Eignung der PCR-Typisierung von Legionellen für epidemiologische Fragestellungen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2001
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INHALTSVERZEICHNIS
1. EINLEITUNG.1
2. MATERIAL UND METHODE.8
2.1 VERWENDETE CHEMIKALIEN UND ADRESSEN DER HERSTELLER.8
2.2 ANGABEN ZUR STERILISATION.9
2.3 KULTIVIERUNG VON LEGIONELLEN.9
2.4 HERKUNFT DER LEGIONELLENSTAEMME.11
2.4.1 LEG/B/7E//A-REFERENZSTAEMME.12
2.4.2 HERKUNFT WEITERER LEGIONELLENSTAEMME.13
2.5 PROBENNAHME UND VORBEHANDLUNG. 14
2.6 ISOLIERUNG VON LEGIONELLEN AUS WASSERPROBEN. 15
2.7 SEROLOGISCHE DIFFERENZIERUNG DER LEGIONELLEN. 16
2.7.1 DIREKTER LEG/ONE//A-LMMUNFLUORESZENZ-TEST.16
2.7.2 INDIREKTER IMMUNFLUORESZENZTEST.18
2.8 NACHWEIS VON AMOEBEN IN WASSERPROBEN UND KULTIVIERUNG.18
2.9 DNA-EXTRAKTION. 20
2.9.1 DNA-EXTRAKTION AUS LEGIONELLENKULTUREN.21
2.9.2 DNA-EXTRAKTION AUS DEN WASSERPROBEN.22
2.9.3 BESTIMMUNG DER DNA-KONZENTRATION.23
2.10 ANSAETZE FUER POLYMERASEKETTENREAKTION (PCR).23
2.10.1 TYPISIERUNG VOH LEGIONELLEN MITTELS PCR-FINGERPRINTING.24
2.10.1.1 VERWENDETE PRIMER.24
2.10.1.2 DURCHFUEHRUNG DER PCR.33
2.10.2 NACHWEIS VON LEGIONELLEN MITTELS SPEZIFISCHER PRIMER.26
2.10.2.1 AMPLIFIKATION MIT DEN PRIMERN LPM1 UND LPM2.26
2.10.2.2 AMPLIFIKATION MIT DEN PRIMERN 2669F UND L5SR93.27
2.10.2.3 AMPLIFIKATION MIT DEN PRIMERN GC-104 L UND 316 R.28
2.11 ANALYSE VON PCR-PRODUKTEN. 29
2.11.1 AGAROSEGELELEKTROPHORESE.29
2.11.2 DENATURIERENDE GRADIENTEN GELELEKTROPHORESE (DGGE).30
2.11.2.1 ANGABEN ZUM PROBENMATERIAL.31
2.11.2.2 HERSTELLUNG DES DENATURIERENDEN GRADIENTENGELS.31
2.12 PULSFELDGELELEKTROPHORESE (PFGE).33
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3. ERGEBNISSE.
35
3.1 KLINISCHE UND EPIDEMIOLOGISCHE ANGABEN ZU DEN PATIENTENISOLATEN.
35
3.2 ISOLIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG VON PATIENTEN- UND WASSERISOLATEN.36
3.3 NACHWEIS VON LEGIONELLEN IN VERSCHIEDENEN WASSERSYSTEMEN. 37
3.3.1 VORKOMMEN VON LEGIONELLEN IN EINEM KRANKENHAUS MIT
LEGIONELLOSEN.
44
3.3.2 NACHWEIS VON LEGIONELLEN IM WASSERSYSTEM
WEITERER KRANKENHAEUSER.:.42
3.3.3 NACHWEIS VON LEGIONELLEN IM STADTGEBIET.43
3.4 NACHWEIS VON AMOEBEN IN EINEM KRANKENHAUS MIT NACHGEWIESENEN
LEGIONELLOSEN. 44
3.5 MOLEKULARBIOLOGISCHE TYPISIERUNG VON LEGIONELLEN.47
3.5.1 BEURTEILUNG DER CHELEX-METHODE ZUR DNA-EXTRAKTION.47
3.5.2 TYPISIERUNG DER
L. PNEUMOPHILA SEROGRUPPE 1 REFERENZSTAEMME. 47
3.5.3 TYPISIERUNG EPIDEMIOLOGISCH ASSOZIIERTER BZW. UNABHAENGIGER
LEGIONELLENSTAEMME.59
3.5.3.1 VERGLEICH VERSCHIEDENER TYPISIERUNGSVERFAHREN (PCR-, PFGE-
UND MAB-ANALYSE) BEI EPIDEMIOLOGISCH ASSOZIIERTEN STAEMMEN. 59
3.5.3.2 ZUSAMMENSETZUNG DER LEGIONELLENPOPULATION IM WASSERSYSTEM
EINES KRANKENHAUSES.65
3.5.3.3 TYPISIERUNG VON LEGIONELLENSTAEMMEN AUS DEM WASSERSYSTEM
VON ZAHNAERZTLICHEN BEHANDLUNGSEINHEITEN.70
3.5.3.4 TYPISIERUNG EPIDEMIOLOGISCH UNABHAENGIGER L
PNEUMOPHILA
SEROGRUPPE 1 STAEMME.71
3.5.3.5 TYPISIERUNG EPIDEMIOLOGISCH ASSOZIIERTER UND EPIDEMIOLOGISCH
UNABHAENGIGER L
PNEUMOPHILA SEROGRUPPE 5 STAEMME.74
3.5.4 REPRODUZIERBARKEIT DES PCR-TYPISIERUNGSVER^AHREN.75
3.6 KOMBINIERTE TYPISIERUNG UND IDENTIFIZIERUNG VON L.
PNEUMOPHILA.79
3.7 CHARAKTERISIERUNG VON LEGIONELLEN-SPEZIFISCHEN PCR-AMPLIFIKATEN
MITTELS DENATURIERENDER GRADIENTEN GELELEKTROPHORESE.81
4. DISKUSSION.87
4.1 ZIELSETZUNG MOLEKULARBIOLOGISCHER TYPISIERUNGSVERFAHREN.87
4.2 MEDIZINISCHE RELEVANZ VON LEGIONELLEN.87
4.3 VORKOMMEN VON LEGIONELLEN IN WASSERSYSTEMEN VERSCHIEDENER
KRANKENHAEUSER. 88
4.4 SEROLOGISCHE DIFFERENZIERUNG DER LEGIONELLENSTAEMME.89
4.5 SUBTYPISIERUNG DER LEG/ONE//A-REFERENZSTAEMME UND DER ISOLATE.90
4.5.1 ANGABEN ZUR PCR-TYPISIERUNGSMETHODFE.90
4.5.2 TYPISIERUNG VON L
PNEUMOPHILA SEROGRUPPE 1 STAEMMEN.92
4.5.3 TYPISIERUNG VON
L. PNEUMOPHILA SEROGRUPPE 5 STAEMMEN.96
4.5.4 TYPISIERUNG WEITERER
LEGFANELLA-ARTEN.97
4.6 NACHWEIS NOSOKOMIALER INFEKTIONEN UND VERBREITUNG DER NOSOKOMIALEN
STAEMME (L.
PNEUMOPHILA SEROGRUPPE 1).99
4.6.1 NACHWEIS NOSOKOMIALER LEGIONELLENSTAEMME IM WASSERSYSTEM
VON ZAHNAERZTLICHEN BEHANDLUNGSEINHEITEN.99
4.6.2 UNTERSUCHUNG WEITERER, EPIDEMIOLOGISCH UNABHAENGIGER,
STANDORTE.102
4.7 VERBREITUNG VON SUBTYPEN -
KONSTANZ UND VARIABILITAET VON LEGIONELLENPOPULATIONEN.103
4.8 NACHWEIS VON AMOEBEN IM WASSERSYSTEM EINES KRANKENHAUSES
MIT LEGIONELLOSEN UND BEDEUTUNG VON AMOEBEN FUER DIE PRAESENZ
VON LEGIONELLEN. 106
4.9 BEWERTUNG DER DGGE-ANALYSE VON PCR-AMPLIFIKATEN IM HINBLICK
V
AUF DIE CHARAKTERISIERUNG DER LEGIONELLENPOPULATION.111
4.10 DISKUSSION DES INFEKTIONSRISIKOS FUER EINE LEGIONELLENINFEKTION
AUF DER BASIS DER EMITTELTEN LEGIONELLENKONZENTRATIONEN
UND DES AUFTRETENS NOSOKOMIALER STAEMME.114
5. ZUSAMMENFASSUNG.116
6.
LITERATURVERZEICHNIS
118 |
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