Funktionelle Charakterisierung des Tumor-assoziierten epithelialen Zelladhäsionsmoleküls EpCAM:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
2002
|
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| Beschreibung: | München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 2002 |
| Beschreibung: | 121 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1
KARZINOGENESE.
1
1.2
DAS
HUMANE
EPITHELIALE
ZELLADHAESIONS
MOLEKUEL
(EPCAM)
.
6
1.2.1
DAS
EPCAM
GEN
.
7
1.2.2
DIE
G
A
733-GENFAMILIE
.
8
1.2.3
DAS
EPCAM-PROTEIN
.
10
1.2.4
DAS
EXPRESSIONSMUSTER
VON
EPCAM
.
13
1.2.4.1
EPCAM
IN
GESUNDEN
GEWEBEN
.
13
1.2.4.2
DIE
EPCAM-EXPRESSION
IN
KARZINOMEN
.
14
1.2.5
DIE
FUNKTION
VON
EPCAM
.
15
1.3
ZIELSETZUNG
.
17
2.
MATERIAL
.
19
2.1
ANTIKOERPER
.
19
2.2
BAKTERIEN
.
19
2.3
CHEMIKALIEN,
GERAETE
UND
SONSTIGES
.
19
2.3.1
SONSTIGE
REAGENZIEN
.
20
2.3.2
VERBRAUCHSMATERIALIEN
.
21
2.3.3
GERAETE
.
21
2.3.4
DIENSTLEISTUNGEN
.
22
2.4
PLASMIDE
.
23
2.5
ZELLINIEN
.
24
3.
METHODEN
.
25
3.1
AGAROSE
GELELEKTROPHORESE
.
25
3.2 AUFBEWAHRUNG
UND
KULTIVIERUNG
PERMANENTER
ZELLLINIEN
.
25
3.3
BAKTERIENKULTUR
.
26
3.3.1
VERMEHRUNG
UND
AUFBEWAHRUNG
.
26
3.3.2
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
.
26
3.4
FACS-ANALYSEN
.
27
3.4.1
BESTIMMUNG
DER
OBERFLAECHENEXPRESSION
EINES
PROTEINS
.
27
3.4.2
CMFDA-PROLIFERATIONSANALYSEN
.
27
3.5
BESTIMMUNG
DER
GLYOXALASE
I
(GLOX
I)
ENZYMAKTIVITAET
.
28
3.6
IMMUNOBLOTS
.
28
3.7
MTT
ASSAY
(MOSMANN
1983)
.
29
3.8 PRAEPARATIVE
PLASMIDAUFARBEITUNG
.
29
3.9
RNA-ARBEITSTECHNIKEN
.
29
INHALTSVERZEICHNIS
3.9.1
ISOLIERUNG
VON
RNA
.
29
3.9.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
SONDEN
.
30
3.9.3
NUKLEAERE
RUN-ON
EXPERIMENTE
.
30
3.10
SOFT-AGAROSE
EXPERIMENTE
.
31
3.11
SONSTIGE
DNA/RNA
ARBEITSTECHNIKEN
.
32
3.12
TRANSFEKTIONEN
.
32
3.13
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
UND
ZELLTEILUNGSRATE
.
32
3.14
ZWEI-DIMENSIONALE
POLYACRYLAMIDGELELEKROPHORESE
(2D-PAGE)
.
33
3.14.1
L.DIMENSION:
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
.
33
3.14.2
2.DIMENSION:
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.
34
3.14.3
MATRIX
ASSISTED
LASER
DESORPTION
IONISATION
TIME-OF-FLIGHT
ANALYSE
(MALDI-TOF)
.
36
3.14.3.1
TRYPSIN-VERDAU
.
36
3.14.3.2
BESCHICHTEN
MIT
DHB
MATRIX
(2,5-DIHYDROXYBENZOESAEURE)
.
37
3.14.3.3
MALDI-TOF
ANALYSE
.
37
4.
ERGEBNISSE
.
38
4.1
ETABLIERUNG
ZELLULAERER
SYSTEME
ZUR
FUNKTIONELLEN
ANALYSE
VON
EPCAM
UND
DIE
EPCAM-VERMITTELTEN
EFFEKTE
IN
DIESEN
SYSTEMEN
.
39
4.1.1
KONSTITUTIVE
EPCAM-EXPRESSION
IN
HUMANEN
EMBRYONALEN
HEK293
NIERENZELLEN
.
39
4.1.2
EPCAM
VERMITTELT
HEK293-ZELLEN
WACHSTUMSVORTEILE
UND
EINEN
ERHOEHTEN
METABOLISMUS
.
41
4.1.3
KONSTITUTIVE
EPCAM-EXPRESSION
IN
NIH3T3-FIBROBLASTEN
.
44
4.1.4
EPCAM
INDUZIERT
WACHSTUMSVORTEILE
UND
EINEN
ERHOEHTEN
METABOLISMUS
IN
NIH3T3-FIBROBLASTEN
.
46
4.2
INHIBITION
DER
EPCAM-EXPRESSION
IN
KARZINOMZELLLINIEN
.
48
4.2.1
GENERIERUNG
EPCAM
NEGATIVER
KARZINOMZELLLINIEN
MITTELS
KOMPLEMENTAERER
MRNA
.
48
4.2.2
DIE
INHIBIERUNG
VON
EPCAM
IN
ANT-1
KARZINOMZELLEN
HAT
EINEN
STARKEN EINFLUSS
AUF
WACHSTUM,
METABOLISMUS
UND
MORPHOLOGIE
.
50
4.3
IDENTIFIKATION
EPCAM-REGULIERTER
GENE
MITTELS
NUKLEAERER
RUN-ON
EXPERIMENTE
.
55
4.3.1
EPCAM
INDUZIERT
DAS
ONKOGEN
C-MYC
.
57
4.3.2
ERHOEHTE
C-MYC
EXPRESSION
NACH
KONSTITUTIVER
EPCAM-EXPRESSION
IN
HEK293-ZELLEN
.
58
4.3.3
ETABLIERUNG
EINES
ZELLULAEREN
SYSTEM
ZUR
KONDITIONALEN
EXPRESSION
VON
EPCAM
IN
HEK293-ZELLEN
.
60
4.3.4
SCHNELLE
INDUKTION
VON
C-MYC
DURCH
EPCAM
IN
HEK293-ZELLEN
.
62
4.3.5
INDUKTION
VON
CYCLIN A
UND
E
NACH
EPCAM-EXPRESSION
IN
HEK293
ZELLEN
.
64
INHAL
TSVERZEICHNIS
4.4
IDENTIFIKATION
EPCAM-REGULIERTER
PROTEINE
MITTELS
ZWEI-DIMENSIONALER
GELELEKTROPHORESE
(2D-PAGE)
UND
MATRIX
UNTERSTUETZTER
LASER
DESORPTION
IONISATION
MASSENSPEKTROMETRIE
(MALDI-TOF)
.
66
4.4.1
ETABLIERUNG
DER
ZWEI-DIMENSIONALEN
GELELEKTROPHORESE
MIT
DEN
HEK293
UND
KARZINOMZELLLINIEN
.
67
4.4.2
UEBEREXPRESSION
VON
E-FABP
IN
DEN
EPCAM-EXPRIMIERENDEN
HEK293-
TRANSFEKTANTEN
.
71
4.4.3
SCHNELLE
INDUKTION
VON
E-FABP
DURCH
EPCAM
IN
HEK293
TRANSFEKTANTEN
.
73
4.4.4
DIE
EXPRESSION
VON
EPCAM
UND
E-FABP
KORRELIERT
IN
KARZINOMZELLLINIEN76
4.4.5
EPCAM
UND
E-FABP
IN
PRIMAERTUMOREN
.
77
4.4.6
EPCAM
AKTIVIERT
DAS
GLYKOLYSE
ENZYM
GLYOXALASE
I
IN
HEK293-ZELLEN
.
78
4.5 SOFT-AGAROSE
EXPERIMENTE
.
82
4.5.1
EPCAM
ERHOEHT
UND
BESCHLEUNIGT
DIE
KOLONIEBILDUNG
VON
HEK293-ZELLEN
IN
SOFT-AGAROSE
.
82
4.5.2
KOLONIEBILDUNG
VON
EPCAM-POSITIVEN
NIH3T3-FIBROBLASTEN
IN
SOFT
AGAROSE
.
84
4.6
DAS
GLYKOSYLIERUNGSMUSTER
VON
EPCAM
.
85
4.6.1
EPCAM
IN
KARZINOMZELLLINIEN
.
86
4.6.2
EPCAM
IN
GESUNDEM
UND
TUMORGEWEBE
.
87
5.
DISKUSSION
.
89
5.1
EPCAM-VERMITTELTE
EFFEKTE
AUF
ZELLMORPHOLOGIE,
-WACHSTUM
UND
METABOLISMUS
.
90
5.2
EPCAM-INHIBIERUNG
IN
KARZINOMZELLLINIEN
.
91
5.3 EPCAM-REGULIERTE
GENE
UND
-VERMITTELTE
EFFEKTE
.
93
5.4
EPCAM:
EIN
ONKOGEN?
.
101
5.5 EPCAM
IN
GESUNDEM
EPITHEL
UND
KARZINOMEN
.
103
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
105
7.
LITERATUR
.
107
ABKUERZUNGEN
.
120 |
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