Die Funktion der Separase bei der Schwesterchromatiden-Trennung in Drosophila melanogaster:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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2002
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INHALTSVERZEICHNIS
_
L
1.
ZUSAMMENFASSUNG
1
2.
SUMMARY
2
3.
EINLEITUNG
3
3.1
DIE
VERBINDUNG
ZWISCHEN
DEN
SCHWESTERCHROMATIDEN
4
33
DIE
AUSBILDUNG
DER
KOHAESION
6
33
DIE
KONDENSATION
DER
MITOTISCHEN
CHROMOSOMEN
6
3.4
DIE
ZENTROMERREGION
UND
DER
KINETOCHORAUFBAU
7
3.5
DER
MITOTISCHE
SPINDELAPPARAT
8
3.6
DIE
MITOTISCHE
SCHWESTERCHROMATIDENTRENNUNG
_
9
3.7
DIE
PROTEINFAMILIE
DER
SEPARASEN
12
3.8
DIE
REGULATION
DER
SEPARASEAKTIVITAET
13
3.9
DIE
SCHWESTERCHROMATIDENTRENNUNG
IN
D.
MELANOGASTER
15
3.10
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
16
4.
MATERIALIEN
UND
METHODEN
17
4.1
STANDARDMETHODEN
17
4.2
OLIGONUKLEOTIDE
17
43
METHODEN
IM
UMGANG
MIT
DROSOPHILA
19
43.1
FLIEGENHALTUNG
19
43.2
FLIEGENSTAEMME
_
20
4.3.3
BALANCIER-CHROMOSOMEN
20
4.3.4
TRANSGENE
LINIEN
UND
DEREN
HERSTELLUNG
_
21
4.3.5
DAS
GAL4/UAS-SYSTEM
22
4.3.6
HERSTELLUNG
NEUER
DEFIZIENZEN
23
4.3.7
MOLEKULARE
CHARAKTERISIERUNG
DES
SSE'
J
"-ALLELS
25
4.3.8
PHAENOTYPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
LARVALER
GEHIRNE
26
4.4
METHODEN
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
DES
SSE-PROTEINS
28
INHALTSVERZEICHNIS
_
H
4.4.1
PROTEINEXPRESSION
EINES
BAKTERIELLEN
SSE-FRAGMENTS
28
4.4.2
AFFINITAETSREINIGUNG
DER
ANTI-SSE-ANTIKOERPER
28
4.4.3
PROTEINGELE
UND
IMMUNOBLOTS
28
4.4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTI-SSE-ANTIKOERPER
29
4.4.5
STABILITAET
DES
SSE-PROTEINS
WAEHREND
DER
EMBRYONALENTWICKLUNG
_
30
4.4.6
KOIMMUNOPRAEZIPITATION
30
4.5
IDENTIFIKATION
VON
PIM-,
THR-
UND
SSE-ORTHOLOGEN
GENEN
30
4.5.1
PIM-ORTHOLOGE
31
4.5.2
SSE-ORTHOLOGE
AUS
D.
WILLISTONI
UND
D.
VIRILIS
32
4.5.3
RAR-ORTHOLOGE
VON
D.
PSEUDOOBSCURA
UND
D.
VIRILIS
_
34
4.6
RNA-AUFREINIGUNG
AUS
VERSCHIEDENEN
DROSOPHILIDEN
34
4.6.1
NORTHEM-BLOT-EXPERIMENT
34
4.6.2
HERSTELLUNG
VON
ERSTSTRANG-CDNA-BIBLIOTHEKEN
35
4.7
TWO-HYBRID-INTERAKTIONSSTUDIEN
_
35
4.7.1
MATCHMAKER
HEFE-TWO-HYBRID-SYSTEM
35
4.7.2
SSE-FRAGMENT
IM
PGBKT7
36
4.7.3
D.
VIRILIS
SSE-FRAGMENT
IM
PGBKT7
36
4.7.4
D.
WILLISTONI
SSE-FRAGMENT
IM
PGBKT7
36
4.7.5
TWO-HYBRID-KONSTRUKTE
AUS
D.
VIRILIS
THR
36
4.7.6
TWO-HYBRID-HSEPARASE-KONSTRUKTE
_
37
4.7.7
TWO-HYBRID-HPTTG-KONSTRUKTE
37
4.7.8
BEREITS
VORHANDENE
TWO-HYBRID-KONSTRUKTE
_
37
4.8
SEQUENZANALYSEN
38
5.
ERGEBNISSE
39
5.1
DROSOPHILA
SSE
UNTERSCHEIDET
SICH
VON
DEN
RESTLICHEN
SEPARASEN
_
39
5.2
SSE
IST
ESSENTIELL
FUER
DIE
SEPARATION
DER
SCHWESTERCHROMATIDEN
_
44
5.2.1
MUTANTE
ALLELE
DES
SSE-GENS
44
5.2.2
SSE
IST
EIN
ESSENTIELLES
GEN
46
5.2.3
BEI
SSE-NULLMUTANTEN
IST
DIE
SEPARATION
DER
SCHWESTERCHROMATIDEN
INHIBIERT
48
5.2.4
EKTOPISCHE
SSE-EXPRESSION
KOMPLEMENTIERT
SSE
'
-PHAENOTYP
50
5.2.5
DIE
PROTEOLYTISCHE
AKTIVITAET
VON
SSE
IST
ESSENTIELL
50
5.3
SEPARASE
IM
KOMPLEX
MIT
PIM
UND
THR
51
5.3.1
SSE
INTERAGIERT
IM
TWO-HYBRID-EXPERIMENT
MIT
PIM
UND
THR
51
5.3.2
ANTI-SSE-ANTIKOERPER
ERKENNEN
ENDOGENES
SSE
52
5.3.3
SSE
INTERAGIERT
IN
VIVO
MIT
PIM
UND
THR
53
5.4
SEPARASE-KOMPLEXE
AUSD.
MELANOGASTER
56
53
SSE-,
THR
UND
PIM-ORTHOLOGE
AUS
WEITEREN
DROSOPHILIDEN
57
5.5.1
SSE-ORTHOLOGE
AUS
ENTFERNT
VERWANDTEN
DROSOPHILIDEN
_
57
5.5.2
THR-ORTHOLOGE
AUS
ENTFERNT
VERWANDTEN
DROSOPHILIDEN
61
5.5.3
PIM-ORTHOLOGE
AUS
NAHE
VERWANDTEN
VON
D.
MELANOGASTER
64
5.6
DIE
THR/SSE-
UND
THR/PIM-INTERAKTION
SIND
KONSERVIERT
66
5.7
DER
HUMANE
SEPARASE-KOMPLEX
ZEIGT
PARALLELEN
ZUM
DROSOPHILA
SEPARASE-KOMPLEX
_
68
5.8
THR
ENTSPRICHT
DEM
N-TERMINALEN
TEIL
DER
SEPARASEN
AUS
ANDEREN
EUKARYOTEN
70
6.
DISKUSSION
73
6.1
SSE
DIVERGIERT
IM
VERGLEICH
ZU
DEN
WEITEREN
SEPARASEN
73
6
2
SSE
IST
NOTWENDIG
FUER
DIE
SEPARATION
DER
SCHWESTERCHROMATIDEN
74
63
MODELL
DER
VERSCHIEDENEN
DROSOPHILA
SEPARASE-KOMPLEXE
78
64
THR
ENTSPRICHT
FUNKTIONELL
DEM
N-TENNINUS
DER
YYGROSSEN
"
SEPARASEN
79
6.5
ORTHOLOGE
PROTEINE
VON
SSE,
THR
UND
PIM
81
6.6
DIE
ARCHITEKTUR
DER
SEPARASE-KOMPLEXE
IST
KONSERVIERT
83
6.7
DIE
AUFSPALTUNG DER
YYGROSSEN
"
SEPARASE
IN
D.
MELANOGASTER
BIETET
ZUSAETZLICHE
REGULATIONSMOEGLICHKEITEN
86
7.
LITERATURVERZEICHNIS
88
8.
ANHANG
95
8.1
SEQUENZEN
DER
SSE-ORTHOLOGEN GENE
AUSD.
VIRILIS
SOWIE
D.
WILUSTONI
95
8.2
SEQUENZEN
DER
TFTR-ORTHOLOGEN
GENE
AUS
D.
PSEUDOOBSCURA
UND
D.
VIRILIS
99
83
SEQUENZEN
DER
PUEN-ORTHOLGEN
GENE
AUS
D.
ERECTA
UND
D.
ORENA
105
8.4
SEQUENZVERGLEICH
DER
SSE-ORTHOLOGEN
MIT
SSE
AUS
A.
GAMBIAE
107 |
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