Expression des hochaffinen IgE-Rezeptors und ausgewählter allergologisch relevanter Zytokine in RBL-2H3-Zellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
2002
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
4
1.
EINLEITUNG
6
1.1.
DIE
ALLERGISCHE
REAKTION
6
1.1.1.
GESCHICHTLICHER
HINTERGRUND
6
1.1.2.
EINTEILUNG
ALLERGISCHER
IMMUNREAKTIONEN
7
1.1.3.
IGE-VERMITTELTE
REAKTION
VOM
SOFORTTYP
7
1.2.
DER
HOCHAFFINE
IGE-REZEPTOR
(FCERI)
8
1.2.1.
STRUKTUR
8
1.2.2.
INTERAKTION
VON
IGE
UND
FCERI
11
1.2.3.
SIGNALTRANSDUKTION
13
1.2.4.
REGULATION
VON
PRODUKTION
UND
ABBAU
14
1.3.
ZYTOKINPRODUKTION
IN
MASTZELLEN
UND
BASOPHILEN
16
2.
ZIELSETZUNG
18
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
19
3.1.
ZELLKULTUR
19
3.2.
STIMULATION
20
3.3.
HEXOSAMINIDASE-TEST
23
3.4.
ISOLIERUNG
DER
RNA
25
3.5.
CDNA-SYNTHESE
MIT
OLIGO(DT)-PRIMING
27
3.6.
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTID-PRIMER
28
3.7.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
29
3.7.1.
KONTROLLE
DER
CDNA-SYNTHESE
29
3.7.2.
SEMIQUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
31
3.8.
ELEKTROPHORESE
33
3.8.1.
AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
33
3.8.2.
POLYACRYLAMID-GEL-ELEKTROPHORESE
34
3.9.
AUSWERTUNG
VON
POLYACRYLAMID-GELEN
MIT
HILFE
VON
IMAGEQUANT
36
2
SEITE
4.
ERGEBNISSE
39
4.1.
OPTIMIERUNG
DER
BEDINGUNGEN
IM
STIMULATIONSVERSUCH
39
4.1.1.
STIMULATION
MIT
IGE
UND
ANTI-IGE
39
4.1.2.
STIMULATION
MIT
KALZIUM-IONOPHOR
UND
PHOIBOLESTER
41
4.1.3.
DAUER
DER
STIMULATION
42
4.1.4.
MIKROSKOPISCHE
UEBERPRUEFUNG
DER
STIMULATION
44
4.1.5.
UEBERPRUEFUNG
DER
STIMULATION
DURCH
NACHWEIS
VON
HEXOSAMINIDASE
46
4.2.
ADAPTIERUNG
DER
POLYMERASE-KETTENREAKTION
47
4.2.1.
AMPLIFIZIERUNG
VON
GAPDH
UND
TUBULIN
47
4.2.2.
AMPLIFIZIERUNG
DER
A-,
SS
UND
Y-UNTEREINHEIT
VON
FCERI
49
4.2.3.
AMPLIFIZIERUNG
VON
IL-3,
IL-4,
IL-5,
IL-6,
TNF-A,
TNF-SS
UND
RANTES
52
4.2.4.
BEDINGUNGEN
FUER
DIE
SEMIQUANTITATIVE
PCR
55
4.3.
SEMIQUANTITATIVE
POLYMERASE-KETTENREAKTION
56
4.3.1.
QUANTIFIZIERUNG
VON
GAPDH
UND
TUBULIN
58
4.3.2.
QUANTIFIZIERUNG
DER
A-,
SS- UND
Y-UNTEREINHEIT
VON
FCERI
59
4.3.3.
QUANTIFIZIERUNG
VON
IL-3,
IL-4,
IL-6
UND
TNF-A
61
4.4.
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
MRNA-KONZENTRATIONEN
63
4.4.1.
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
MRN
A-KONZENTRATION
DER
A-,
SS
UND
Y-UNTEREINHEIT
VON
FCERI
63
4.4.2.
ZEITLICHER
VERLAUF
DER
MRNA-KONZENTRATION
VON
IL-3,
IL-4,
IL-6
UND
TNF-A
65
3
SEITE
5.
DISKUSSION
67
5.1.
STIMULATION
67
5.2.
PROBLEMATIK
DER
QUANTITATIVEN
POLYMERASE-KETTENREAKTION
69
5.3.
AMPLIFIZIERUNG
DER
HAUSHALTSGENE
70
5.4.
AMPLIFIZIERUNG
VON
A-,
SS
UND
Y-KETTE
VON
FCSRI
70
5.5.
AMPLIFIZIERUNG
VON
IL-3,
IL-4,
IL-5,
IL-6,
TNF-A,
TNF-SS
UND
RANTES
71
5.5.1.
IL-3
71
5.5.2.
IL-4
72
5.5.3.
IL-5
73
5.5.4.
IL-6
73
5.5.5.
TNF-A
74
5.5.6.
TNF-SS
74
5.5.7.
RANTES
75
5.5.8.
DAS
ZYTOKINMUSTER
VON
RBL
2H3-ZELLEN
75
5.6.
AUSBLICK
76
6.
ZUSAMMENFASSUNG
77
7.
ANHANG
79
7.1.
LITERATURVERZEICHNIS
79
7.2.
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTID-PRIMER
84
7.3.
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
85
7.4.
TABELLENVERZEICHNIS
87
7.5.
LEBENSLAUF
88 |
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