Alpha-Glucan-Phosphorylasen aus Weizen (Triticum aestivum L.): Isolierung, Charakterisierung und Analyse der Expression
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| Format: | Buch |
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2002
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| Beschreibung: | Bayreuth, Univ., Diss., 2002. - Auch als Online-Diss. mit der URL: http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:703-opus-128 |
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I
NHALTSVERZEICHNIS
1
INHALT
INHALT
I
ABKUERZUNGEN
IV
I
EINLEITUNG
1
1.1
S
TAERKE
UND
S
TAERKEMETABOUSMUS
1
I.2
P
FLANZLICHE
A-1
,4-G
LUCAN
-P
HOSPHORYLASEN
6
1.3
A-1
,4-G
LUCAN
-P
HOSPHORYLASEN
AUS
W
EIZEN
9
1.4
Z
IELSETZUNG
11
II
MATERIAL
UND
METHODEN
12
11.1
I
11.1.1
11.1.2
11.1.3
11.1.4
11.1.5
11.2
I
11.2.1
IL.2.2
11.2.2.1
II.2.2.2
II.2.2.3
IL.2.2.4
IL.2.2.5
LI.2.3
11.2.3.1
II.2.3.2
11.2.3.2.1
II.2.3.2.2
IL.2.3.3
II.
2.3.4
LI.2.3.5
II.2.3.6
11.2.3.7
11.2.3.8
11.2.3.9
11.2.3
10
11.2.3.11
M
ATERIAL
PFLANZENMATERIAL
BAKTERIENSTAEMME
UND
VEKTOREN
OLIGONUKLEOTIDPRIMER
CHEMIKALIEN
UND
VERBRAUCHSMITTEL
COMPUTERPROGRAMME
M
ETHODEN
ANZUCHT
UND
ERNTE
DES
PFLANZENMATERIALS
BAKTERIENANZUCHT
NAEHRMEDIEN
UEBER-NACHT-KULTUR
DAUERKULTUREN
KULTUREN
ZUR
HETEROLOGEN
EXPRESSION
VON
PHOSPHORYLASE-CDNA
BESTIMMUNG
DER
OPTISCHEN
DICHTE
VON
BAKTERIENKULTUREN
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
PUFFER
UND
LOESUNGEN
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
!
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
MIT
PLASMID-DNA
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E
COLI
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
ETHANOLPRAEZIPITATION
VON
DNA
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
DNA
UND
ELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
DNA-SEQUENZIERUNG
PCR-AMPLIFIKATIONEN
12
12
12
13
14
15
15
15
16
16
16
16
17
17
17
17
18
18
18
19
19
19
20
20
21
21
21
22
11.2.3.11.1
PCR-AMPLIFIKATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
22
11.2.3.11.2
PCR
ZUR
EINFUEHRUNG
VON
SCHNITTSTELLEN
22
II.2.3.
11.3
PCR
ZUR
AMPLIFIZIERUNG
VON
CDNA-ENDEN
("RACE,
RAPID
AMPLIFICATION
OF
CDNA-ENDS")
23
11.2.3.12
ISOLIERUNG
VON
POLYA*-RNA
AUS
WEIZENBLAETTERN
24
11.2.3.13
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNA
25
11.2.3.14
CDNA-BANK-HERSTELLUNG
UND
SCREENING
25
LI.2.3
14.1
CDNA-SYNTHESE
25
II.2.3
14.2
NICHT-DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
FUER
DNA
25
11.2.3.14.3
LIGATION
DER
CDNA
IN
DEN
UNI-ZAP
XR-VEKTOR
UND
VERPACKUNG
IN
DIE
X-PHAGEN
25
H
I
NHALTSVERZEICHNIS
11.2.3.14.4
TITERBESTIMMUNG,
AMPLIFIZIERUNG
UND
AUSPLATTIEREN
DER
CDNA-BANK
26
112.3.14.5
SCREENING
DER
CDNA-BANK
27
II.
2.3.14.6
IN
V/VO-EXCISION
DES
PHAGEMIDS
PBLUESCRIPT
AUS
X-UNI-ZAP
XR
28
11.2.3.15
NORTHEMBLOT-ANALYSE
28
11.2.3.15.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
28
11.2.3.15.2
DENATURIERENDE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
VON
RNA
29
11.2.3.15.3
TRANSFER
VON
RNA
AUF
NYLONMEMBRANEN
(NORTHEMBLOT)
29
11.2.3.15.4
HYBRIDISIERUNG
UND
RADIOAUTOGRAPHIE
30
11.2.3.15.5
MARKIERUNG
DER
DNA-SONDEN
30
II.2.4
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
30
11.2.4.1
HERSTELLUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
30
11.2.4.1.1
EXTRAKTION
VON
PROTEIN
AUS
WEIZENBLAETTEM
30
11.2.4.1.2
EXTRAKTION
VON
PROTEIN
AUS
WEIZENKOEMEM
31
11.2.4.1.3
AUFSCHLUSS
VON
E.
CO/L-ZELLEN
31
11.2.4.2
SAEULENCHROMATOGRAPHISCHE
VERFAHREN
YY
31
11.2.4.2.1
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AN
CYCLOHEPTAAMYLOSE
31
II.2.4
2.2
RECHROMATOGRAPHIE
AN
CYCLOHEPTAAMYLOSE
32
II.2.4.2.3
CHROMATOGRAPHIEN
ZUR
REINIGUNG
DER
PLASTIDISCHEN
PHOSPHORYLASE
32
II.2.4
3
ENTSALZUNG,
KONZENTRIERUNG
UND
LAGERUNG
VON
PROBEN
34
II.2.4.4
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESEN
(PAGE)
34
11.2.4.4.1
ANALYTISCHE
PAGE
ZUM
NACHWEIS
VON
PHOSPHORYLASEAKTIVITAET
34
11.2.4.4.2
DENATURIERENDE
PAGE
35
11.2.4.4.3
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
37
11.2.4.5
WESTERNBLOT
38
11.2.5
ANALYTISCHE
METHODEN
39
11.2.5.1
PROTEINANALYTIK
39
11.2.5.1.1
PROTEINBESTIMMUNG
39
11.2.5.1.2
PROTEINSPALTUNG
39
11.2.5.1.3
SEQUENZIERUNG
DES
N-TERMINUS
40
II.2.5.2
BESTIMMUNG
VON
ENZYMAKTIVITAETEN
40
11.2.5.2.1
BESTIMMUNG
DER
ABBAUENDEN
AKTIVITAET
DER
PHOSPHORYLASE
40
II.
2.5.2.2
MESSUNG
DER
SYNTHETISIERENDEN
AKTIVITAET
DER
PHOSPHORYLASE
43
II.2.5.3 BESTIMMUNG
VON
KOHLENHYDRATEN
44
II.2.6
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
45
11.2.6.1
ANTIKOERPERHERSTELLUNG
45
II.2.6.2
IMMUNNACHWEIS
DER
PHOSPHORYLASE
NACH
WESTEMBLOTTING
45
II.2.6.3
KOLONIEBLOT
46
III
ERGEBNISSE
48
HI.1
R
EINIGUNG
DER
P
HOSPHORYLASEPROTEINE
AUS
W
EIZENBLAETTERN
48
III.
1.1
REINIGUNG
DER
CYTOSOLISCHEN
PHOSPHORYLASEN
48
III.
1.1.1
ISOLIERUNG
VON
ZWEI
PROTEINEN
DURCH
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AN
CYCLOHEPTAAMYLOSE-SEPHAROSE
48
111.1.1.2
TRENNUNG
DES
90
KD-UND
DES
100
KD-PROTEINS
51
III.
1.1.3
IST
DAS
100
KD-PROTEIN
EINE
PHOSPHORYLASE?
54
III.
1.1.4
BILANZ
DER
REINIGUNG
DER
CYTOSOLISCHEN
PHOSPHORYLASE
57
III.
1.2
REINIGUNG
DER
PLASTIDISCHEN
PHOSPHORYLASE
58
LTL.2
C
HARAKTERISIERUNG
DER
CYTOSOLISCHEN
P
HOSPHORYLASE
AUS
W
EIZENBLAETTERN
60
111.2.1
MOLEKULARGEWICHTSBESTIMMUNG
61
IH.2.2
AKTIVITAET
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
SUBSTRAT
61
111.2.3
AKTIVITAET
IN
ABHAENGIGKEIT
VOM
PH-WERT
64
INHALTSVERZEICHNIS
111.2.4
III.2.5
III.
3
111.4
III.
4.1
III.4.2
III.4.3
III.4.4
III.4.5
III.
5
III.
5.1
III.5.2
III.5.3
III.5.4
EINFLUSS
VON
THIOLEN
65
EINFLUSS
DES
100
KD-PROTEINS
AUF
DIE
CYTOSOLISCHE
PHOSPHORYLASE
65
G
EWINNUNG
VON
A
NTIKOERPERN
GEGEN
DIE
CYTOSOLISCHE
P
HOSPHORYLASE
65
ISOLIERUNG
VON
CDNAS
VON
PHOSPHORYLASEGENEN
68
KONSTRUKTION
EINER
PHOSPHORYLASESONDE
68
CDNA-BANK-HERSTELLUNG
UND
ISOLIERUNG
VON
PHOSPHORYLASEKLONEN
70
DIE
CYTOSOLISCHE
PHOSPHORYLASE
71
UNTERSUCHUNG
DES
5'-ENDES
DER
SEQUENZ
DER
CYTOSOLISCHEN
PHOSPHORYLASE
72
DIE
PLASTIDISCHE
PHOSPHORYLASE
74
A
KTIVITAETS
-
UND
E
XPRESSIONSANALYSEN
81
ABHAENGIGKEIT
DER
PHOSPHORYLASEAKTIVITAET
VOM
BLATTALTER
81
TAGESGANG
DER
PHOSPHORYLASEAKTIVITAET
IM
BLATT
82
AKTIVITAET
UND
EXPRESSION
DER
PHOSPHORYLASEN
WAEHREND
DER
KEIMUNG
82
AKTIVITAET
UND
EXPRESSION
DER
PHOSPHORYLASEN
WAEHREND
DER
KORNENTWICKLUNG
84
IV
IV.1
IV.1.1
IV.
1.2
IV.2
IV.2.1
IV.2.
2
IV.3
IV.
4
IV.4.1
IV.4.2
IV.5
IV.5.1
IV.5.2
DISKUSSION
89
R
EINIGUNG
89
DIE
CYTOSOLISCHE
PHOSPHORYLASE
-
89
DIE
PLASTIDISCHE
PHOSPHORYLASE
94
C
HARAKTERISIERUNG
DER
GEREINIGTEN
CYTOSOLISCHEN
P
HOSPHORYLASE
96
CHARAKTERISIERUNG
DES
PROTEINS
96
CHARAKTERISIERUNG
DER
AKTIVITAET
DER
CYTOSOLISCHEN
PHOSPHORYLASE
98
A
NTIKOERPER
102
ISOLIERUNG
VON
CDNAS
VON
PHOSPHORYLASEGENEN
103
CDNAS
CYTOSOLISCHER
PHOSPHORYLASEN
103
CDNAS
PLASTIDISCHER
PHOSPHORYLASEN
106
A
KTIVITAET
UND
E
XPRESSION
110
AKTIVITAET
UND
EXPRESSION
DER
CYTOSOLISCHEN
PHOSPHORYLASE
110
AKTIVITAET
UND
EXPRESSION
DER
PLASTIDISCHEN
PHOSPHORYLASE
113
V
ZUSAMMENFASSUNG
117
VI
SUMMARY
119
VII
LITERATURVERZEICHNIS
121
IX
IX.1
IX.2
ANHANG
132
H
ETEROLOGE
E
XPRESSION
DER
CYTOSOLISCHEN
P
HOSPHORYLASE
132
P
HOSPHORYLASESEQUENZEN
AUS
W
EIZEN
S
TAR
135 |
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| spelling | Schupp, Nicole Verfasser (DE-588)124305873 aut Alpha-Glucan-Phosphorylasen aus Weizen (Triticum aestivum L.) Isolierung, Charakterisierung und Analyse der Expression vorgelegt von Nicole Schupp 2002 VI, 140 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Bayreuth, Univ., Diss., 2002. - Auch als Online-Diss. mit der URL: http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:bvb:703-opus-128 Weizen (DE-588)4065287-7 gnd rswk-swf Phosphorylase (DE-588)4359674-5 gnd rswk-swf Genklonierung (DE-588)4123275-6 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Weizen (DE-588)4065287-7 s Phosphorylase (DE-588)4359674-5 s DE-604 Genklonierung (DE-588)4123275-6 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=010102440&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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