Lipiddynamik in der Plasmamembran von humanen Knochenzellen:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1 EINLEITUNG 3
1.1 DAS KNOCHENGEWEBE 3
1.1.1 DAS KNOCHEN REMODELING 3
1.1.2 DIE REIFUNG DER KNOCHENMATRIX 4
1.2 DIE GRUNDSTRUKTUR BIOLOGISCHER MEMBRANEN 8
1.2.1 TRANSVERSALE DYNAMIK VON LIPIDEN IN DER PLASMAMEMBRAN 9
1.2.2 BEDEUTUNG DER AMINOPHOSPHOLIPIDTRANSLOKASE UND DER ASYMMETRISCHEN
VERTEILUNG DER
PHOSPHOLIPIDE IN DER PLASMAMEMBRAN 13
1.2.3 BEDEUTUNG DER TRANSVERSALEN DYNAMIK VON LIPIDEN WAEHREND DER
MINERALISIERUNG IM
KNOCHENGEWEBE 16
1.3 LATERALE DYNAMIK VON LIPIDEN IN DER PLASMAMEMBRAN 19
1.3.1 BEDEUTUNG DER LATERALEN DYNAMIK VON LIPIDEN IN KNOCHENZELLEN 25
2 ZIELSTELLUNG 27
3 MATERIAL UND METHODEN 28
3.1 MATERIALIEN 28
3.2 ZELLKULTIVIERUNG VON HUMANEN PRIMAEREN OSTEOBLASTEN, OSTEOKLASTOMEN
UND
OSTEOSARKOMZELLEN 29
3.3 ISOLATION VON MATRIXVESIKELN 29
3.4 ELEKTRONENMIKROSKOPIE VON MATRIXVESIKELN 30
3.5 LIPIDISOLATION UND PHOSPHOLIPIDBESTIMMUNG 31
3.6 ERMITTLUNG DES ATP- GEHALTES DER OSTEOBLASTEN UND MATRIXVESIKEL 31
3.7 BESTIMMUNG DES CHOLESTEROIGEHALTES IN OSTEOBLASTEN UND MV 31
3.8 UNTERSUCHUNG DER LIPIDZUSAMMENSETZUNG VON OSTEOBLASTEN UND
MATRIXVESIKELN MITTELS
MALDI-TOF MS 32
3.9 UNTERSUCHUNG DER PHOSPHOLIPIDZUSAMMENSETZUNG MITTELS
31P NMR 33
3.10 UMVERTEILUNG VON SPIN-MARKIERTEN PHOSPHOLIPIDANALOGA IN DER
PLASMAMEMBRAN HUMANER
OSTEOBLASTEN 33
3.11 UNTERSUCHUNG DER EINWAERTSBEWEGUNG VON FLUORESZENZ-MARKIERTEN
ANALOGA IN ADHAERENTEN
OSTEOBLASTEN UND OSTEOKLASTEN 34
3.12 BESTIMMUNG DER EINWAERTSBEWEGUNG VON FLUORESZENZ-MARKIERTEN
PHOSPHOLIPIDANALOGA IN
DER MEMBRAN VON MATRIXVESIKELN 35
3.13 ANALYSE DES METABOLISMUS DER FLUORESZENZ-MARKIERTEN
PHOSPHOLIPIDANALOGA 35
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
3.14 ATP VERARMUNG VON OSTEOBLASTEN 36
3.15 CHOLESTEROLVERARMUNG VON ADHAERENTEN ZELLEN 36
3.16 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET DER ALKALISCHEN PHOSPHATASE 37
4 ERGEBNISSE 38
4.1 CHARAKTERISIERUNG DES VERWENDETEN IN VITRO SYSTEMS ZUR UNTERSUCHUNG
DER MV BILDUNG
DURCH OSTEOBLASTEN 38
4.1.1 DIFFERENZIERUNG HUMANER OSTEOBLASTEN IN MONOLAYERKULTUR 38
4.1.2 IN VITRO BILDUNG VON MV DURCH HUMANE OSTEOBLASTEN IN
MONOLAYERKULTUR 39
4.2 CHARAKTERISIERUNG DER LIPIDZUSAMMENSETZUNG IN OSTEOBLASTEN UND
MATRIXVESIKELN 42
4.2.1 PHOSPHOLIPIDBESTIMMUNG AN OSTEOBLASTEN UND MATRIXVESIKELN 42
4.2.3 UNTERSUCHUNG DER LIPIDZUSAMMENSETZUNG IN VITRO KULTIVIERTER
OSTEOBLASTEN IN ABHAENGIGKEIT
DES DIFFERENZIERUNGSZUSTANDES MITTELS MALDI-TOF MS 43
4.2.4 UNTERSUCHUNG DER LIPIDZUSAMMENSETZUNG IN MATRIXVESIKELN MITTELS
MALDI-TOF MS 49
4.2.5 UNTERSUCHUNG DER LIPIDZUSAMMENSETZUNG IN OSTEOBLASTEN UND
MATRIXVESIKELN MITTELS 31P
NMR 52
4.3 TRANSVERSALE LIPIDDYNAMIK IN OSTEOBLASTEN UND MATRIXVESIKELN 54
4.3.1 EINWAERTSBEWEGUNG VON SPIN-MARKIERTEN PHOSPHOLIPIDANALOGA IN
HUMANEN OSTEOBLASTEN 54
4.3.2 EINWAERTSBEWEGUNG VON SPIN-MARKIERTEN PHOSPHOLIPIDANALOGA IN
ZELLSUSPENSION PRIMAERER
HUMANER OSTEOBLASTEN AUS EINEM OSTEOPOROTISEHEN KNOCHEN UND HUMANER
OSTEOSARKOMZELLEN 58
4.3.3 FLUORESZENZMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER VERTEILUNG VON
LIPIDANALOGA IN OSTEOBLASTEN-
MONOLAYERKULTUREN 59
4.3.4 VERTEILUNG VON FLUORESZENZ-MARKIERTEN PHOSPHOLIPIDANALOGA IN
ADHAERENTEN HUMANEN
OSTEOKLASTOMZELLEN 62
4.3.5 EINWAERTSBEWEGUNG VON FLUORESZENZ-MARKIERTEN PHOSPHOLIPIDANALOGA IN
ISOLIERTEN KNOCHEN-
MATRIXVESIKELN 64
4.4 LATERALE LIPIDDYNAMIK UND MATRIXVESIKELBILDUNG 68
4.4.1 EINFLUSS VON METHYL-SS-CYCLODEXTRIN AUF DIE MORPHOLOGIE, ADHAERENZ
UND PROLIFERATION VON
HUMANEN OSTEOBLASTEN 68
4.4.2 EINFLUSS VON METHYL-SS-CYCLODEXTRIN AUF DEN ATP-GEHALT DER
OSTEOBLASTEN 68
4.4.3 EINFLUSS VON METHYL-SS-CYCLODEXTRIN AUF DEN CHOLESTEROLGEHALT
ADHAERENTER OSTEOBLASTEN 69
4.4.4 EINFLUSS DER CHOLESTEROLVERARMUNG AUF DIE ALP-AKTIVITAET IN DEN
MATRIXVESIKELN 70
5 DISKUSSION 72
5.1 TRANSVERSALE LIPIDDYNAMIK IN KNOCHENZELLEN 72
5.2 TRANSVERSALE LIPIDDYNAMIK IN MATRIXVESIKELN 78
5.3 LATERALE LIPIDDYNAMIK IM PROZESS DER MATRIXVESIKELBILDUNG 80
5.4 MODEL ZUM MECHANISMUS DER ABSCHNUERUNG DER KNOCHEN-MV VON DER
PLASMAMEMBRAN 84
6 AUSBLICK 88
7 LITERATUR 90
2 |
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