Molekulare Mechanismen der Butyrat-induzierten Differenzierung von humanen Kolonkarzinomzellen:
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2001
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
DANKSAGUNG
.
I
VERZEICHNIS
DER ABKUERZUNGEN
.
III
VERZEICHNIS
DER
ABBILDUNGEN
.
V
VERZEICHNIS
DER TABELLEN
.
IX
INHALTSVERZEICHNIS
.
XI
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
KURZKETTIGE
FETTSAEUREN
(KKFS)
.
2
1.1.1
PHYSIOLOGIE
DER
KKFS
.
2
1.1.1.1
MUKOSALE
BARRIEREFUNKTION
DES
DARMTRAKTES
.
3
1.1.1.2
PRODUKTION
VON
KKFS
IM
KOLON
.
5
1.1.1.3
INTESTINALE
KONZENTRATIONEN
.
5
1.1.1.4
EINFLUSS
DER
ERNAEHRUNG
AUF
DIE
KKFS-KONZENTRATION
.
6
1.1.1.5
ABSORPTION
VON
KKFS
.
6
1.1.1.6
METABOLISIERUNG
VON
KKFS
.
7
1.1.1.6.1
DER
MEVALONAT-WEG
.
9
1.1.1.6.2
HMG-COA-REDUKTASE-INHIBITOREN
(HRI)
.
12
1.1.1.6.3
STUDIEN
ZUR
WIRKUNG
VON
HRI
IN
DER
KARZINOGENESE
.
14
1.1.2
PATHOPHYSIOLOGISCHE
ASPEKTE
.
15
1.1.2.1
KOLONKARZINOM
.
15
1.1.2.2
WIRKUNGEN
VON
KKFS
AUF
ZELLPROLIFERATION,
-DIFFERENZIERUNG
UND
APOPTOSE
.
17
1.1.3
BUTYRAT
UND
IN-VIVO-TUMORMODELLE
.
22
1.2
5-LIPOXYGENASE
.
23
1.2.1
DER
ARACHIDONSAEURE-STOFFWECHSEL
.
25
1.2.2
KATALYTISCHE
FUNKTIONEN
DER
5-LO
.
26
1.2.3
MECHANISMUS
DER
5-LO-AKTIVIERUNG
.
28
1.2.4
REGULATION
VON
5-LO-EXPRESSION
UND
-AKTIVITAET
.
29
1.2.5
5-LO
UND
DIFFERENZIERUNG
.
30
1.2.5.1
MEDIATOR-UNABHAENGIGE
FUNKTION
DER
5-LO
.
31
1.2.5.2
LIPOXYGENASEN
UND
BUTYRAT
.
32
13
PPARY
.
33
1.3.1
PPAR-ISOFORMEN
UND
IHRE
FUNKTIONEN
.
34
1.3.2
STRUKTUR
DER
PPARS
.
35
1.3.3
LIGANDEN
DER
PPARS
.
36
1.3.4
MECHANISMUS
DER
PPAR-AKTIVIERUNG
.
38
1.3.5
SCHLUESSELFUNKTIONEN
VON
PPARY
.
43
1.3.5.1
PPARY
UND
DIFFERENZIERUNG
.
44
INHALTSVERZEICHNIS
1.3.5.2
PPARY
UND
ZELLZYKLUS
/
APOPTOSE
.
44
1.3.5.3
PPARY
UND
KOLONKARZINOM
.
45
1.3.5.4
ROLLE
VON
PPARY
BEI
INFLAMMATION
UND
ATHEROGENESE
.
46
1.4
FRAGESTELLUNG
.
48
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
49
2.1
CHEMIKALIEN/LOESUNGEN
.
49
2.1.1
ALLGEMEINE
CHEMIKALIEN
.
49
2.1.2
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHEMIKALIEN
.
51
2.1.2.1
PRIMER
.
51
2.1.2.2
REAKTIONSLOESUNGEN
.
52
2.1.3
IMMUNCHEMISCHE
MATERIALIEN
.
54
2.1.3.1
ANTIKOERPER
.
54
2.1.3.1.1
ERSTANTIKOERPER
.
54
2.1.3.1.2
ZWEITANTIKOERPER
.
56
2.1.3.2
REAKTIONSLOESUNGEN
.
56
2.1.4
KIT-SYSTEME
.
58
2.2
GERAETE
.
59
2.2.1
ARBEITSMATERIALIEN
.
59
2.2.2
GERAETE
.
59
2.3
DIE
ZELLLINIE
CACO-2
.
60
2.3.1
MORPHOLOGIE
.
61
2.3.2
CHARAKTERISIERUNG
.
61
2.3.3
AUFNAHME
VON
BUTYRAT
.
63
2.3.4
WIRKUNG
VON
BUTYRAT
.
64
2.4
ZELLKULTURTECHNIK
.
64
2.4.1
KULTIVIERUNG
DER
ZELLEN
.
64
2.4.2
PASSAGIEREN
DER
ZELLEN
.
65
2.5
CYTOTOXIZITAETSTEST
.
66
2.6
ZELLPROLIFERATION
MITTELS
BRDU-TEST
.
66
2.7
ZELLZAHLBESTIMMUNG
MIT
KRISTALLVIOLETT
.
67
2.8
PROTEINBESTIMMUNG
.
.
67
2.9
ZELLDIFFERENZIERUNG
.
68
2.10
RT
KOMPETITIVE
MULTIPLEX-PCR
.
68
2.10.1
RNA-ISOLIERUNG
.
70
2.10.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
(RT-REAKTION)
.
70
2.10.3
KONSTRUKTION
DES
INTERNEN
STANDARDS
(KOMPETITOR)
.
70
2.10.4
KOMPETITIVE
MULTIPLEX-PCR
.
71
2.10.5
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
72
XII
INHALTSVERZEICHNIS
2.11
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
(WESTERN
BLOT)
.
72
2.12
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
74
2.13
BESTIMMUNG
DER
5-LO-AKTIVITAET
(E.C.
1.13.11.34)
.
75
2.14
ZELLZYKLUSANALYSE
DURCH
DURCHFLUSSCYTOMETRIE
.
76
2.15
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
77
3
ERGEBNISSE
.
78
3.1
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
ZELLPROLIFERATION
UND
-DIFFERENZIERUNG
VON
CACO-2
ZELLEN
78
3.1.1
ZELLPROLIFERATION
UND
ZELLZAHL
NACH
INKUBATION
MIT
BUTYRAT
.
79
3.1.2
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
DIE
ZELLDIFFERENZIERUNG
.
79
3.1.3
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
DIE
SEKRETION
VON
TGF-SS
.
82
3.2
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
DIE
5-LIPOXYGENASE
IN
CACO-2
ZELLEN
.
84
3.2.1
GENEXPRESSION
DER
SCHLUESSELENZYME
DES
ARACHIDONSAEURE-STOFFWECHSELS
NACH
INKUBATION
MIT
BUTYRAT
.
84
3.2.2
EXPRESSION
DER
5-LIPOXYGENASE
AUF
PROTEINEBENE
NACH
INKUBATION
MIT
BUTYRAT
.
86
3.2.3
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
DIE
5-LIPOXYGENASE-AKTIVITAET
.
87
3.2.4
EINFLUSS
EINER
HEMMUNG
VON
5-LIPOXYGENASE
UND
CYCLOOXYGENASE-AKTIVITAET
AUF
DIE
ZELLDIFIFERENZIERUNG
.
88
3.3
EINFLUSS
VON
BUTYRAT
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PPARY
IN
CACO-2
ZELLEN
.
90
3.3.1
GENEXPRESSION
DER
PPARS
NACH
INKUBATION
MIT
BUTYRAT
.
90
3.3.2
EXPRESSION
VON
PPARY
AUF
PROTEINEBENE
NACH
INKUBATION
MIT
BUTYRAT
.
92
3.3.3
EINFLUSS
EINER
AKTIVIERUNG
VON
PPARY
AUF
DIE
DIFFERENZIERUNG
VON
CACO-2
ZELLEN
.
96
3.4
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
PROLIFERATION,
DIFFERENZIERUNG
UND
APOPTOSE
IN
CACO-2
ZELLEN
.
98
3.4.1
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
DIE
ZELLZAHL
.
98
3.4.2
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
DEN
ZELLZYKLUS
.
102
3.4.3
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
ZELLZYKLUSRELEVANTE
PROTEINE
.
104
3.4.4
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
DIE
DIFFERENZIERUNG
.
109
3.4.5
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
DIE
APOPTOSE
.
110
3.4.6
EINFLUSS
VON
MEVASTATIN
AUF
DIE
EXPRESSION
VON
PPARY
.
110
4
DISKUSSION
.
113
4.1
DAS
CACO-2
ZELLKULTURMODELL
.113
4.2
MOEGLICHE
MECHANISMEN
DER
BUTYRAT-EFFEKTE
.
113
4.3
BEDEUTUNG
DER
5-LO
BEI
DER
ZELLDIFFERENZIERUNG
.116
4.4
PPARY
UND
KOLONKARZINOM
.
119
4.4.1
PPARY
-
PRO
ODER
ANTITUMORGEN?
.
120
4.4.2
PPARY
UND
DIFFERENZIERUNG
.
123
XIII
INHALTSVERZEICHNIS
4.4.3
INTERAKTION
VON
LO
UND
PPARY
.
124
4.4.4
PPARS
-
MOEGLICHER
MECHANISMUS
ZUR
WIRKUNG
DER
NSAR
.
128
4.5
MEVASTATIN
.
131
4.5.1
MECHANISMEN
DER
MEVASTATIN-EFFEKTE
.
131
4.5.1.1
ZELLZYKLUS
.
132
4.5.1.2
ZELLDIFFERENZIERUNG
.
134
4.5.1.3
APOPTOSE
.
134
4.5.1.4
BETEILIGUNG
VON
K-RAS
.
135
4.5.2
MEVASTATIN-KONZENTRATIONEN
.
136
4.5.3
MEVASTATIN
-
ABSCHLIESSENDE
BEURTEILUNG
.
137
4.6
DIE
ROLLE
DER
ZELLZYKLUSINHIBITOREN
BEI
DER
DIFFERENZIERUNG
.
137
4.6.1
P21
WAFL/C
'P
1
.
:
.
138
4.6.2
P27
K
"
1
.
139
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
142
6
LITERATUR
.
144
LEBENSLAUF
EHRENWOERTLICHE
ERKLAERUNG
XIV |
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