Analysen genetischer Veränderungen in mikrodissezierten Stromaarealen nicht hereditärer humaner Kolorektal- und Mammakarzinome:
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Veröffentlicht: |
2002
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5
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
9
1.1
D
M
FLBROBLASTISCHE
STROM
INVASIVER
KARZINOME
9
12
THEORIEN
ZUR
ENTSTEHUNG
DES
FLBROBLASTISCBEN
TUMORSTROMAS
10
13
ZIEL
DIESER
ARBEIT
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
2.1
MATERIAL
IS
2.1.1
GEWEBE
15
2.1.2
GERAETE
18
2.1.3
ENZYME
20
2.1.4
NUKLEOTIDE
UND
NUKLEINSAEUREN
20
2.1.5
KITS
UND
SEQUENZIERREAGENTIEN
20
2.1.6
LOESUNGEN
UND
PUFFER
21
2.1.7
LOESUNGEN
ZUR
SILBERFAERBUNG
VON
ACRYLAMID-GELEN
23
2.2
METHODEN
24
22.1
MIKRODISSEKTION
24
2.2.2
DNA-EXTRAKTION
26
2.2.3
HETEROZYGOTIEVERLUST
(LOH)
UND
MIKROSATELLITENINSTABILITAETS
(MSI)-ANALYSEN
26
2.2.3.1
PRINZIP
26
2.2.32
UNTERSUCHTE
CHROMOSOMALE
LOCI
UND
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
28
22.3.3
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
28
22.3.4
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
29
22.3.5
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE)
30
22.3.6
SILBERFAERBUNG
DER
POLYACRYLAMIDGELE
30
2.2.4
EINZELSTRANGKONFBRMATIONSPOLYMORPHISMUS
(SSCP)-ANALYSE
32
22.4.1
PRINZIP
32
22.42
AMPLIFIZIERTE
EXONE
DES
7) 53-GENS
UND
VERWENDETE
PRIMER
33
22.4.3
AMPLIFIKATION
DER
7P53-EXONE
34
22.4.4
SSCP-ANALYSE
MITTELS
NICHT
DENATURIERENDER
POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE)
34
22.4.5
ISOLIERUNG
VON
GELBANDEN
SOWIE
ELUTION
UND
REAMPLIFIKATION
DER
DNA
35
22.4.6
AUFREINIGUNG DER
PCR-PRODUKTE
FUER
DIE
SEQUENZIERUNG
35
6
2.2.5
SEQUENZIERUNG
36
22.5.1
PRINZIP
36
22.5.2
SEQUENZIERREAKTION
37
2.2.5.3
SEQUENZIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
39
3.
ERGEBNISSE
40
3.1
LOH
UND
MSI-ANAIYSEN
40
3.1.1
HETEROZYGOTIERATEN
DER
UNTERSUCHTEN
MARKER
40
3.1.2
HAEUFIGKEIT
VON
ALLELVERLUSTEN
IN
DEN
UNTERSUCHTEN
KARZINOMEN
41
3.1.3
MIKROSATELLITENINSTABILITAETEN
(MSI)
IN
DEN
20
KOLOREKTALKARZINOMEN
42
3.1.4
INTRATUMORALER
VERGLEICH
VON
MIKROSATELLITENINSTABILITAETEN
UND
HETEROZYGOTIEVERLUSTEN
IN
EPITHELIALEN
TUMOR
UND
FIBROBLASTISCHEN
STROZNAAREALEN
VON
KOLOREKTALEN
UND
MAMMAKARZINOMEN
43
32
MUTATIONSANALYSEN
DES
TPS3-GM
46
3.2.1
DETEKTION
VON
MUTATIONEN
MITTELS
SSCP
46
3.2.2
SEQUENZIERUNG
48
4.
DISKUSSION
50
4.1
BEDEUTUNG
DES
FIBROBLASTISCHEN
TUMORSTROMAS
FUER
GRUNDLEGENDE
EIGENSCHAFTEN
VON
NEOPLASIEN
50
42
DAS
FIBROBIASTISCHE
TUMORSTROMA
NICHT
HEREDITAERER
KOLOREKTAL-UND
MAMMAKARZINOME
WEIST
GENETISCHE
VERAENDERUNGEN
AUF
52
43
ENTSTEHUNGSMOEGLICHKEITEN
DER
GENETISCHEN
VERAENDERUNGEN
IM
FIBROBLASTISCHEN
STROMA
55
4.3.1
EINFLUSS
VON
KARZINOGENEN
UND
WACHSTUMSFAKTOREN
55
4.32
EPITHEL-MESENCHYM-UEBERGAENGE
(EMT)
56
44
MOEGLICHE
AUSWIRKUNGEN
GENETISCHER
ALTERATIONEN
AUF
DIE
FUNKTIONEN
DES
TUMORSTROMAS
58
5.
ZUSAMMENFASSUNG
60
6.
LITERATURVERZEICHNIS
62
7.
DANKSAGUNG
80
8.
LEBENSLAUF
81 |
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