASON
BEHANDELTEN
HUMANEN
KERATINOZYTEN
UND
HACAT-ZELLEN
23
2.6.2
VEGF/VPF-PROTEINEXPRESSION
IN
HGF/SF
UND
DEXAMETHASON
BEHANDELTEN
ZELLEN
24
2.6.3
VEGF/VPF-MRNA
IN
TGF-A
BZW.
HGF/SF
UND
GLUKOKORTIKOID
BEHANDELTEN
ZELLEN
24
2.6.4
VEGF/VPF-MRNA-STABILITAET
IN
HGF/SF
UND
DEXAMETHASON
BEHANDELTEN
HACAT-ZELLEN
24
2.7
MATERIALIEN
25
3
ERGEBNISSE
27
3.1
INHIBITORISCHE
EFFEKTE
VON
DEXAMETHASON
AUF
DIE
TGF-A-
UND
HGF/SF
INDUZIERTE
VEGF/VPF-PROTEINEXPRESSION
IN
KULTIVIERTEN
KERATINOZYTEN
27
3.2
INHIBITORISCHE
EFFEKTE
VON
GLUKOKORTIKOIDEN
AUF
DIE
TGF-A
UND
HGF/SF
REGULIERTE
VEGF/VPF-MRNA-EXPRESSION
IN
KULTIVIERTEN
KERATINOZYTEN
30
33
DEXAMETHASON
VERRINGERT
DIE
VEGF/VPF-MRNA
HALBWERTSZEIT
IN
HACAT-ZELLEN
33
4
DISKUSSION
37
5
ZUSAMMENFASSUNG
42
6
LITERATURVERZEICHNIS
44 |
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